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qPCR 實驗 Ct 值偏大或普通 PCR 產(chǎn)量低解析
日期：2024-12-28 03:50
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摘要：qPCR 實驗 Ct 值偏大或普通 PCR 產(chǎn)量低解析
逆轉(zhuǎn)錄后的 qPCR 實驗 Ct 值偏大或者普通 PCR 產(chǎn)量低。
1、RNA 模板質(zhì)量差，需要重新制備 RNA 模板，可通過瓊脂糖凝膠電泳檢測質(zhì)量。
2、 逆轉(zhuǎn)錄后的 cDNA 中含有高濃度的模板 RNA 和逆轉(zhuǎn)錄試劑成分，可能會對后續(xù)的PCR 產(chǎn)生抑制作用，所以可以適當梯度提高 cDNA 稀釋比例（通常來說可將 cDNA 原液稀釋5-10倍，其zui 佳模板加入量以擴增得到的 Ct 值在20-30個循環(huán)為好）。
3、 起始的 RNA 模板量低，需要減少稀釋倍數(shù)或增加 RNA 模板量。
4、 基因本身原因（復(fù)雜和長度），可以重新設(shè)計復(fù)雜基因的引物，避免復(fù)雜結(jié)構(gòu)?；蛘哂萌椒ǔ绦蚧蜓娱L兩步法程序的延伸時間。
5、 逆轉(zhuǎn)錄或者定量產(chǎn)品性能差，可以通過做平行不用品牌產(chǎn)品對比實驗，對比逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)品性能。