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實驗要點及說明 :
1.本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng),而不適用于懸浮細胞培養(yǎng),懸浮細胞可使用滴片法;
2.所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)玻璃**,并經(jīng)過鉻酸洗液處理;
3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時動作要輕;
4.如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞,可以使用較大的培養(yǎng)皿,但不宜過大,以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率;
5.如果細胞貼壁生長能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
產(chǎn)品名稱 |
Sp2/0-Ag14細胞 |
規(guī)格 |
T25 |
貨號 |
BH-0109633 |
產(chǎn)品詳細 小鼠骨髓瘤細胞;Sp2/0-Ag14
形態(tài)特性 母細胞樣;圓形
生長特性 懸浮生長
特征特性 該細胞是由綿羊紅細胞的BALB/c小鼠脾細胞和P3X63Ag8骨髓瘤細胞融合得到的。該細胞不分泌球蛋白,對20μg/ml的8-氮鳥嘌呤有抗性,對HAT比較敏感;該細胞可以作為細胞融合時的B細胞組分用于制備雜交瘤;鼠痘病毒陰性。
培養(yǎng)條件 DMEM(高糖)+10%FBS
傳代方法 1:2傳代
我們的細胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等,購買到貨后,由我們實驗室擴增、凍存,凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測,100%進口來源,100%保證5代以內(nèi),活力>95%,無**、支原體污染。 細胞到達客戶手中,1個月內(nèi)出現(xiàn)任何問題,導(dǎo)致細胞在凍存前死亡,我們公司都可以免費再向客戶提供一次。產(chǎn)品僅用于科學研究
實驗材料:
1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶;8ml小牛血清(FCS) 1瓶;100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶;PBS(-)1 瓶
2. 100ml燒杯2個; 人皮膚成纖維細胞,CCC-HSF-1細胞
3、50ml離心筒2個
4、培養(yǎng)皿1個,細胞培養(yǎng)瓶1個
5、1ml ,200μl移液器各1支;槍頭盒2個;無菌玻璃攪拌棒1個
6、細胞計數(shù)板1塊;
7、滅好菌的鑷子1把,剪刀1把;
8、酒精燈1臺;
培養(yǎng)細胞凍存方案:
以下實驗方案介紹了培養(yǎng)細胞凍存的一般流程。詳細的實驗方案,必須參閱針對具體細胞的產(chǎn)品說明書。
1.配制凍存培養(yǎng)基,于2°C至8°C下儲存,直至使用。請注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細胞系。
2.凍存貼壁細胞時,利用傳代時所用方法輕柔地使細胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來。用該細胞所需完全培養(yǎng)基重新懸浮細胞。
3.采用血球計數(shù)器、細胞計數(shù)儀按照臺盼藍拒染法或者使用自動細胞計數(shù)儀測定總細胞數(shù)和活細胞百分比。根據(jù)所需活細胞密度,計算凍存培養(yǎng)基需要量。
4.以大約100-200×g的離心力將細胞懸液離心5至10分鐘。在無菌條件下小心倒掉上清液,不要攪動細胞沉淀。
注:離心速度和時間取決于細胞種類。
5.用預(yù)冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細胞沉淀,將其調(diào)整至該細胞適合的活細胞密度。
6.將細胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時,應(yīng)不時輕輕混合細胞,使其保持均勻的細胞懸液狀態(tài)。
7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細胞,使溫度每分鐘大約降低 1°C。或者,將裝有細胞的凍存管放入凍存盒中,然后將凍存盒置于-80°C條件下過夜。
培養(yǎng)操作步驟 :
1.用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時;
4.將經(jīng)過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片完全浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時,將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及細胞化學檢測。
小鼠高敏狀腺原酸(u-T3)ELISAKit Chlorpheniramine maleate 中文名:馬來酸氯苯那敏 分子式:C20H23ClN2O4
小鼠高敏甲狀腺素(u-T4)ELISAKit Tetrahydrolachnophyllum lactone 56407-87-5 中文名: 分子式:C10H14O2
小鼠高密度脂蛋白(HDL)ELISA試劑盒 Daturametelin I 904667-65-
硫酸妥布霉素 Tobramycin
Sulfate 質(zhì)量規(guī)格:含量634μg/mg-739μg/mg,BR 小鼠糖皮質(zhì)受體α(GRα)ELISA試劑盒 ,英文名: GRα ELISA Kit
硫酸妥布霉素(標準品) Tobramycin Sulfate 質(zhì)量規(guī)格:效價測定 豚鼠單核細胞趨化蛋白4(MCP-4/CCL13)ELISA檢測試劑盒GuineaPigmonocytechemotacticprotein4,MCP-4ELISAkit 96T/48T
托萘酯 Tolnaftate 質(zhì)量規(guī)格:>98%,USP30,BR 牛球蛋白A(IgA)試劑盒 Bovine Immunoglobulin A,IgA ELISA Kit
拓撲替康鹽酸鹽 Topotecan HCl 質(zhì)量規(guī)格:>99.0% 英文名稱HumanErythropoietinsolublereceptorELISAKit人紅細胞**素受體(EPOsR)規(guī)格:96T/48T
拓撲替康鹽酸鹽(標準品) Topotecan HCl 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標準品 動物糖蛋白硼酸(APA)樹脂法化試劑盒5
托拉塞米 Torasemide 質(zhì)量規(guī)格:>99%,USP32 raesistinELISA試劑盒大鼠抵抗素(Resistin)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
曲沃前列素 Travoprost 質(zhì)量規(guī)格:含>99.0% 小鼠糖皮質(zhì)受體α(GR-α)ELISA 試劑盒
鹽酸曲唑酮 Trazodone HCl 質(zhì)量規(guī)格:>98.5%,USP32,BR,可用于細胞培養(yǎng) Rat cyclosporine A (CsA) ELISA Kit 大鼠環(huán)孢素A(CsA)ELISA試劑盒
鹽酸曲唑酮(標準品) Trazodone HCl 質(zhì)量規(guī)格:>98%,標準品 Humanoctameranscriptionfactor2A,OTF2AELISAKit 人八聚體轉(zhuǎn)錄因子(OTF2A)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝
曲洛司坦/ 亞硝酸鹽環(huán)氧雄烷
Trilostane 質(zhì)量規(guī)格:>99.0%,BR Chickenα-Glucosidase,a-GluELISA試劑盒雞α葡萄糖苷酶(a-Glu)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
病毒DNA/RNA提取試劑盒(過柱法)o-Acetoacetaniside925鄰乙酰乙酰
干性植物組織基因組提取試劑盒Acetoacetanilide21乙酰
豬圓環(huán)PCV抗體快速檢測卡5-Acetoacetlamino benzimdazolone2657665-乙酰乙酰并咪唑酮
豬瘟CSFV抗體快速檢測卡4'-Methoxyacetanilide5164'-甲氧基
豬偽狂犬PRV抗體快速檢測卡N-(2-Methoxyphenyl)acetamide9362-乙酰
收到如何處理:
1、首先,觀察培養(yǎng)瓶是否完好,培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象。若有,請拍照,并及時與技術(shù)支持聯(lián)系(所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù))。
2、用75%酒精擦拭細胞培養(yǎng)瓶表面,顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題,部分貼壁細胞會有少量從瓶壁脫落;先不要打開培養(yǎng)瓶蓋,將細胞置于細胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2-4小時,以便穩(wěn)定細胞狀態(tài)。
3、仔細閱讀細胞說明書,了解細胞相關(guān)信息,如貼壁特性(貼壁/懸?。?、細胞形態(tài)、所用基礎(chǔ)培養(yǎng)基、血清比例、所需細胞因子、傳代比例、換液頻率等。
4、靜置完成后,取出細胞培養(yǎng)瓶,鏡檢、拍照,記錄細胞狀態(tài)(所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù));建議細胞傳代培養(yǎng)后,定期拍照、記錄細胞生長狀態(tài)。
5、Sp2/0-Ag14細胞貼壁細胞:若細胞生長密度超過80%,可正常傳代;若未超過80%,移除細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)基,預(yù)留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng),直至細胞密度達80%左右再進行傳代操作,瓶蓋可稍微擰松。
6、懸浮細胞:將細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)液體全部轉(zhuǎn)移至50ml無菌離心管內(nèi),1200rpm離心5min,離心后上清培養(yǎng)基可收集備用,管底細胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打、重懸。鏡檢時,若細胞密度超過80%,可將細胞懸液分至2個細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng),補加培養(yǎng)基至5ml;若細胞密度未超過80%,將細胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng),直至細胞密度達80%左右時再進行傳代操作。