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操作流程:
(1)待測樣品孔中每孔加入待測樣品100μl,每種樣品設3個平行孔;設兩個陰性對照孔,每孔加未處理組的細胞裂解液100μl;另設一個空白對照孔,加入純細胞裂解液100μl。
(2)酶標板置4℃,包被過夜。
(3)洗板:吸干孔內(nèi)反應液,用洗滌液過洗一遍(將洗滌液注滿板孔后,即甩去),之后將洗滌液注滿板孔,浸泡1-2分鐘,間歇搖動。甩去孔內(nèi)液體后在吸水紙上拍干。重復洗滌3-4次。
(4)陰性對照孔每孔加入PBS 50μl,樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人AIF抗體工作液50μl。
(5)酶標板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi),孵育60min。
(6)洗板,同(4)。
(7)每孔加1:5000稀釋的HRP-標記的山羊抗兔抗體工作液 100μl。
(8)酶標板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi),孵育60min。
(9)洗板,同(4)。
(10)每孔加TMB顯色液 100μl,輕輕混勻10s,置37℃暗處反應15-20min。
(11)每孔加100μl 2mol/L H2SO4終止反應。
(12)分別測450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2,終測得的OD值為兩者之差(W1-W2),以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。
(13)數(shù)據(jù)處理:在得出標本(S)和陰性對照(N)的 OD值后,計算S/N值。S/N≥2.1為陽性判定標準。
產(chǎn)品名稱 |
英文名稱 |
貨號 |
CD59人保護素進口檢測試劑盒 |
Human Protectin(CD59)ELISA Kit |
PH102610 |
優(yōu)勢特點:產(chǎn)品僅用于科研
1.高效、靈敏、特異的抗體;
2.穩(wěn)定的重復性和可靠性;
3.吸附性能好,空白值低,孔低透明度高的固相載體;
4.使用血清、血漿、組織勻漿液、細胞培養(yǎng)液、尿液、唾液等等多種標本類型;
5.節(jié)省實驗經(jīng)費。
組成及試劑配制 :
1. 酶聯(lián)板:一塊(96孔)
2. 標準品(凍干品):2瓶,每瓶臨用前以樣品稀釋液稀釋至1ml,蓋好后靜置10分鐘以上,然后反復顛倒/搓動以助溶解,其濃度為100 ng/ml,做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進行倍比稀釋)后,分別稀釋成100 ng/ml,50 ng/ml,25 ng/ml,12.5 ng/ml,6.25 ng/ml,3.12 ng/ml,1.56 ng/ml,樣品稀釋液直接作為標準濃度0 ng/ml,臨用前15分鐘內(nèi)配制。
如配制50 ng/ml標準品:取0.5ml (不要少于0.5ml ) 100 ng/ml的上述標準品加入含有0.5ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
3. 樣品稀釋液:1×20ml/瓶。
4. 檢測稀釋液A:1×10ml/瓶。
5. 檢測稀釋液B:1×10ml/瓶。
6. 檢測溶液A:1×120ul/瓶(1:100)臨用前以檢測稀釋液A 1:100稀釋,稀釋前根據(jù)預先計算好的每次實驗所需的總量配制(100ul/孔),實際配制時應多配制0.1-0.2ml。如10ul檢測溶液A加990ul檢測稀釋液A的比例配制,輕輕混勻,在使用前一小時內(nèi)配制。
7. 檢測溶液B:1×120ul/瓶(1:100)臨用前以檢測稀釋液B 1:100稀釋。稀釋方法同檢測溶液A。
8. 底物溶液:1×10ml/瓶。
9. 濃洗滌液:1×30ml/瓶,使用時每瓶用蒸餾水稀釋25倍。
10. 終止液:1×10ml/瓶(2N H2SO4)。
樣本實驗前準備:
ELISA試劑盒液體樣本:包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細胞培養(yǎng)上清等。
(1)血清
室溫血液自然凝固10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。
(2)血漿:
應根據(jù)標本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。
(3)尿液:
用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實行。
(4)細胞培養(yǎng)上清:
檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。
(5)培養(yǎng)細胞
檢測細胞內(nèi)的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融或加入組織蛋白萃取試劑,以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。
(6)組織標本
切割標本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。標本融化后仍然保?-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標本勻漿化。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。
腺苷 5‘-(α,β-亞甲基)二1酸鹽,鈉鹽質量規(guī)格:美國進口Adenosine 5'-(α,β-methylene)diphosphate, salt 人可溶性血小板內(nèi)皮細胞粘附分子1(sPECAM-1/sCD31)ELISA檢測試劑盒Humansolubleplateletendothelialcelladhesionmolecule1,sPECAM-1ELISAKit
96T/48T 人體腫瘤β-catenin突變巢式分析試劑盒50
5'-O-(4,4'-二甲氧基三苯甲基)-N6-苯甲酰基腺苷 質量規(guī)格:美國進口N6-Benzoyl-5'-O-DMT-adenosine 大鼠極低密度脂蛋白(VLDL)試劑盒 Rat very low density lipoprotein,VLDL ELISA Kit α-FodrinIgG/IgA人抗α-胞襯蛋白抗體IgG/IgA規(guī)格:48T/96T
8-疊氮腺苷質量規(guī)格:美國進口8-Azido Adenosine 英文名稱RatCINC-2a/bELISAKit大鼠CINC-2a/b規(guī)格:96T/48T 大鼠胰島素樣生長因子2(IGF-2)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
2-基腺苷質量規(guī)格:美國進口2-Hydrazino Adenosine 可溶性膜蛋白制備試劑盒20
人心肌肌球蛋白重鏈(MHC)自身抗體試劑盒 Human cardiac myosin
heavy chain (MHC) aoaibody ELISA kit
哌拉西林鈉質量規(guī)格:>900μg//mg,USP,BRPiperacillin 大鼠膜聯(lián)蛋白Ⅴ(ANX-Ⅴ)ELISA檢測試劑盒RatannexinⅤ,ANX-ⅤELISAKit 96T/48T HumanBcl-2associatedXprotein,BaxELISA試劑盒人Bcl-2相關X蛋白(BAX)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
哌拉西林鈉(標準品)質量規(guī)格:含量測定Piperacillin 人白細胞調(diào)節(jié)素(LR)試劑盒 Human leukoregulin,LR ELISA Kit Humancrystalproteinsβ,CryβELISAKit人晶體蛋白β(Cryβ)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
環(huán)吡司胺; 環(huán)吡酮胺質量規(guī)格:>99%,USP32,BR,可用于細胞培養(yǎng)Ciclopirox Olamine Salmoncalcitonin,SCTELISAKit鮭魚降鈣素(SCT)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 人Ⅰ型膠原C端肽(CTX-Ⅰ)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
環(huán)吡司胺; 環(huán)吡酮胺(標準品)質量規(guī)格:HPLC>98%,標準品Ciclopirox Olamine P27(抗人;抗兔;抗小鼠;抗大鼠)100微克 兔β淀粉樣蛋白1-40(Aβ1-40)試劑盒 Rabbit amyloid beta peptide 1-40,Aβ1-40 ELISA Kit
灰黃霉素(標準品)質量規(guī)格:含量測定Griseofulvin 大鼠B因子(BF)ELISA檢測試劑盒RatfactorB,BFELISAKit
96T/48T HumanGuaninenucleotidedissociationInhibitor,GDIELISA試劑盒人鳥苷酸解離抑制因子(GDI)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
Tivantinib(ARQ197)質量規(guī)格:>98%,c-Met抑制劑Tivantinib, ARQ 197 人PL12抗體/抗氨酰NA合成酶(PL12/AlaRS)試劑盒 Human ai-PL12-aibody,PL12/AlaRS ELISA Kit Humanleukemiainhibitoryfactorreceptor,LIFRELISAKit人白血病抑制因子受體(LIFR)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
3-乙氧基-4-羥基苯(標準品)質量規(guī)格:系統(tǒng)適應性Ethyl vanillin 英文名稱MousesPECAM-1ELISAKit小鼠可溶性血小板-內(nèi)皮細胞粘附分子(sPECAM-1)規(guī)格:96T/48T 大鼠乙酰肝素蛋白多糖2(HSPG2)ELISA試劑盒 ,英文名: HSPG2 ELISA Kit
鹽酸奈福泮(標準品)質量規(guī)格:含量測定Nefopam HCl 半乳糖基轉移酶(galactosylansferase) 人基質金屬蛋白酶9/明膠酶B(MMP-9/GelatinaseB)ELISA檢測試劑盒Humanmaixmetalloproteinase9/GelatinaseB,MMP-9ELISAKit
96T/48T
注意事項:
1. 試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30 分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。
2. 濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果。
3. 各步加樣均應使用加樣器,并經(jīng)常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5 分鐘內(nèi),如標本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。
4. 請每次測定的同時做標準曲線,做復孔。如標本中待測物質含量過高(樣本OD 值大于標準品孔孔的OD 值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n 倍)后再測定,計算時請后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。
5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
6. 底物請避光保存。
7. 嚴格按照說明書的操作進行,試驗結果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.
8. 所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。
9. 本試劑不同批號組分不得混用。
CD59人保護素進口檢測試劑盒服務:
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