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一抗是屬于哪個(gè)類或亞類確定指引
日期:2024-12-27 17:50
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摘要:
除了要與一抗的種屬來源相一致,二抗還需與一抗的類別或亞類相匹配,這通常是針對單克隆抗體而言。一般來說多克隆抗體主要是IgG類免 疫球蛋白,因此相應(yīng)的二抗就是抗IgG抗體。而單克隆抗體則相對復(fù)雜些,由于單克隆抗體有不同的類別和亞型,因此相應(yīng)的二抗也需要根據(jù)這些亞型進(jìn)行選擇。
單克隆抗體的類別及亞類通常會(huì)在產(chǎn)品說明書中都會(huì)有描述,如果您的一抗是小鼠IgM,那么相應(yīng)的二抗就應(yīng)當(dāng)是抗小鼠IgG抗體。如果單克隆一抗是小鼠IgG的某一亞類(IgG1,IgG2a,IgG2b,IgG3),那么幾乎所有的抗小鼠IgG都可以與之結(jié)合,...
除了要與一抗的種屬來源相一致,二抗還需與一抗的類別或亞類相匹配,這通常是針對單克隆抗體而言。一般來說多克隆抗體主要是IgG類免 疫球蛋白,因此相應(yīng)的二抗就是抗IgG抗體。而單克隆抗體則相對復(fù)雜些,由于單克隆抗體有不同的類別和亞型,因此相應(yīng)的二抗也需要根據(jù)這些亞型進(jìn)行選擇。
單克隆抗體的類別及亞類通常會(huì)在產(chǎn)品說明書中都會(huì)有描述,如果您的一抗是小鼠IgM,那么相應(yīng)的二抗就應(yīng)當(dāng)是抗小鼠IgG抗體。如果單克隆一抗是小鼠IgG的某一亞類(IgG1,IgG2a,IgG2b,IgG3),那么幾乎所有的抗小鼠IgG都可以與之結(jié)合,或者您也可以選擇專門針對這一亞類的二抗,例如,如果您的一抗是小鼠IgG1,那么您可以選擇抗IgG1的二抗,此種抗體在雙標(biāo)記實(shí)驗(yàn)中尤其適合。在不清楚一抗為何種類/亞類的情況下,可以選用抗相應(yīng)物種IgG,因?yàn)榇朔N抗體可以識(shí)別大多數(shù)類型的IgG免 疫球蛋白。
下面總結(jié)了幾種具有不同特異性的二抗:
單克隆抗體的類別及亞類通常會(huì)在產(chǎn)品說明書中都會(huì)有描述,如果您的一抗是小鼠IgM,那么相應(yīng)的二抗就應(yīng)當(dāng)是抗小鼠IgG抗體。如果單克隆一抗是小鼠IgG的某一亞類(IgG1,IgG2a,IgG2b,IgG3),那么幾乎所有的抗小鼠IgG都可以與之結(jié)合,或者您也可以選擇專門針對這一亞類的二抗,例如,如果您的一抗是小鼠IgG1,那么您可以選擇抗IgG1的二抗,此種抗體在雙標(biāo)記實(shí)驗(yàn)中尤其適合。在不清楚一抗為何種類/亞類的情況下,可以選用抗相應(yīng)物種IgG,因?yàn)榇朔N抗體可以識(shí)別大多數(shù)類型的IgG免 疫球蛋白。
下面總結(jié)了幾種具有不同特異性的二抗:
針對整個(gè)抗體分子(H+L)具有特異性:
如anti-IgG(H+L),此類抗體既可以與抗體的重鏈結(jié)合也可以與輕鏈結(jié)合,即與抗體分子的Fc,F(xiàn)(ab')2/Fab部分均可反應(yīng),anti-IgG(H+L)也可以與其他免 疫球蛋白家族反應(yīng)(如IgM和IgA),因?yàn)樗械拿?疫球蛋白都具有相同的輕鏈(κ鏈或λ鏈)。
針對Fab片段具有特異性:
這類抗體與重鏈輕鏈均可以結(jié)合,由于它們可以與輕鏈反應(yīng),它們同時(shí)也可以和具有相同輕鏈的其他種類的免 疫球蛋白反應(yīng)。
針對Fc片段或重鏈具有特異性:
這類抗體和重鏈的Fc部分反應(yīng),因此它們是類別特異性的。即gamma鏈特異性抗體只與IgG反應(yīng),mu鏈特異性抗體只識(shí)別IgM,依此類推。
輕鏈(lambda,kappa)特異性:
與所有類別的抗體反應(yīng),因?yàn)樗蓄悇e的抗體均具有相同的lambda鏈或kappa鏈。
經(jīng)過吸附處理的二抗:
不同來源的免 疫球蛋白含有相似的結(jié)構(gòu),抗一個(gè)物種的抗體可能與其他物種發(fā)生交叉反應(yīng),因此有些二抗經(jīng)過了動(dòng)物或人類IgG吸附處理,以減少非特異性背景。例如,如果是小鼠的組織或細(xì)胞,那么選擇經(jīng)小鼠血清或IgG吸附處理過的二抗可以減少非特異性結(jié)合。但是此種抗體識(shí)別表位的數(shù)量被大大減少。
如anti-IgG(H+L),此類抗體既可以與抗體的重鏈結(jié)合也可以與輕鏈結(jié)合,即與抗體分子的Fc,F(xiàn)(ab')2/Fab部分均可反應(yīng),anti-IgG(H+L)也可以與其他免 疫球蛋白家族反應(yīng)(如IgM和IgA),因?yàn)樗械拿?疫球蛋白都具有相同的輕鏈(κ鏈或λ鏈)。
針對Fab片段具有特異性:
這類抗體與重鏈輕鏈均可以結(jié)合,由于它們可以與輕鏈反應(yīng),它們同時(shí)也可以和具有相同輕鏈的其他種類的免 疫球蛋白反應(yīng)。
針對Fc片段或重鏈具有特異性:
這類抗體和重鏈的Fc部分反應(yīng),因此它們是類別特異性的。即gamma鏈特異性抗體只與IgG反應(yīng),mu鏈特異性抗體只識(shí)別IgM,依此類推。
輕鏈(lambda,kappa)特異性:
與所有類別的抗體反應(yīng),因?yàn)樗蓄悇e的抗體均具有相同的lambda鏈或kappa鏈。
經(jīng)過吸附處理的二抗:
不同來源的免 疫球蛋白含有相似的結(jié)構(gòu),抗一個(gè)物種的抗體可能與其他物種發(fā)生交叉反應(yīng),因此有些二抗經(jīng)過了動(dòng)物或人類IgG吸附處理,以減少非特異性背景。例如,如果是小鼠的組織或細(xì)胞,那么選擇經(jīng)小鼠血清或IgG吸附處理過的二抗可以減少非特異性結(jié)合。但是此種抗體識(shí)別表位的數(shù)量被大大減少。