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WB結(jié)果中無信號或顯示信號弱可能的原因及建議
日期:2024-12-26 20:55
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摘要:
WB結(jié)果中無信號或顯示信號弱可能的原因及建議:
①你所檢測的樣本中不表達(dá)目的蛋白,選擇表達(dá)量高的細(xì)胞作為陽性對照,用于確定檢測樣本是否為陰性,同時查閱文獻(xiàn)。
②檢測樣本低表達(dá)目的蛋白,提高上樣量,裂解液中注意加入蛋白酶抑制劑。
③轉(zhuǎn)移不完全或過轉(zhuǎn)移,可以用麗春紅染膜并結(jié)合染膠(考馬斯亮藍(lán))后確定條帶是否轉(zhuǎn)至膜上或轉(zhuǎn)移過頭;適當(dāng)調(diào)整轉(zhuǎn)膜的時間和電流。
④抗體不能識別測試種屬的相關(guān)蛋白,購買抗體前應(yīng)當(dāng)認(rèn)真閱讀抗體說明書,確定其是否能夠交叉識別測試種屬的對應(yīng)蛋白。
⑤一抗孵育時間不足,建議4℃結(jié)合過...
WB結(jié)果中無信號或顯示信號弱可能的原因及建議:
①你所檢測的樣本中不表達(dá)目的蛋白,選擇表達(dá)量高的細(xì)胞作為陽性對照,用于確定檢測樣本是否為陰性,同時查閱文獻(xiàn)。
②檢測樣本低表達(dá)目的蛋白,提高上樣量,裂解液中注意加入蛋白酶抑制劑。
③轉(zhuǎn)移不完全或過轉(zhuǎn)移,可以用麗春紅染膜并結(jié)合染膠(考馬斯亮藍(lán))后確定條帶是否轉(zhuǎn)至膜上或轉(zhuǎn)移過頭;適當(dāng)調(diào)整轉(zhuǎn)膜的時間和電流。
④抗體不能識別測試種屬的相關(guān)蛋白,購買抗體前應(yīng)當(dāng)認(rèn)真閱讀抗體說明書,確定其是否能夠交叉識別測試種屬的對應(yīng)蛋白。
⑤一抗孵育時間不足,建議4℃結(jié)合過夜。
⑥二抗與一抗不匹配,選擇針對一抗來源的種屬的抗體。
⑦洗膜過度,洗膜時間不宜過長,加入的去垢劑不宜過強(qiáng)或過多,建議使用0.1%的弱去垢劑Tween-20。