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分享ELISA雙抗體夾心法?實驗步驟?
日期：2024-12-28 18:25
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摘要：
雙抗體夾心法首先也是用特異性抗體包被于固相載體，經(jīng)洗滌后加入含有抗原之待測樣品，如待檢樣品中有相應抗原存在，即可與包被于固相載體上的特異性抗體結(jié)合，經(jīng)保溫孵育洗滌后，即可加入酶標記特異性抗體，再經(jīng)孵育洗滌后，加底物顯色進行測定，底物降解的量即為欲測抗原的量。
這種方法欲測的抗原必須有兩個可以與抗體結(jié)合的部位，因為其一端要包被于固相載體上的抗體作用，而另一端則要與酶標記特異性抗體作用。因此，不能用于分子量小于5000的半抗原之類的抗原測定。我們用在霍亂腸毒su的測定。HbSAg及HbS的測定。
ELISA雙抗體夾心法實驗步驟:
一、包被抗體：用包被緩沖液稀釋特異性抗體球蛋白至合適濃度（1～10 ug /ml），每凹孔加0.3 ml，4℃過夜，或37℃水浴3小時，貯存冰箱。二、洗滌：移去包被液，凹孔用洗滌緩沖液（含0.05%吐溫-20）洗3次，每次5分鐘。
三、每凹孔加入0.2 ml用稀釋緩沖液稀釋的含抗原的被檢標本，37℃作用1～2小時。
四、洗滌：移去包被液，凹孔用洗滌緩沖液（含0.05%吐溫-20）洗3次，每次5分鐘。
五、加入0.2 ml用稀釋緩沖液稀釋的酶標記特異性抗體溶液，37℃作用1～2小時或由預試實驗確定作用時間。
六、洗滌：移去包被液，凹孔用洗滌緩沖液（含0.05%吐溫-20）洗3次，每次5分鐘。
七、加入0.2ml底物溶液于每個凹孔(OPD或OT)，室溫作用30分鐘（另作一空白對照，0.4 ml底物加0.1 ml終止劑）。
八、加終止劑：每凹孔加2M H2SO4或2 M檸檬酸0.05 ml。
九、觀察記錄結(jié)果：目測或用酶標比色計測定（OPD用492nm）OD值。