試劑和樣本的控制方法：
一、試劑
1.試劑的選擇：國家明確要求要采用批批檢定的形式對ELISA試劑嚴(yán)格把關(guān)，我司嚴(yán)格按照國家標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行生產(chǎn)，已獲得國家承認(rèn)的“三證”，每一個產(chǎn)品都有對應(yīng)的生產(chǎn)批號，只要客戶提前下單，我們就能為您提供新批次的產(chǎn)品，不必?fù)?dān)心會有過期的試劑。我司的試劑，值得您選擇。
2.試劑的準(zhǔn)備：先將試劑盒先從冰箱中拿出來，在室溫下放置20-30 min后，再進(jìn)行測定，使試劑盒在使用前與室溫平衡，這樣做的目的能使反應(yīng)微孔內(nèi)的溫度較快地達(dá)到所需的溫度，以滿足后面的測定需求。
二、樣本
1.內(nèi)源性干擾因素：包括類風(fēng)濕因子、補體、高濃度的非特異球蛋白、異嗜性抗體、某些自身抗體等；
類風(fēng)濕因子的控制方法：
①用F(ab)2替代完整的IgG；
②標(biāo)本用聯(lián)有熱變性IgG的固相吸附劑處理；
③檢測抗原時，可用2-巰基乙醇加入到標(biāo)本稀釋液中使RF降解。

下列是公司產(chǎn)品ELISA試劑盒的詳細(xì)說明書：
中文名稱：COL3人Ⅲ型膠原進(jìn)口檢測試劑盒
英文簡稱：Human Collagen Type III(COL3)ELISA Kit
產(chǎn)品貨號：PH103578
規(guī)格：96T/48T
適用范圍：僅供科研使用
保存及有效期：2-8℃保存，6個月，-20℃一年

使用方法：
測定法的靈敏度來自作為報告的酶。眾所周知，酶是一種有機催化劑，很少量的酶即可誘導(dǎo)大量的催化反應(yīng)，產(chǎn)生可供觀察的顯色反應(yīng)現(xiàn)象。因此該體系常被稱為酶放大體系。
1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。   24μg/ml    5號標(biāo)準(zhǔn)品    150μl的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
 12μg/ml    4號標(biāo)準(zhǔn)品    150μl的5號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
 6μg/ml     3號標(biāo)準(zhǔn)品    150μl的4號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
 3μg/ml     2號標(biāo)準(zhǔn)品    150μl的3號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
 1.5μg/ml   1號標(biāo)準(zhǔn)品    150μl的2號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
2. 加樣：分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。|
3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。   
4. 配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。
7. 溫育：操作同3。
8. 洗滌：操作同5。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.
10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。
11. 測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。
ELISA 試驗時，注意事項如下： 
     1. 正式試驗時，應(yīng)分別以陽性對照與陰性對照控制試驗條件，待檢樣品應(yīng)作一式二份，以保證實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性。有時本底較高，說明有非特異性反應(yīng)，可采用羊血清、兔血清或BSA等封閉。 
     2. 在ELISA中，進(jìn)行各項實驗條件的選擇是很重要的，其中包括: 
     （1） 固相載體的選擇：許多物質(zhì)可作為固相載體，如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等。其形式可以是凹孔平板、試管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何種載體，在使用前均可進(jìn)行篩選：用等量抗原包被，在同一實驗條件下進(jìn)行反應(yīng)，觀察其顯色反應(yīng)是否均一性，據(jù)此判明其吸附性能是否良好。 
     （2） 包被抗體（或抗原）的選擇：將抗體（或抗原）吸附在固相載體表面時，要求純度要好,吸附時一般要求PH在9.0～9.6之間。吸附溫度，時間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4℃18～24小時。蛋白質(zhì)包被的zui適濃度需進(jìn)行滴定：即用不同的蛋白質(zhì)濃度（0.1、1.0和10μg／ml等）進(jìn)行包被后，在其它試驗條件相同時，觀察陽性標(biāo)本的OD值。選擇OD值zui大而蛋白量zui少的濃度。對于多數(shù)蛋白質(zhì)來說通常為1～10μg／ml。 
     （3） 酶標(biāo)記抗體工作濃度的選擇：首先用直接ELISA法進(jìn)行初步效價的滴定（見酶標(biāo)記抗體部份）。然后再固定其它條件或采取“方陣法”（包被物、待檢樣品的參考品及酶標(biāo)記抗體分別為不同的稀釋度）在正式實驗系統(tǒng)里準(zhǔn)確地滴定其工作濃度。 
     （4） 酶的底物及供氫體的選擇：對供氫體的選擇要**價廉、**、有明顯地顯色反應(yīng)，而本身無色。有些供氫體（如OPD等）有潛在的致癌作用，應(yīng)注意防護(hù)。有條件者應(yīng)使用不致癌、靈敏度高的供氫體，如TMB和ABTS是目前較為滿意的供氫體。底物作用一段時間后，應(yīng)加入強酸或強堿以終止反應(yīng)。通常底物作用時間，以10-30分鐘為宜。底物使用液必須新鮮配制，尤其是H2O2在臨用前加入 。

四丙基化銨(>98.0%(T))  Tetrapropylammonium Iodide  質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(T) 小鼠載脂蛋白C4(APOC4)ELISA試劑盒 ，英文名： APOC4 ELISA Kit

四己基化銨(>98.0%(T))  Tetrahexylammonium Iodide  質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(T) 小鼠載脂蛋白E(Apo-E)ELISA檢測試劑盒MouseApolipoproteinE,Apo-EELISAKit 96T/48T

四戊基化銨(>98.0%(T))  Tetraamylammonium Iodide  質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(T) 小鼠載脂蛋白E(APOE)ELISA試劑盒 ，英文名： APOE ELISA Kit

四庚基化銨(>98.0%(T))  Tetraheptylammonium Iodide  質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(T) 小鼠載脂蛋白E(Apo-E)ELISA試劑盒 ，英文名： Apo-E ELISA Kit

四苯基化膦(>97.0%(T))  Tetraphenylphosphonium Iodide  質(zhì)量規(guī)格：>97.0%(T) 小鼠載脂蛋白F(APOF)ELISA試劑盒 ，英文名： APOF ELISA Kit

三丁基化锍(>96.0%(T))  Tributylsulfonium Iodide  質(zhì)量規(guī)格：>96.0%(T) 小鼠載脂蛋白H(Apo-H)ELISA檢測試劑盒MouseApolipoproteinH,Apo-HELISAKit 96T/48T

螺[1,3,3-基吲哚苯并二氫吡喃][光致變色化合物](>98.0%(HPLC)(T))  1,3,3-Trimethylindolinobenzopyrylospiran [Photochromic Compound]  質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(HPLC)(T) 小鼠載脂蛋白H(APOH)ELISA試劑盒 ，英文名： APOH ELISA Kit

1,3,3-基吲哚-奈諤嗪(>98.0%(HPLC)(T))  1,3,3-Trimethylindolinonaphthospirooxazine [Photochromic Compound]  質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(HPLC)(T) 小鼠載脂蛋白H(Apo-H)ELISA試劑盒 ，英文名： Apo-H ELISA Kit

3,3-二苯基-3H-萘并[2,1-b]吡喃(>98.0%(HPLC))  3,3-Diphenyl-3H-naphtho[2,1-b]pyran  質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(HPLC) 小鼠再生基因蛋白1a(REG-1a)ELISA試劑盒 ，英文名： REG-1a ELISA Kit

硫靛紅  Thioindigo  質(zhì)量規(guī)格： 小鼠再生胰島衍生蛋白1β(REG1β)ELISA試劑盒 ，英文名： REG1β ELISA Kit
敘利亞倉鼠腎細(xì)胞;BHK-21巖大戟內(nèi)酯B（標(biāo)準(zhǔn)品）Jolkinolide B質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品

人肝細(xì)胞 (HH) (1×106 )路路通內(nèi)酯（標(biāo)準(zhǔn)品）Liquidambaric lactone質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品

CL-0051CaES-17(人食管癌細(xì)胞)5×106cells/瓶×2甘油三油酸酯（標(biāo)準(zhǔn)品）Glycerine trioleate質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品

小鼠胚胎成纖維細(xì)胞(來自NIH3T3);PA12 小鼠肺血管平滑肌細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mL長春花堿（標(biāo)準(zhǔn)品）Vinblastine質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品

HCT/Taxol 人結(jié)腸癌紫杉醇耐藥長春花堿Vinblastine質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，BR
1-Indanamine   32457-23-1  中文名：  分子式：C9H12ClN    Humanplasminogenactivator，PLGAELISAKit人纖溶酶原激活劑(PLGA)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

Rasagiline mesylate  161735-79-1  中文名：甲磺酸雷沙吉蘭  分子式：3S    兔子血小板因子4(PF-4/CXCL4)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

4-Amino-3,5-dichloropyridine  22889-78-7  中文名：  分子式：C5H4Cl2N2    Rat angiopoietin 4 (ANG-4) ELISA Kit 大鼠**素4(ANG-4)ELISA試劑盒

Roflumilast  162401-32-3  中文名：羅氟司特  分子式：C17H14Cl2F2N2O3    Humahyroglobulin,TGELISAKit 人甲狀腺球蛋白(TG)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

Diethyl 2-acetamido-2-phenethylmalonate  5463-92-3  中文名：  分子式：C17H23NO5    HumanCytotoxin-associatedprotein,CagAELISA試劑盒人細(xì)胞相關(guān)蛋白A(CagA)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

COL3人Ⅲ型膠原進(jìn)口檢測試劑盒檢測程序：
1.  加樣：每孔各加入標(biāo)準(zhǔn)品或待測樣品 100ul ，將反應(yīng)板充分混勻后置 37 ℃ 120 分鐘。
2.  洗板：用洗滌液將反應(yīng)板充分洗滌 4-6 次，向濾紙上印干。
3.  每孔中加入抗體工作液10 0ul 。將反應(yīng)板充分混勻后置 37 ℃ 6 0 分鐘。
4.  洗板：同前。
5.  每孔加酶標(biāo)抗體工作液100ul 。將反應(yīng)板置 37 ℃ 3 0 分鐘。
6.  洗板：同前。
7.  每孔加入底物工作液100ul ，置 37   ℃ 暗處反應(yīng)15 分鐘。
8.  每孔加入100ul 終止液混勻。
9.  30分鐘內(nèi)用酶標(biāo)儀在 45 0 nm 處測 吸光值。