兔羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)操作步驟：

1、細(xì)胞傳代：

細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代。

1、棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗-2次；

2、加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個(gè)瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；

3、-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；

4、將細(xì)胞懸液000RPM左右條件下離心4min，棄上清；

5、用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；

6、懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。

2、細(xì)胞復(fù)蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時(shí)間min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。

②在000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。

3、細(xì)胞凍存：

待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種

1、棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗-2次，加入mL 0.25%（T25瓶）

2、-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；

3、將細(xì)胞懸液000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加ml凍存液重懸細(xì)胞；

4、將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存。