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操作流程:
(1)待測(cè)樣品孔中每孔加入待測(cè)樣品100μl,每種樣品設(shè)3個(gè)平行孔;設(shè)兩個(gè)陰性對(duì)照孔,每孔加未處理組的細(xì)胞裂解液100μl;另設(shè)一個(gè)空白對(duì)照孔,加入純細(xì)胞裂解液100μl。
(2)酶標(biāo)板置4℃,包被過(guò)夜。
(3)洗板:吸干孔內(nèi)反應(yīng)液,用洗滌液過(guò)洗一遍(將洗滌液注滿板孔后,即甩去),之后將洗滌液注滿板孔,浸泡1-2分鐘,間歇搖動(dòng)。甩去孔內(nèi)液體后在吸水紙上拍干。重復(fù)洗滌3-4次。
(4)陰性對(duì)照孔每孔加入PBS 50μl,樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人AIF抗體工作液50μl。
(5)酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi),孵育60min。
(6)洗板,同(4)。
(7)每孔加1:5000稀釋的HRP-標(biāo)記的山羊抗兔抗體工作液 100μl。
(8)酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi),孵育60min。
(9)洗板,同(4)。
(10)每孔加TMB顯色液 100μl,輕輕混勻10s,置37℃暗處反應(yīng)15-20min。
(11)每孔加100μl 2mol/L H2SO4終止反應(yīng)。
(12)分別測(cè)450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2,終測(cè)得的OD值為兩者之差(W1-W2),以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。
(13)數(shù)據(jù)處理:在得出標(biāo)本(S)和陰性對(duì)照(N)的 OD值后,計(jì)算S/N值。S/N≥2.1為陽(yáng)性判定標(biāo)準(zhǔn)。
產(chǎn)品名稱 |
英文名稱 |
貨號(hào) |
EFNA1人肝配蛋白A1進(jìn)口檢測(cè)試劑盒 |
Human Ephrin A1(EFNA1)ELISA Kit |
PH101990 |
優(yōu)勢(shì)特點(diǎn):產(chǎn)品僅用于科研
1.高效、靈敏、特異的抗體;
2.穩(wěn)定的重復(fù)性和可靠性;
3.吸附性能好,空白值低,孔低透明度高的固相載體;
4.使用血清、血漿、組織勻漿液、細(xì)胞培養(yǎng)液、尿液、唾液等等多種標(biāo)本類(lèi)型;
5.節(jié)省實(shí)驗(yàn)經(jīng)費(fèi)。
組成及試劑配制 :
1. 酶聯(lián)板:一塊(96孔)
2. 標(biāo)準(zhǔn)品(凍干品):2瓶,每瓶臨用前以樣品稀釋液稀釋至1ml,蓋好后靜置10分鐘以上,然后反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解,其濃度為100 ng/ml,做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋)后,分別稀釋成100 ng/ml,50 ng/ml,25 ng/ml,12.5 ng/ml,6.25 ng/ml,3.12 ng/ml,1.56 ng/ml,樣品稀釋液直接作為標(biāo)準(zhǔn)濃度0 ng/ml,臨用前15分鐘內(nèi)配制。
如配制50 ng/ml標(biāo)準(zhǔn)品:取0.5ml (不要少于0.5ml ) 100 ng/ml的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.5ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類(lèi)推。
3. 樣品稀釋液:1×20ml/瓶。
4. 檢測(cè)稀釋液A:1×10ml/瓶。
5. 檢測(cè)稀釋液B:1×10ml/瓶。
6. 檢測(cè)溶液A:1×120ul/瓶(1:100)臨用前以檢測(cè)稀釋液A 1:100稀釋?zhuān)♂屒案鶕?jù)預(yù)先計(jì)算好的每次實(shí)驗(yàn)所需的總量配制(100ul/孔),實(shí)際配制時(shí)應(yīng)多配制0.1-0.2ml。如10ul檢測(cè)溶液A加990ul檢測(cè)稀釋液A的比例配制,輕輕混勻,在使用前一小時(shí)內(nèi)配制。
7. 檢測(cè)溶液B:1×120ul/瓶(1:100)臨用前以檢測(cè)稀釋液B 1:100稀釋。稀釋方法同檢測(cè)溶液A。
8. 底物溶液:1×10ml/瓶。
9. 濃洗滌液:1×30ml/瓶,使用時(shí)每瓶用蒸餾水稀釋25倍。
10. 終止液:1×10ml/瓶(2N H2SO4)。
樣本實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備:
ELISA試劑盒液體樣本:包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清等。
(1)血清
室溫血液自然凝固10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
(2)血漿:
應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
(3)尿液:
用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實(shí)行。
(4)細(xì)胞培養(yǎng)上清:
檢測(cè)分泌性的成份時(shí),用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。
(5)培養(yǎng)細(xì)胞
檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí),用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細(xì)胞懸液,細(xì)胞濃度達(dá)到100萬(wàn)/ml左右。通過(guò)反復(fù)凍融或加入組織蛋白萃取試劑,以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
(6)組織標(biāo)本
切割標(biāo)本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿化。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測(cè),其余冷凍備用。
乙酸-1-萘酯(>98%,BR)質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR1-Naphthyl acetate 英文名稱MouseCCL26ELISAKit小鼠CCL26規(guī)格:96T/48T 大鼠脂蛋脂酶A2(Lp-PLA2)ELISA試劑盒 ,英文名: Lp-PLA2 ELISA Kit
二十八烷醇(>98%,BR)質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR1-Octacosanol 冰凍切片組織衰老特異性β-半乳糖苷酶原位染色試劑盒50 人抗皮膚抗體(ASA)ELISA檢測(cè)試劑盒HumanAi-SkinAibody,ASAELISAKit 96T/48T
1-苯基-5-巰基四氮唑(>98.5%,BR)質(zhì)量規(guī)格:>98.5%,BR1-Phenyl-1H-tetrazole-5-thiol RatEotaxin1ELISA試劑盒大鼠嗜酸粒細(xì)胞趨化蛋白Eotaxin1(Eotaxin1/CCL11)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 大鼠白細(xì)胞抗原DR(HLA-DR)試劑盒 Rat leukocyte aigen-DR,HLA-DR ELISA kit
新戊二醇(>98%,BR)質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR2,2-Dimethyl-1,3-propanediol 小鼠白介素1β (IL-1β)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝 CLIAKitfoie-2ELISAKit大鼠含球蛋白樣環(huán)和上皮生長(zhǎng)因子樣域酪氨酸激酶2規(guī)格:48T/96T
四丁基化銨(離子對(duì)色譜級(jí))Tetrabutylammonium iodide質(zhì)量規(guī)格:離子對(duì)色譜級(jí) 小鼠氧化低密度脂蛋白(OxLDL)ELISA試劑盒 ,英文名: OxLDL ELISA Kit ELISAKitGHRH羊促生長(zhǎng)釋放規(guī)格:48T/96T
三辛胺(離子對(duì)試劑)Trioctylamine質(zhì)量規(guī)格:離子對(duì)試劑 小鼠己糖激酶(HK)ELISA檢測(cè)試劑盒MouseHexokinase,HKELISAKit 96T/48T Humanc-sisELISAKit人c-sisELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
草酸鈉容量分析用溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)(0.05M) oxalate solution質(zhì)量規(guī)格:0.05M 人集蛋白亞家族成員11(COLEC11)試劑盒 human collectin sub-family member 11,COLEC11 ELISA Kit 人神經(jīng)肽Y(NP-Y)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
剛果紅(分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥97.0%(HPLC))Congo red質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥97.0%(HPLC) RatBone-specificAlkphaseB,ALP-BELISAKit大鼠骨特異性堿性1酸酶B(ALP-B)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 小鼠游離脂肪酸(FFA)試劑盒 Mouse free fatty acids,FFA ELISA Kit
硫酸鈰八水(>97%,BR)質(zhì)量規(guī)格:>97%,BRCerium(III)
sulfate, octahydrate 英文名稱RatC5aELISAKit大鼠補(bǔ)體片斷C5a(C5a)規(guī)格:96T/48T 大鼠腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體4(AIL-R4)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
Br-Mmc (=4-溴甲基-7-甲氧基)(>98.0%(T))質(zhì)量規(guī)格:>98.0%(T)Br-Mmc (=4-Bromomethyl-7-methoxycoumarin) 酒類(lèi)氨熒光定量檢測(cè)試劑盒20 人血管**素4(ANG-4)試劑盒 Human Angiopoietin 4 ELISA Kit
3-溴甲基-7-甲氧基-1,4-苯并惡嗪-2-酮(>98.0%(T))質(zhì)量規(guī)格:>98.0%(T)3-Bromomethyl-7-methoxy-1,4-benzoxazin-2-one ELISAKitBRCA-1人癌易感蛋白1規(guī)格:48T/96T 人抗肝可溶性抗原抗體(SLA)ELISA試劑盒 ,英文名: SLA ELISA Kit
4-溴甲基-6,7-二甲氧基(>98.0%(HPLC))質(zhì)量規(guī)格:>98.0%(HPLC)4-Bromomethyl-6,7-dimethoxycoumarin 小鼠白介素3(IL-3)ELISA試劑盒 ,英文名: IL-3 ELISA Kit RatIerleukin1β,IL-1βELISA試劑盒大鼠白介素1β(IL-1β)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
注意事項(xiàng):
1. 試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30 分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開(kāi)封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
2. 濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出,稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,洗滌時(shí)不影響結(jié)果。
3. 各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性,以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間控制在5 分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。
4. 請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線,做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過(guò)高(樣本OD 值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔孔的OD 值),請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n 倍)后再測(cè)定,計(jì)算時(shí)請(qǐng)后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。
5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
6. 底物請(qǐng)避光保存。
7. 嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)的操作進(jìn)行,試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).
8. 所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
9. 本試劑不同批號(hào)組分不得混用。
EFNA1人肝配蛋白A1進(jìn)口檢測(cè)試劑盒服務(wù):
我們可以根據(jù)您的應(yīng)用需要,比如在檢測(cè)范圍、種屬以及靈敏度等方面有特殊要求,而量身定制檢測(cè)試劑盒,有效控制檢測(cè)試劑成本。并可提供免費(fèi)代測(cè)。