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檢測程序:
1. 加樣:每孔各加入標(biāo)準(zhǔn)品或待測樣品 100ul ,將反應(yīng)板充分混勻后置 37 ℃ 120 分鐘。
2. 洗板:用洗滌液將反應(yīng)板充分洗滌 4-6 次,向?yàn)V紙上印干。
3. 每孔中加入抗體工作液10 0ul 。將反應(yīng)板充分混勻后置 37 ℃ 6 0 分鐘。
4. 洗板:同前。
5. 每孔加酶標(biāo)抗體工作液100ul 。將反應(yīng)板置 37 ℃ 3 0 分鐘。
6. 洗板:同前。
7. 每孔加入底物工作液100ul ,置 37 ℃ 暗處反應(yīng)15 分鐘。
8. 每孔加入100ul 終止液混勻。
9. 30分鐘內(nèi)用酶標(biāo)儀在 45 0 nm 處測 吸光值。
下列是公司產(chǎn)品ELISA試劑盒的詳細(xì)說明書:
中文名稱:NDN人Necdin蛋白免費(fèi)代測試劑盒
英文簡稱:Human Necdin(NDN)ELISA Kit
產(chǎn)品貨號(hào):PH103171
規(guī)格:96T/48T
適用范圍:僅供科研使用
保存及有效期:2-8℃保存,6個(gè)月,-20℃一年
試劑和樣本的控制方法:
一、試劑
1.試劑的選擇:國家明確要求要采用批批檢定的形式對(duì)ELISA試劑嚴(yán)格把關(guān),我司嚴(yán)格按照國家標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行生產(chǎn),已獲得國家承認(rèn)的“三證”,每一個(gè)產(chǎn)品都有對(duì)應(yīng)的生產(chǎn)批號(hào),只要客戶提前下單,我們就能為您提供新批次的產(chǎn)品,不必?fù)?dān)心會(huì)有過期的試劑。我司的試劑,值得您選擇。
2.試劑的準(zhǔn)備:先將試劑盒先從冰箱中拿出來,在室溫下放置20-30
min后,再進(jìn)行測定,使試劑盒在使用前與室溫平衡,這樣做的目的能使反應(yīng)微孔內(nèi)的溫度較快地達(dá)到所需的溫度,以滿足后面的測定需求。
二、樣本
1.內(nèi)源性干擾因素:包括類風(fēng)濕因子、補(bǔ)體、高濃度的非特異球蛋白、異嗜性抗體、某些自身抗體等;
類風(fēng)濕因子的控制方法:
①用F(ab)2替代完整的IgG;
②標(biāo)本用聯(lián)有熱變性IgG的固相吸附劑處理;
③檢測抗原時(shí),可用2-巰基乙醇加入到標(biāo)本稀釋液中使RF降解。
使用方法:
測定法的靈敏度來自作為報(bào)告的酶。眾所周知,酶是一種有機(jī)催化劑,很少量的酶即可誘導(dǎo)大量的催化反應(yīng),產(chǎn)生可供觀察的顯色反應(yīng)現(xiàn)象。因此該體系常被稱為酶放大體系。
1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋:本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。 24μg/ml 5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 150μl的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
12μg/ml 4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品
150μl的5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
6μg/ml 3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 150μl的4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
3μg/ml 2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 150μl的3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
1.5μg/ml 1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品
150μl的2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
2. 加樣:分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻。|
3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4. 配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外。
7. 溫育:操作同3。
8. 洗滌:操作同5。
9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.
10. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。
11. 測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。
ELISA 試驗(yàn)時(shí),注意事項(xiàng)如下:
1. 正式試驗(yàn)時(shí),應(yīng)分別以陽性對(duì)照與陰性對(duì)照控制試驗(yàn)條件,待檢樣品應(yīng)作一式二份,以保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。有時(shí)本底較高,說明有非特異性反應(yīng),可采用羊血清、兔血清或BSA等封閉。
2. 在ELISA中,進(jìn)行各項(xiàng)實(shí)驗(yàn)條件的選擇是很重要的,其中包括:
(1) 固相載體的選擇:許多物質(zhì)可作為固相載體,如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等。其形式可以是凹孔平板、試管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何種載體,在使用前均可進(jìn)行篩選:用等量抗原包被,在同一實(shí)驗(yàn)條件下進(jìn)行反應(yīng),觀察其顯色反應(yīng)是否均一性,據(jù)此判明其吸附性能是否良好。
(2) 包被抗體(或抗原)的選擇:將抗體(或抗原)吸附在固相載體表面時(shí),要求純度要好,吸附時(shí)一般要求PH在9.0~9.6之間。吸附溫度,時(shí)間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4℃18~24小時(shí)。蛋白質(zhì)包被的zui適濃度需進(jìn)行滴定:即用不同的蛋白質(zhì)濃度(0.1、1.0和10μg/ml等)進(jìn)行包被后,在其它試驗(yàn)條件相同時(shí),觀察陽性標(biāo)本的OD值。選擇OD值z(mì)ui大而蛋白量zui少的濃度。對(duì)于多數(shù)蛋白質(zhì)來說通常為1~10μg/ml。
(3) 酶標(biāo)記抗體工作濃度的選擇:首先用直接ELISA法進(jìn)行初步效價(jià)的滴定(見酶標(biāo)記抗體部份)。然后再固定其它條件或采取“方陣法”(包被物、待檢樣品的參考品及酶標(biāo)記抗體分別為不同的稀釋度)在正式實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)里準(zhǔn)確地滴定其工作濃度。
(4) 酶的底物及供氫體的選擇:對(duì)供氫體的選擇要**價(jià)廉、**、有明顯地顯色反應(yīng),而本身無色。有些供氫體(如OPD等)有潛在的致癌作用,應(yīng)注意防護(hù)。有條件者應(yīng)使用不致癌、靈敏度高的供氫體,如TMB和ABTS是目前較為滿意的供氫體。底物作用一段時(shí)間后,應(yīng)加入強(qiáng)酸或強(qiáng)堿以終止反應(yīng)。通常底物作用時(shí)間,以10-30分鐘為宜。底物使用液必須新鮮配制,尤其是H2O2在臨用前加入 。
磺胺喹噁啉(標(biāo)準(zhǔn)品) Sulfaquinoxaline 質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品 人1,3-βD葡葡糖苷酶(1,3-βDglucosidase)ELISA檢測試劑盒Human1,3-βDglucosidaseELISAKit
96T/48T
磺胺氯吡嗪(標(biāo)準(zhǔn)品) Sulfalozine
質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品 人1,3-二0酸甘油酸(1,3-DPG)ELISA檢測試劑盒Human1,3-Disphosphoglycerate,1,3-DPGELISAKit
96T/48T
泰妙菌素(標(biāo)準(zhǔn)品) Tiamulin
質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品 人1,5-脫水葡萄糖醇/1,5-脫水山梨(1,5-AG)ELISA檢測試劑盒Human1,5-anhydroglucitol,1,5-AGELISAKit 96T/48T
化銫(用于高通量質(zhì)譜,99.9995%) Cesium iodide
質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品,用于高通量質(zhì)譜,99.9995% 人11-脫氧皮質(zhì)醇試劑盒 Human 11-Deoxycoisol
ELISA Kit
1,3-二甲基-2-咪唑啉酮(用于GC-HS,≥99.8%(GC)) 1,3-Dimethyl-2-imidazolidinone 質(zhì)量規(guī)格:用于GC-HS,≥99.8%(GC) 人12羥二十烷四烯酸(12-HETE)ELISA檢測試劑盒Human20-hydroxyeicosateaenoicacid,12-HETEELISAKit
96T/48T
二甲基亞砜(農(nóng)殘級(jí)) Dimethyl sulfoxide 質(zhì)量規(guī)格:農(nóng)殘級(jí) 人12羥二十烷四烯酸(12-HETE)試劑盒 Human
12-hydroxyeicosateaenoic acid,12-HETE ELISA Kit
十二烷基基氯化銨(DTAC)(99%,離子對(duì)色譜級(jí)) Dodecyltrimethylammonium chloride 質(zhì)量規(guī)格:99%,離子對(duì)色譜級(jí) 人12-脂氧化酶/脂加氧酶(LOX-12)試劑盒 Human
12-lipoxygenase,LOX-12 ELISA Kit
二十酸甲酯(分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥99.0% (GC)) Methyl Arachidate 質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥99.0% (GC) 人
聚酰胺粉(柱層析用) Polyamide
質(zhì)量規(guī)格:柱層析用 人15-epi-氧脂素 A4(15-epi-LXA4)試劑盒 Human 15-epi-Lipoxin
A4,15-epi-LXA4 ELISA Kit
聚酰胺粉(柱層析用,200-400目) Polyamide
質(zhì)量規(guī)格:柱層析用,200-400目 人15-羥基前列腺素脫氫酶(15-PGDH)試劑盒 Human 15-PGDH ELISA Kit
LLC-MK2(恒河猴腎細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2匹伐他汀鈣Pitavastatin Calcium /NK-104質(zhì)量規(guī)格:≥98.0% 相關(guān)物質(zhì)及對(duì)應(yīng)異構(gòu)體均小于1%
Promocell
Drosophila Schneider's Drosophila Medium果蠅培養(yǎng)基,無L-谷氨酰胺 500ml匹伐他汀鈣(標(biāo)準(zhǔn)品)Pitavastatin Calcium /NK-104質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98.0% ,標(biāo)準(zhǔn)品
人主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞總RNAHASMC NA化鉀Potassium iodide質(zhì)量規(guī)格:>99%,AR
CFD
Others Mouse 小鼠 CFD / Adipsin 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) 吡喹酮Praziquantel質(zhì)量規(guī)格:>98.5%,BR
NCI-H460
人肺癌細(xì)胞吡喹酮(標(biāo)準(zhǔn)品)Praziquantel質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品
小鼠心肌轉(zhuǎn)錄因子GATA3 英文名稱:
cardiac muscle anscription factor GATA3
規(guī)格: 48T/96T
英文縮寫: GATA3
L-Dihydroorotic acid
5988-19-2 中文名:L-4,5-二氫乳清酸 分子式:C5H6N2O4
小鼠心肌轉(zhuǎn)錄因子3(mouse GATA3) 作用:
ELISA 規(guī)格: 48T/96T
進(jìn)口分裝 Benzyl 2,4-dihydroxyphenyl ketone 中文名:2,4-二羥基苯基芐酮
分子式:C14H12O3
小鼠心肌營養(yǎng)素elisa試劑盒 小鼠心肌營養(yǎng)素試劑盒
規(guī)格型號(hào):96T/48T 小鼠心肌營養(yǎng)素試劑盒,規(guī)格型號(hào):96T/48T,來源:elisa試劑盒(進(jìn)口分裝),產(chǎn)品別名:小鼠心肌營養(yǎng)素試劑盒、小鼠心肌營養(yǎng)素elisa試劑盒 保存條件:2-8℃ 保質(zhì)期:6個(gè)月。 Methasterone
中文名:甲基屈他雄酮 分子式:C21H34O2
NDN人Necdin蛋白免費(fèi)代測試劑盒小鼠心肌營養(yǎng)素1(CT-1)ELISA試劑盒 96T/48T
試劑盒 組裝/原裝 Metamizole 68-89-3 中文名:安乃近
分子式:C13H16N3NaO4S
小鼠心肌營養(yǎng)素1(CT-1)ELISAKit ELISA. 96T/48T Catalponol 中文名: 分子式:C15H18O2 度:98.0%