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檢測程序:
1. 加樣:每孔各加入標準品或待測樣品 100ul ,將反應(yīng)板充分混勻后置 37 ℃ 120 分鐘。
2. 洗板:用洗滌液將反應(yīng)板充分洗滌 4-6 次,向濾紙上印干。
3. 每孔中加入抗體工作液10 0ul 。將反應(yīng)板充分混勻后置 37 ℃ 6 0 分鐘。
4. 洗板:同前。
5. 每孔加酶標抗體工作液100ul 。將反應(yīng)板置 37 ℃ 3 0 分鐘。
6. 洗板:同前。
7. 每孔加入底物工作液100ul ,置 37 ℃ 暗處反應(yīng)15 分鐘。
8. 每孔加入100ul 終止液混勻。
9. 30分鐘內(nèi)用酶標儀在 45 0 nm 處測 吸光值。
下列是公司產(chǎn)品ELISA試劑盒的詳細說明書:
中文名稱:BAFF人B-細胞激活因子特價elisa試劑盒
英文簡稱:Human B-Cell Activating Factor(BAFF)ELISA Kit
產(chǎn)品貨號:PH103469
規(guī)格:96T/48T
適用范圍:僅供科研使用
保存及有效期:2-8℃保存,6個月,-20℃一年
試劑和樣本的控制方法:
一、試劑
1.試劑的選擇:國家明確要求要采用批批檢定的形式對ELISA試劑嚴格把關(guān),我司嚴格按照國家標準進行生產(chǎn),已獲得國家承認的“三證”,每一個產(chǎn)品都有對應(yīng)的生產(chǎn)批號,只要客戶提前下單,我們就能為您提供新批次的產(chǎn)品,不必擔心會有過期的試劑。我司的試劑,值得您選擇。
2.試劑的準備:先將試劑盒先從冰箱中拿出來,在室溫下放置20-30
min后,再進行測定,使試劑盒在使用前與室溫平衡,這樣做的目的能使反應(yīng)微孔內(nèi)的溫度較快地達到所需的溫度,以滿足后面的測定需求。
二、樣本
1.內(nèi)源性干擾因素:包括類風濕因子、補體、高濃度的非特異球蛋白、異嗜性抗體、某些自身抗體等;
類風濕因子的控制方法:
①用F(ab)2替代完整的IgG;
②標本用聯(lián)有熱變性IgG的固相吸附劑處理;
③檢測抗原時,可用2-巰基乙醇加入到標本稀釋液中使RF降解。
使用方法:
測定法的靈敏度來自作為報告的酶。眾所周知,酶是一種有機催化劑,很少量的酶即可誘導大量的催化反應(yīng),產(chǎn)生可供觀察的顯色反應(yīng)現(xiàn)象。因此該體系常被稱為酶放大體系。
1. 標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。 24μg/ml 5號標準品 150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液
12μg/ml 4號標準品
150μl的5號標準品加入150μl標準品稀釋液
6μg/ml 3號標準品 150μl的4號標準品加入150μl標準品稀釋液
3μg/ml 2號標準品 150μl的3號標準品加入150μl標準品稀釋液
1.5μg/ml 1號標準品
150μl的2號標準品加入150μl標準品稀釋液
2. 加樣:分別設(shè)空白孔、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。|
3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4. 配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。
7. 溫育:操作同3。
8. 洗滌:操作同5。
9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.
10. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。
11. 測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。
ELISA 試驗時,注意事項如下:
1. 正式試驗時,應(yīng)分別以陽性對照與陰性對照控制試驗條件,待檢樣品應(yīng)作一式二份,以保證實驗結(jié)果的準確性。有時本底較高,說明有非特異性反應(yīng),可采用羊血清、兔血清或BSA等封閉。
2. 在ELISA中,進行各項實驗條件的選擇是很重要的,其中包括:
(1) 固相載體的選擇:許多物質(zhì)可作為固相載體,如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等。其形式可以是凹孔平板、試管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何種載體,在使用前均可進行篩選:用等量抗原包被,在同一實驗條件下進行反應(yīng),觀察其顯色反應(yīng)是否均一性,據(jù)此判明其吸附性能是否良好。
(2) 包被抗體(或抗原)的選擇:將抗體(或抗原)吸附在固相載體表面時,要求純度要好,吸附時一般要求PH在9.0~9.6之間。吸附溫度,時間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4℃18~24小時。蛋白質(zhì)包被的zui適濃度需進行滴定:即用不同的蛋白質(zhì)濃度(0.1、1.0和10μg/ml等)進行包被后,在其它試驗條件相同時,觀察陽性標本的OD值。選擇OD值zui大而蛋白量zui少的濃度。對于多數(shù)蛋白質(zhì)來說通常為1~10μg/ml。
(3) 酶標記抗體工作濃度的選擇:首先用直接ELISA法進行初步效價的滴定(見酶標記抗體部份)。然后再固定其它條件或采取“方陣法”(包被物、待檢樣品的參考品及酶標記抗體分別為不同的稀釋度)在正式實驗系統(tǒng)里準確地滴定其工作濃度。
(4) 酶的底物及供氫體的選擇:對供氫體的選擇要**價廉、**、有明顯地顯色反應(yīng),而本身無色。有些供氫體(如OPD等)有潛在的致癌作用,應(yīng)注意防護。有條件者應(yīng)使用不致癌、靈敏度高的供氫體,如TMB和ABTS是目前較為滿意的供氫體。底物作用一段時間后,應(yīng)加入強酸或強堿以終止反應(yīng)。通常底物作用時間,以10-30分鐘為宜。底物使用液必須新鮮配制,尤其是H2O2在臨用前加入 。
青霉素G鈉鹽 Penicillin G,
salt 質(zhì)量規(guī)格:>1500U/mg,USP,BR 大鼠纖溶抑制因子/凝血酶激活的纖溶抑制物(TAFI)試劑盒 Rat Thrombin activatable
fibrinolysis inhibitor,TAFI ELISA Kit
青霉素G鈉(標準品) Penicillin G,
salt 質(zhì)量規(guī)格:效價測定 大鼠纖維蛋白原(Fb)試劑盒 Rat Fibrinogen,Fb Elisa Kit
米格列奈鈣 Mitiglinide calcium Hydrate 質(zhì)量規(guī)格:>99%,BR 大鼠纖維蛋白原α鏈(Fga)試劑盒 Rat fibrinogen alpha
chain,Fga ELISA kit
米格列奈鈣(標準品) Mitiglinide calcium Hydrate 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標準品 大鼠纖維蛋白原β鏈(Fgb/Ab1-181/Ab1-216/Ac1-581)試劑盒 Rat fibrinogen beta chain
ELISA Kit
丙基硫氧嘧啶 /6-正丙基-2-硫代尿嘧啶 Propylthiouracil 質(zhì)量規(guī)格:>99%,BR 大鼠纖維蛋白原γ鏈(Fgg)試劑盒 Rat fibrinogen gamma
chain,Fgg ELISA kit
氟米龍醋酸酯 Fluorometholone Acetate 質(zhì)量規(guī)格:>97% 大鼠酰基化饑餓素(AG)試劑盒 Rat Acylated Ghrelin,AG
ELISA Kit
十二苯醚 Pentabromophenyl ether 質(zhì)量規(guī)格:>98% 大鼠腺病(ADV)抗體(IgG)試劑盒 Rat adenovirus(ADV)aibody
IgG ELISA kit
氨基雜環(huán)鹽酸鹽 3-Amino-3-azabicyclo[
春雷霉素;春日霉素; 克死霉 Kasugamycin
質(zhì)量規(guī)格:>60%,BR 大鼠腺苷三0酸結(jié)合盒轉(zhuǎn)運體A1(ABCA1)試劑盒 Rat ATP-binding Cassette
anspoer A1,ABCA1 ELISA Kit
土拉霉素A,托拉菌素A,泰拉霉素 Tulathromycin A 質(zhì)量規(guī)格:>95% 大鼠腺苷受體A1(ADORA1)試劑盒 Rat Adenosine receptor
A1,ADORA1 ELISA kit
SF-295(人XG惡性膠質(zhì)瘤細胞) 5×106cells/瓶×2 胎盤羊膜細胞Many types of cells包裝:5 × 105方(1ml)特比萘芬Terbinafine 質(zhì)量規(guī)格:>98.5%
小鼠皮質(zhì)神經(jīng)元MN-c特比萘芬(標準品)Terbinafine 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標準品
KEAP1
Others Human 人 KEAP1 / INRF2 桿狀病-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) 鹽酸特比萘芬Terbinafine HCl質(zhì)量規(guī)格:>99%,EP6
蚊子幼蟲體細胞;Aedes albopictus clone
C6/36鹽酸特比萘芬(標準品)Terbinafine HCl質(zhì)量規(guī)格:HPLC>99%,標準品
B95-8細胞,EBV 轉(zhuǎn)化的絨猴白細胞 人大腸癌細胞,CL187/CCL187細胞 CM-H125人腦成纖維細胞完全培養(yǎng)基100mL醋酸特立帕肽/重組人甲狀旁腺(1-34)Teriparatide
acetate/Human PTH(1-34)質(zhì)量規(guī)格:>95%
組織NAD依賴性甘油-3-0酸脫氫酶(NAD-Glyceraldehyde-3-PhosphateDehydrogenase;NAD-GAPDH)活性光譜法定量檢測試劑盒20次 1,6-Dioxaspiro[4.5]decan-2-methanol 83015-88-7
中文名: 分子式:C9H16O3 度:98.0% 關(guān)鍵詞: 植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫
組織NADP依賴性甘油-3-0酸脫氫酶(NADP-Glyceraldehyde-3-PhosphateDehydrogenase;NADP-GAPDH)活性光譜法定量檢測試劑盒20次 1,8-Bis(dimethylamino)naphtalene 中文名:1,8-雙二甲氨基萘
分子式:C14H18N2 度:98.0%
組織NADPH氧化酶活性化學發(fā)光法定量檢測試劑盒20次(10樣本) 11-Hydroxyjasmonic acid 140447-14-9
中文名: 分子式:C12H18O4 度:95.0% 關(guān)鍵詞: 植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫
組織NADPH氧化酶活性比色法定量檢測試劑盒20/50次(10樣本) 11α-Hydroxyandrost-4-ene-3,17-dione 中文名:11α-羥基-雄甾-4-烯-3,17-二酮 分子式:C19H26O3 度:98.0%
BAFF人B-細胞激活因子特價elisa試劑盒組織NADPH細胞色素C還原酶(NADPHCytochromeCReductase)活性高質(zhì)敏感比色法定量檢測試劑盒20次 11β,17α-Dihydroxy-6α-methylpregna-1,4-diene-3,20-dione 6870-94-6 中文名: 分子式:C22H30O4 度:98.0% 關(guān)鍵詞: