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熒光染料優(yōu)缺點
日期：2024-12-28 18:35
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摘要：
熒光染料也稱DNA結(jié)合染料，目前主要使用的染料分子是SYBR Green I，SYBR Green I能與DNA雙鏈的小溝特異性的結(jié)合，游離的SYBR Green I幾乎沒有熒光信號，但結(jié)合雙鏈DNA后，其熒光信號可呈數(shù)百倍的增加。隨PCR產(chǎn)物的增加，PCR產(chǎn)物與染料的結(jié)合量也增大，其熒光信號強度代表雙鏈DNA分子的數(shù)量。
熒光染料的優(yōu)點：
1. 使用簡便；
2. 可以與任何PCR產(chǎn)物結(jié)合；
3. 價格便宜；
熒光染料的缺點：
1. 不能區(qū)分不同的雙鏈DNA
2. 引物二聚體會影響檢測的敏感性
3. 非特異性產(chǎn)物會影響結(jié)...
熒光染料也稱DNA結(jié)合染料，目前主要使用的染料分子是SYBR Green I，SYBR Green I能與DNA雙鏈的小溝特異性的結(jié)合，游離的SYBR Green I幾乎沒有熒光信號，但結(jié)合雙鏈DNA后，其熒光信號可呈數(shù)百倍的增加。隨PCR產(chǎn)物的增加，PCR產(chǎn)物與染料的結(jié)合量也增大，其熒光信號強度代表雙鏈DNA分子的數(shù)量。
熒光染料的優(yōu)點：
1. 使用簡便；
2. 可以與任何PCR產(chǎn)物結(jié)合；
3. 價格便宜；
熒光染料的缺點：
1. 不能區(qū)分不同的雙鏈DNA
2. 引物二聚體會影響檢測的敏感性
3. 非特異性產(chǎn)物會影響結(jié)果的敏感性
引物二聚體和非特異性擴增問題可以通過熔解曲線 (Melting curve) 進行識別，進而通過PCR引物的設(shè)計和反應(yīng)條件的優(yōu)化得以解決。
總的來說，SYBR Green I方法是一種*基礎(chǔ)也*常用的Real-time qPCR實驗手段。