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熒光定量PCR??擴增曲線有哪些時期
日期：2024-12-27 11:24
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摘要：
熒光定量PCR是通過檢測并記錄反應體系中熒光信號的變化來實時監(jiān)測整個PCR進程。熒光定量PCR的擴增程序，以熒光染料法為例，擴增程序可分為擴增反應階段和熔解反應階段。擴增反應階段采用兩步法擴增，每一次PCR循環(huán)結束都檢測并記錄熒光信號，由此得到一條擴增曲線。
擴增曲線是描述PCR動態(tài)進程的曲線，以循環(huán)數(shù)為橫坐標，以反應過程中實時熒光信號強度為縱坐標。
擴增曲線可以分成四個時期：基線期，指數(shù)期，線性期，平臺期。
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熒光定量PCR是通過檢測并記錄反應體系中熒光信號的變化來實時監(jiān)測整個PCR進程。熒光定量PCR的擴增程序，以熒光染料法為例，擴增程序可分為擴增反應階段和熔解反應階段。擴增反應階段采用兩步法擴增，每一次PCR循環(huán)結束都檢測并記錄熒光信號，由此得到一條擴增曲線。
擴增曲線是描述PCR動態(tài)進程的曲線，以循環(huán)數(shù)為橫坐標，以反應過程中實時熒光信號強度為縱坐標。
擴增曲線可以分成四個時期：基線期，指數(shù)期，線性期，平臺期。
1、基線期：擴增曲線的水平部分，擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋，無法判斷產(chǎn)物**量的變化。
2、指數(shù)期：PCR指數(shù)擴增期，擴增曲線起峰，每個循環(huán)的產(chǎn)物量與初始模板量符合指數(shù)關系，PCR產(chǎn)物量的對數(shù)值與起始模板量之間存在線性關系。
3、線性期：PCR反應后期，由于PCR反應體系各成分的消耗、產(chǎn)物抑制等因素的影響，反應效率降低，產(chǎn)物量與初始模板量不再符合指數(shù)關系。
4、平臺期：PCR反應停止，PCR產(chǎn)物不再隨循環(huán)數(shù)增加而增加。由于影響PCR擴增的因素錯綜復雜，每個反應進入平臺期的時間和平臺期的高低都各不相同。