實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說明 ：
1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法； 
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)玻璃**，并經(jīng)過鉻酸洗液處理； 
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕； 
4．如果需要更多生長(zhǎng)狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率； 
5．如果細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

產(chǎn)品詳細(xì) 乳腺導(dǎo)管癌細(xì)胞
形態(tài)特性 上皮樣
生長(zhǎng)特性 貼壁生長(zhǎng)
特征特性
培養(yǎng)條件 RPMI-1640 +10%FBS
傳代方法 1:2~1:3傳代；每周換液2~3次。
我們的細(xì)胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購(gòu)買到貨后，由我們實(shí)驗(yàn)室擴(kuò)增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測(cè)，100%進(jìn)口來源，100%保證5代以內(nèi)，活力>95%，無**、支原體污染。 細(xì)胞到達(dá)客戶手中，1個(gè)月內(nèi)出現(xiàn)任何問題，導(dǎo)致細(xì)胞在凍存前死亡，我們公司都可以免費(fèi)再向客戶提供一次。產(chǎn)品僅用于科學(xué)研究
實(shí)驗(yàn)材料： 
1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶 
2. 100ml燒杯2個(gè)； 人皮膚成纖維細(xì)胞,CCC-HSF-1細(xì)胞
3、50ml離心筒2個(gè) 
4、培養(yǎng)皿1個(gè)，細(xì)胞培養(yǎng)瓶1個(gè) 
5、1ml ，200μl移液器各1支；槍頭盒2個(gè)；無菌玻璃攪拌棒1個(gè) 
6、細(xì)胞計(jì)數(shù)板1塊； 
7、滅好菌的鑷子1把，剪刀1把； 
8、酒精燈1臺(tái)； 

培養(yǎng)細(xì)胞凍存方案：
以下實(shí)驗(yàn)方案介紹了培養(yǎng)細(xì)胞凍存的一般流程。詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)方案，必須參閱針對(duì)具體細(xì)胞的產(chǎn)品說明書。 
1.配制凍存培養(yǎng)基，于2°C至8°C下儲(chǔ)存，直至使用。請(qǐng)注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細(xì)胞系。
2.凍存貼壁細(xì)胞時(shí)，利用傳代時(shí)所用方法輕柔地使細(xì)胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來。用該細(xì)胞所需完全培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞。
3.采用血球計(jì)數(shù)器、細(xì)胞計(jì)數(shù)儀按照臺(tái)盼藍(lán)拒染法或者使用自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀測(cè)定總細(xì)胞數(shù)和活細(xì)胞百分比。根據(jù)所需活細(xì)胞密度，計(jì)算凍存培養(yǎng)基需要量。
4.以大約100-200×g的離心力將細(xì)胞懸液離心5至10分鐘。在無菌條件下小心倒掉上清液，不要攪動(dòng)細(xì)胞沉淀。
注：離心速度和時(shí)間取決于細(xì)胞種類。
5.用預(yù)冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞沉淀，將其調(diào)整至該細(xì)胞適合的活細(xì)胞密度。
6.將細(xì)胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時(shí)，應(yīng)不時(shí)輕輕混合細(xì)胞，使其保持均勻的細(xì)胞懸液狀態(tài)。
7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細(xì)胞，使溫度每分鐘大約降低  1°C。或者，將裝有細(xì)胞的凍存管放入凍存盒中，然后將凍存盒置于-80°C條件下過夜。 
培養(yǎng)操作步驟 ：
1．用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布； 
2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）； 
3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)； 
4．將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片完全浸在培養(yǎng)液中； 
5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。 
豚鼠白介素22(IL-22)ELISA試劑盒 ，英文名： IL-22 ELISA Kit  2-Amino-6-ethoxybenzothiazole  中文名：2-氨基-6-乙氧基苯并噻唑  分子式：C9H10N2OS  度：99.0%

豚鼠白介素2(IL-2)ELISA試劑盒 ，英文名： IL-2 ELISA Kit  2-Amino-6-chloropurine  10310-21-1  中文名：2-氨基-6-氯嘌呤  分子式：C5H4ClN5  度：98.0%  關(guān)鍵詞： 

豚鼠白介素2(IL2
鹽酸酪胺  Tyramine   質(zhì)量規(guī)格：>97%,BR Rat parathyroid hormone related protein (PTHrP) ELISA Kit 大鼠甲狀旁腺相關(guān)蛋白(PTHrP)ELISA試劑盒

糠酸(>97%，BR)  2-Furoic acid  質(zhì)量規(guī)格：>97%，BR Humandynorphin,DynELISAKit 人強(qiáng)啡肽(Dyn)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

2-甲基咪唑(>98%,BR)  2-Methylimidazole  質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR Human25-DihydroxyvitaminD3,HVD3ELISA試劑盒人25羥基維生素D3(25(OH)D3/25HVD3)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

6-氯嘌呤(>98%,BR)  6-Chloropurine  質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR /酵母纖維素酶(cellulase)活性比色法定量檢測(cè)試劑盒20

Big CHAP(>98%，BR)  Big CHAP  質(zhì)量規(guī)格：>98%，BR MouseApolipoproteinE,Apo-EELISAKit小鼠載脂蛋白E(Apo-E)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

C12E8 10%溶液  C12E8  質(zhì)量規(guī)格：BR 小鼠尿微量白蛋白(ALB)ELISA試劑盒 ，英文名： ALB ELISA Kit

氟化鈣(>98%,BR)  Calcium floride  質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR 小鼠信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)分子7(Smad7)ELISA檢測(cè)試劑盒MouseSmad7ELISAKit 96T/48T

硬脂酸鈣  Calcium stearate  質(zhì)量規(guī)格：BR 人泛素蛋白(Ub)試劑盒 Human ubiquitin,Ub ELISA Kit

香柏油  Cedar wood oil  質(zhì)量規(guī)格：商品級(jí) Ratmacrophageinflammatoryprotein1α,MIP-1αELISAKit大鼠巨噬細(xì)胞炎癥蛋白1α(MIP-1α/CCL3)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

硫酸鈰八水(>97%,BR)  Cerium(III) sulfate, octahydrate  質(zhì)量規(guī)格：>97%,BR DAPI復(fù)染試劑盒50
5M NaCl0ml3,9-Bis(2-cyanoethyl),4,8,-tetraoxaspiro[5.5]undecane58/4/63,9-雙(3-乙基),4,8,-四氧雜螺[5.5]十一烷

6×DualColorDNA loading buffer×1ml/ ml3,6'-Disinapoylsucrose13989183,6'- 二芥子酰基蔗糖

6×MonoColor DNA loading buffer（單染料）×1ml3,6-Bis(hydroxymethyl)durene752223,6-雙(羥甲基)杜烯

6×Native PAGE DNA loading buffer×1ml 3',6'-Bis(diethylamino)-(4-nitrophenyl)spiro[isoindole,9'-xanthene]-one2919993',6'-雙(二乙氨基)-(4-基)螺[異吲哚,9'-氧雜蒽]-酮

6×RealSafe DNA loading buffer2×1ml3,5-Di-O-caffeoylquinic acid243異綠原酸A
收到如何處理:
1、首先，觀察培養(yǎng)瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象。若有，請(qǐng)拍照，并及時(shí)與技術(shù)支持聯(lián)系（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）。
2、用75%酒精擦拭細(xì)胞培養(yǎng)瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問題，部分貼壁細(xì)胞會(huì)有少量從瓶壁脫落；先不要打開培養(yǎng)瓶蓋，將細(xì)胞置于細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2-4小時(shí)，以便穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
3、仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如貼壁特性（貼壁/懸?。?、細(xì)胞形態(tài)、所用基礎(chǔ)培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子、傳代比例、換液頻率等。
4、靜置完成后，取出細(xì)胞培養(yǎng)瓶，鏡檢、拍照，記錄細(xì)胞狀態(tài)（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）；建議細(xì)胞傳代培養(yǎng)后，定期拍照、記錄細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)。
5、貼壁細(xì)胞：若細(xì)胞生長(zhǎng)密度超過80%，可正常傳代；若未超過80%，移除細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)培養(yǎng)基，預(yù)留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng)，直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右再進(jìn)行傳代操作，瓶蓋可稍微擰松。
6HCC1419細(xì)胞、懸浮細(xì)胞：將細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)液體全部轉(zhuǎn)移至50ml無菌離心管內(nèi)，1200rpm離心5min，離心后上清培養(yǎng)基可收集備用，管底細(xì)胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打、重懸。鏡檢時(shí)，若細(xì)胞密度超過80%，可將細(xì)胞懸液分至2個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)培養(yǎng)，補(bǔ)加培養(yǎng)基至5ml；若細(xì)胞密度未超過80%，將細(xì)胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng)，直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右時(shí)再進(jìn)行傳代操作。