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菌種的培養(yǎng):
1、是指食用菌菌絲體及其生長(zhǎng)基質(zhì)組成的繁殖材料。菌種分為母種(種)、原種(二級(jí)種)和栽培種(三級(jí)種)三級(jí)。工業(yè)發(fā)酵的有用菌種,其篩選步驟包括菌種分離、初篩和復(fù)篩。
2、挑選具有某種能力的有用菌種,也稱種子制備,是指菌種在一定條件下,經(jīng)過擴(kuò)大培養(yǎng)成為具有一定數(shù)量和質(zhì)量的純生產(chǎn)菌種的制備過程。以作接入發(fā)酵罐中進(jìn)一步擴(kuò)大菌體量及合成產(chǎn)物之用。
3、種子制備包括孢子制備和菌絲體制備 菌種制備。
4、保存在沙土管或冷凍管中的生產(chǎn)菌種,用無(wú)菌手續(xù)挑取少許,接入瓊脂斜面培養(yǎng)基上,在25℃(或較高溫度)下培養(yǎng)5~7天(或較長(zhǎng)時(shí)間。所得孢子還需進(jìn)一步用較大表面積的固體培養(yǎng)基以獲得更多孢子(對(duì)于霉菌類孢子制備,多數(shù)采用大米、小米之類的天然培養(yǎng)基)。
5、將培養(yǎng)成熟的斜面孢子制成懸浮液,接種到扁瓶固體培養(yǎng)基上,于25~28℃培養(yǎng)14天。將成熟的扁瓶孢子于真空中抽干,使水分降至10%以下,并放入 4℃冰箱中備用。一次制得的孢子瓶可在生產(chǎn)上延續(xù)使用半年左右。
6、如果有些生產(chǎn)菌種不產(chǎn)孢子,如赤霉素產(chǎn)生菌或產(chǎn)孢子不多的,則可采用搖瓶液體培養(yǎng)制得菌絲體,作種子罐的種子。種子罐的目的是使接入有限的孢子或菌絲體迅速發(fā)芽、生長(zhǎng)、繁殖成大量菌體。其中的培養(yǎng)基組分應(yīng)是易于被菌體利用的碳源(如葡萄糖)和氮源(如玉米漿),及無(wú)機(jī)鹽(如磷酸鹽)等。作為發(fā)酵罐的種子應(yīng)生命力旺盛、染色深、菌絲粗壯,無(wú)雜菌及異常菌體。接種量一般在10%~20%。產(chǎn)品僅用于科研
產(chǎn)品名稱
葡萄座腔菌 斜面
英文名稱
Botryosphaeria
dothidea
貨號(hào)
BH-J011175
產(chǎn)品名稱:葡萄座腔菌 斜面
編號(hào):BH-J011175
拉丁文:Botryosphaeria dothidea
分離基物: 蘋果果實(shí)
提供形式: 斜面培養(yǎng)物
**等級(jí): 1
模式菌株: no
培養(yǎng)基: 綜合PDA:馬鈴薯煮汁1000mL,磷酸二氫鉀 3.0g,七水硫酸鎂 1.5g,葡萄糖 20.0g,維生素B1 10mg,瓊脂 20g,pH自然。馬鈴薯煮液:200g馬鈴薯,去皮,切塊,放入蒸餾水中煮沸30min,取濾液定容至1000mL,備用。121℃,15min。
傳代方法: (BNCC測(cè)序修正)
生長(zhǎng)條件: 25℃,好氧
存儲(chǔ)條件: 定期移植法
保存方法:
傳代保存法:培養(yǎng)基的濃度不宜過高,營(yíng)養(yǎng)成分不宜過于豐富,尤其是碳水化合物的濃度應(yīng)在可能的范圍內(nèi)盡量降低。培養(yǎng)溫度通常以稍低于適生長(zhǎng)溫度為好。若為產(chǎn)酸菌種,則應(yīng)在培養(yǎng)基中添加少量碳酸鈣 [3] 。
液體石蠟覆蓋保存法:該法較前一種方法保存菌種的時(shí)間更長(zhǎng),適用于霉菌、酵母菌、放線菌及需氧等的保存。
懸液保存法:
① 蒸餾水保存法:適用于霉菌、酵母菌及絕大部分放線菌,將其菌體懸浮于蒸餾水中即可在室溫下保存數(shù)年。本法應(yīng)注意避免水分的蒸發(fā)。
② 糖液保存法:適用于酵母菌,如將其菌體懸浮于10%的蔗糖溶液中,然后于冷暗處保存,可長(zhǎng)達(dá)10年。除此之外,也可使用緩沖液或食鹽水等進(jìn)行保存。
載體保存法:①土壤保存法;②砂土保存法;③硅膠保存法;④磁珠保存法;⑤麩皮保存法;⑥紙片(濾紙)保存法。
常用的冷凍保存法:
① 低溫冰箱保存法(-20℃、-50℃或-85℃):低溫冷凍保存時(shí)使用螺旋口試管較為方便,也可在棉塞試管外包裹塑料薄膜。保存時(shí)菌液加量不宜過多,有些可添加保護(hù)劑。此外,也可用φ5mm的玻璃珠來(lái)吸附菌液,然后把玻璃珠置于塑料容器內(nèi),再放入低溫冰箱內(nèi)進(jìn)行保存的。
② 干冰保存法(-70℃左右):即將菌種管插入干冰內(nèi),再置于冰箱內(nèi)進(jìn)行冷凍保存。
③ 液氮保存法(-196℃):是適用范圍廣的微生物保存法。
微生物菌種的培養(yǎng):
⒈ 孢子制備
⑴ 放線菌孢子的制備
一般采用瓊脂斜面培養(yǎng)基,培養(yǎng)基中含有一些適合產(chǎn)孢子的營(yíng)養(yǎng)成分,如麩皮、豌豆浸汁、蛋白胨和一些無(wú)機(jī)鹽等。碳源和氮源不要太豐富(碳源約為1%,氮源不超過0.5%),碳源豐富容易造成生理酸性的營(yíng)養(yǎng)環(huán)境,不利于放線菌孢子的形成,氮源豐富則有利于菌絲繁殖而不利于孢子形成。一般情況下,干燥和限制營(yíng)養(yǎng)可直接或間接誘導(dǎo)孢子形成。放線菌斜面的培養(yǎng)溫度大多數(shù)為28 ℃,少數(shù)為37 ℃,培養(yǎng)時(shí)間為5~14天。
⑵ 霉菌孢子的制備
霉菌的孢子培養(yǎng),一般以大米、小米、玉米、麩皮、麥粒等天然農(nóng)產(chǎn)品為培養(yǎng)基。這是由于這些農(nóng)產(chǎn)品中的營(yíng)養(yǎng)成分較適合霉菌的孢子繁殖,而且這類培養(yǎng)基的表面積較大,可獲得大量的孢子。霉菌的培養(yǎng)一般為25~28 ℃,培養(yǎng)時(shí)間為4~14天。
⒉ 種子制備
⑴ 搖瓶種子制備
搖瓶種子進(jìn)罐,常采用母瓶、子瓶?jī)杉?jí)培養(yǎng),有時(shí)母瓶種子也可以直接進(jìn)罐。種子培養(yǎng)基要求比較豐富和完全,并易被菌體分解利用,氮源豐富有利于菌絲生長(zhǎng)。原則上各種營(yíng)養(yǎng)成分不宜過濃,子瓶培養(yǎng)基濃度比母瓶略高,更接近種子罐的培養(yǎng)基配方。
⑵ 種子罐種子制備
葡萄座腔菌 斜面種子罐種子制備的工藝過程,因菌種不同而異,一般可分為種子、二級(jí)種子和三級(jí)種子的制備。孢子(或搖瓶菌絲)被接入到體積較小的種子罐中,經(jīng)培養(yǎng)后形成大量的菌絲,這樣的種子稱為種子,把種子轉(zhuǎn)入發(fā)酵罐內(nèi)發(fā)酵,稱為二級(jí)發(fā)酵。如果將種子接入體積較大的種子罐內(nèi),經(jīng)過培養(yǎng)形成更多的菌絲,這樣制備的種子稱為二級(jí)種子,將二級(jí)種子轉(zhuǎn)入發(fā)酵罐內(nèi)發(fā)酵,稱為三級(jí)發(fā)酵。同樣道理,使用三級(jí)種子的發(fā)酵,稱為四級(jí)發(fā)酵。
公司專業(yè)代理ATCC菌種,價(jià)格優(yōu)惠,質(zhì)量保證,為大中型科研提供嚴(yán)格質(zhì)量體系控制的ATCC,CMCC,CICC,DSMZ標(biāo)準(zhǔn)菌株。
鮭魚精DNA
DNA from salmon sperm 質(zhì)量規(guī)格:進(jìn)分,Sigma31149,蛋白小于5% 人蛋白水解誘導(dǎo)因子/皮離蛋白(PIF/DCD)試劑盒 Human
PIF/DCD ELISA Kit
5-氟脫氧胞苷
5-Fluoro-2'-deoxycytidine 質(zhì)量規(guī)格:98%,進(jìn)分 人蛋白脂質(zhì)蛋白抗體(PLP)試劑盒 Human
proteolipid protein,PLP ELISA Kit
5-氟-2‘-脫氧尿苷;氟尿苷
5-Fluoro-2'--deoxyuridine 質(zhì)量規(guī)格:>99%,BR 人蛋白質(zhì)二硫鍵異構(gòu)酶(PDI)ELISA檢測(cè)試劑盒Humanproteindisulfideisomerase,PDIELISAKit 96T/48T
鳥苷;鳥嘌呤核苷 Guanosine 質(zhì)量規(guī)格:≥98%,細(xì)胞培養(yǎng)級(jí) 人蛋白質(zhì)二硫鍵異構(gòu)酶(PDI)試劑盒 Human protein disulfide isomerase,PDI
ELISA Kit
鳥嘌呤核苷(標(biāo)準(zhǔn)品) Guanosine 質(zhì)量規(guī)格:≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品 人蛋酸酶(PP)ELISA檢測(cè)試劑盒HumanProteinPhosphatase,PPELISAKit
96T/48T
GDPNa2;5’-二鳥苷二鈉 GDP
Di Salt 質(zhì)量規(guī)格:>90%,BR 人蛋酸酶1調(diào)控/抑制因子亞基1A(PPP1R1A)試劑盒 Human
protein phosphatase 1 regulatory subunit A,PPP1R1A ELISA Kit
SU11274 SU-11274 質(zhì)量規(guī)格:>98%,選擇性的Met抑制劑 人蛋酸酶2(2A),催化亞基,β亞型(PPP2CB)試劑盒 Human PPP2CB ELISA kit
尿苷;尿嘧啶核苷
Uridine 質(zhì)量規(guī)格:>99%,BR,可用于細(xì)胞培養(yǎng) 人刀A(ConA)ELISA檢測(cè)試劑盒HumanconcanavalinA,ConAELISAKit 96T/48T
尿嘧啶核苷,尿苷(標(biāo)準(zhǔn)品) Uridine 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品 人的牛血清白蛋白(BSA)試劑盒 Human bovine serum albumin,BSA ELISA kit
UTP;5‘-三尿苷三鈉
UTP, Tri Salt 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR 人的牛血清白蛋白殘留檢測(cè)ELISA檢測(cè)試劑盒Humaudimealbovineserumalbumincheck-upELISAKit 96T/48T
1173154-32-9 ALB-127158(a)
25mg Batrachochytrium
dendrobatidis箭毒蛙壺菌探針法熒光定量PCR試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測(cè)(科研用)/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度
1173154-32-9 ALB-127158(a)
50mg Batrachochytrium
dendrobatidis箭毒蛙壺菌探針法熒光定量PCR試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測(cè)(科研用)/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度
1173154-32-9 ALB-127158(a)
5mg Blastocystis spp.芽囊原蟲通用探針法熒光定量PCR試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測(cè)(科研用)/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度
1173204-81-3 PKI-402
10mg Dictyocaulus filaria絲狀網(wǎng)尾線蟲探針法熒光定量PCR試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測(cè)(科研用)/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度
1173204-81-3 PKI-402
10mM(in1mLDMSO) Dictyocaulus
filaria絲狀網(wǎng)尾線蟲探針法熒光定量PCR試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測(cè)(科研用)/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度
苯嘧磺草胺一水合物 標(biāo)準(zhǔn)品 Secnidazole 372137-35-4 純品型,0.1g
D-(+)-蔗糖 標(biāo)準(zhǔn)品 D(+)-Saccharose 57-50-1 純品型,0.25g
糖精鈉 標(biāo)準(zhǔn)品 Saccharinsodium 128-44-9 純品型,0.25g