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我們的細(xì)胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等,購買到貨后,由我們實驗室擴(kuò)增、凍存,凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測,100%進(jìn)口來源,100%保證5代以內(nèi),活力>95%,無**、支原體污染。 細(xì)胞到達(dá)客戶手中,1個月內(nèi)出現(xiàn)任何問題,導(dǎo)致細(xì)胞在凍存前死亡,我們公司都可以免費(fèi)再向客戶提供一次。產(chǎn)品僅用于科學(xué)研究
產(chǎn)品名稱 |
NCI-H1915細(xì)胞 |
規(guī)格 |
T25 |
貨號 |
BH-0109930 |
產(chǎn)品詳細(xì) 非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞
形態(tài)特性
生長特性 貼壁生長
特征特性
培養(yǎng)條件 RPMI-1640+10%FBS
傳代方法 每周換液2~3次
實驗材料:
1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶;8ml小牛血清(FCS) 1瓶;100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶;PBS(-)1 瓶
2. 100ml燒杯2個; 人皮膚成纖維細(xì)胞,CCC-HSF-1細(xì)胞
3、50ml離心筒2個
4、培養(yǎng)皿1個,細(xì)胞培養(yǎng)瓶1個
5、1ml ,200μl移液器各1支;槍頭盒2個;無菌玻璃攪拌棒1個
6、細(xì)胞計數(shù)板1塊;
7、滅好菌的鑷子1把,剪刀1把;
8、酒精燈1臺;
培養(yǎng)細(xì)胞凍存方案:
以下實驗方案介紹了培養(yǎng)細(xì)胞凍存的一般流程。詳細(xì)的實驗方案,必須參閱針對具體細(xì)胞的產(chǎn)品說明書。
1.配制凍存培養(yǎng)基,于2°C至8°C下儲存,直至使用。請注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細(xì)胞系。
2.凍存貼壁細(xì)胞時,利用傳代時所用方法輕柔地使細(xì)胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來。用該細(xì)胞所需完全培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞。
3.采用血球計數(shù)器、細(xì)胞計數(shù)儀按照臺盼藍(lán)拒染法或者使用自動細(xì)胞計數(shù)儀測定總細(xì)胞數(shù)和活細(xì)胞百分比。根據(jù)所需活細(xì)胞密度,計算凍存培養(yǎng)基需要量。
4.以大約100-200×g的離心力將細(xì)胞懸液離心5至10分鐘。在無菌條件下小心倒掉上清液,不要攪動細(xì)胞沉淀。
注:離心速度和時間取決于細(xì)胞種類。
5.用預(yù)冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞沉淀,將其調(diào)整至該細(xì)胞適合的活細(xì)胞密度。
6.將細(xì)胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時,應(yīng)不時輕輕混合細(xì)胞,使其保持均勻的細(xì)胞懸液狀態(tài)。
7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細(xì)胞,使溫度每分鐘大約降低 1°C?;蛘?,將裝有細(xì)胞的凍存管放入凍存盒中,然后將凍存盒置于-80°C條件下過夜。
培養(yǎng)操作步驟 :
1.用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時;
4.將經(jīng)過計數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片完全浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時,將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及細(xì)胞化學(xué)檢測。
實驗要點及說明 :
1.本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng),而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng),懸浮細(xì)胞可使用滴片法;
2.所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)玻璃**,并經(jīng)過鉻酸洗液處理;
3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時動作要輕;
4.如果需要更多生長狀態(tài)一致的細(xì)胞,可以使用較大的培養(yǎng)皿,但不宜過大,以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率;
5.如果細(xì)胞貼壁生長能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
兔白介素-8(rabbit IL-8) 作用: ELISA 規(guī)格:
48T/96T 進(jìn)口分裝
4-Benzyloxyindole 20289-26-3 中文名:4-芐氧基吲哚 分子式:C15H13NO
兔白介素-6(rabbit IL-6) 作用: ELISA 規(guī)格: 48T/96T 進(jìn)口分裝 4-Benzyloxyindole 20289-26-3 中文名:4-芐氧基吲哚 分子式:C15H13NO 度:98.0%
兔白介素6(IL-6
胰酶(1:4500)
Pancreatin 質(zhì)量規(guī)格:酶活1:4500,BR MouseThioredoxin,xELISA試劑盒小鼠硫氧化還原蛋白(x)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
枸櫞酸奧芬那君;枸酸芬那君 Orphenadrine 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR 小鼠抗心0脂抗體IgM(ACA-IgM)ELISA試劑盒 ,英文名: ACA-IgM ELISA Kit
β-半乳糖苷酶 β-Galactosidase 質(zhì)量規(guī)格:700u/mg,羅氏分裝 大鼠肌紅蛋白(MYO/MB)ELISA檢測試劑盒RatMyoglobin,MYO/MBELISAKit 96T/48T
脫落酸(標(biāo)準(zhǔn)品) Abscisic acid,S-ABA 質(zhì)量規(guī)格:98%,標(biāo)準(zhǔn)品 人蛋白(肽酰脯氨酰順/反異構(gòu)酶)NIMA結(jié)合1(PIN1)試劑盒 Human PIN1 ELISA Kit
脫落酸(高) Abscisic acid,S-ABA 質(zhì)量規(guī)格:98%,BR Ratplaceagrowthfactor,PLGFELISAKit大鼠胎盤生長因子(PLGF)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
脫落酸,S-誘抗素; 壯芽靈 Abscisic acid,S-ABA 質(zhì)量規(guī)格:95%,BR GSK-3BETA蛋白共沉淀分析試劑盒5
胃蛋白酶(1:3000) PEPSIN 質(zhì)量規(guī)格:1:3000,BR Mousethrombieceptor,ELISA試劑盒小鼠凝血酶受體()ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
核糖核酸酶A(sigma) Ribonuclease A from bovine pancreas 質(zhì)量規(guī)格:≥50 U/mg,sigma 原裝 小鼠抗心0脂抗體IgG(ACA-IgG)ELISA試劑盒 ,英文名: ACA-IgG ELISA Kit
S-4 Andarine 質(zhì)量規(guī)格:>98% 大鼠維生素B6(VB6)ELISA檢測試劑盒RatVitaminB6,VB6ELISAKit 96T/48T
胃蛋白酶(1:12000) PEPSIN
質(zhì)量規(guī)格:1:12000,BR 人蛋白 DJ-1(PARK7)試劑盒 Human Protein DJ-1,PARK7 ELISA kit
人白介素1受體Ⅰ(IL-1R1)酶聯(lián)吸附測定試劑盒 別稱:IL1-R1, CD121a, D2S1473, IL-1R-alpha,
IL1R, IL1RA, P80 Human IL-1R1(Interleukin 1 Receptor Type Ⅰ) ELISA Kit 用途 該試劑盒用于體外定量檢測Human 血清,血漿或其他生物體液中天然及部分重組IL-1R1濃度
收到如何處理:
1、首先,觀察培養(yǎng)瓶是否完好,培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象。若有,請拍照,并及時與技術(shù)支持聯(lián)系(所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù))。
2、用75%酒精擦拭細(xì)胞培養(yǎng)瓶表面,顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問題,部分貼壁細(xì)胞會有少量從瓶壁脫落;先不要打開培養(yǎng)瓶蓋,將細(xì)胞置于細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2-4小時,以便穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
3、仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書,了解細(xì)胞相關(guān)信息,如貼壁特性(貼壁/懸?。?、細(xì)胞形態(tài)、所用基礎(chǔ)培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子、傳代比例、換液頻率等。
4、NCI-H1915細(xì)胞靜置完成后,取出細(xì)胞培養(yǎng)瓶,鏡檢、拍照,記錄細(xì)胞狀態(tài)(所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù));建議細(xì)胞傳代培養(yǎng)后,定期拍照、記錄細(xì)胞生長狀態(tài)。
5、貼壁細(xì)胞:若細(xì)胞生長密度超過80%,可正常傳代;若未超過80%,移除細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)基,預(yù)留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng),直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右再進(jìn)行傳代操作,瓶蓋可稍微擰松。
6、懸浮細(xì)胞:將細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)液體全部轉(zhuǎn)移至50ml無菌離心管內(nèi),1200rpm離心5min,離心后上清培養(yǎng)基可收集備用,管底細(xì)胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打、重懸。鏡檢時,若細(xì)胞密度超過80%,可將細(xì)胞懸液分至2個細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng),補(bǔ)加培養(yǎng)基至5ml;若細(xì)胞密度未超過80%,將細(xì)胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng),直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右時再進(jìn)行傳代操作。