檢測程序：
1.  加樣：每孔各加入標(biāo)準(zhǔn)品或待測樣品 100ul ，將反應(yīng)板充分混勻后置 37 ℃ 120 分鐘。
2.  洗板：用洗滌液將反應(yīng)板充分洗滌 4-6 次，向濾紙上印干。
3.  每孔中加入抗體工作液10 0ul 。將反應(yīng)板充分混勻后置 37 ℃ 6 0 分鐘。
4.  洗板：同前。
5.  每孔加酶標(biāo)抗體工作液100ul 。將反應(yīng)板置 37 ℃ 3 0 分鐘。
6.  洗板：同前。
7.  每孔加入底物工作液100ul ，置 37   ℃ 暗處反應(yīng)15 分鐘。
8.  每孔加入100ul 終止液混勻。
9.  30分鐘內(nèi)用酶標(biāo)儀在 45 0 nm 處測 吸光值。

下列是公司產(chǎn)品ELISA試劑盒的詳細(xì)說明書：
中文名稱：NUCB1人核連蛋白1免費(fèi)代測試劑盒
英文簡稱：Human Nucleobindin 1(NUCB1)ELISA Kit
產(chǎn)品貨號：PH101763
規(guī)格：96T/48T
適用范圍：僅供科研使用
保存及有效期：2-8℃保存，6個月，-20℃一年

試劑和樣本的控制方法：
一、試劑
1.試劑的選擇：國家明確要求要采用批批檢定的形式對ELISA試劑嚴(yán)格把關(guān)，我司嚴(yán)格按照國家標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行生產(chǎn)，已獲得國家承認(rèn)的“三證”，每一個產(chǎn)品都有對應(yīng)的生產(chǎn)批號，只要客戶提前下單，我們就能為您提供新批次的產(chǎn)品，不必?fù)?dān)心會有過期的試劑。我司的試劑，值得您選擇。
2.試劑的準(zhǔn)備：先將試劑盒先從冰箱中拿出來，在室溫下放置20-30 min后，再進(jìn)行測定，使試劑盒在使用前與室溫平衡，這樣做的目的能使反應(yīng)微孔內(nèi)的溫度較快地達(dá)到所需的溫度，以滿足后面的測定需求。
二、樣本
1.內(nèi)源性干擾因素：包括類風(fēng)濕因子、補(bǔ)體、高濃度的非特異球蛋白、異嗜性抗體、某些自身抗體等；
類風(fēng)濕因子的控制方法：
①用F(ab)2替代完整的IgG；
②標(biāo)本用聯(lián)有熱變性IgG的固相吸附劑處理；
③檢測抗原時，可用2-巰基乙醇加入到標(biāo)本稀釋液中使RF降解。

使用方法：
測定法的靈敏度來自作為報告的酶。眾所周知，酶是一種有機(jī)催化劑，很少量的酶即可誘導(dǎo)大量的催化反應(yīng)，產(chǎn)生可供觀察的顯色反應(yīng)現(xiàn)象。因此該體系常被稱為酶放大體系。
1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。   24μg/ml    5號標(biāo)準(zhǔn)品    150μl的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
 12μg/ml    4號標(biāo)準(zhǔn)品    150μl的5號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
 6μg/ml     3號標(biāo)準(zhǔn)品    150μl的4號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
 3μg/ml     2號標(biāo)準(zhǔn)品    150μl的3號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
 1.5μg/ml   1號標(biāo)準(zhǔn)品    150μl的2號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
2. 加樣：分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。|
3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。   
4. 配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。
7. 溫育：操作同3。
8. 洗滌：操作同5。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.
10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。
11. 測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。
ELISA 試驗時，注意事項如下： 
     1. 正式試驗時，應(yīng)分別以陽性對照與陰性對照控制試驗條件，待檢樣品應(yīng)作一式二份，以保證實(shí)驗結(jié)果的準(zhǔn)確性。有時本底較高，說明有非特異性反應(yīng)，可采用羊血清、兔血清或BSA等封閉。 
     2. 在ELISA中，進(jìn)行各項實(shí)驗條件的選擇是很重要的，其中包括: 
     （1） 固相載體的選擇：許多物質(zhì)可作為固相載體，如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等。其形式可以是凹孔平板、試管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何種載體，在使用前均可進(jìn)行篩選：用等量抗原包被，在同一實(shí)驗條件下進(jìn)行反應(yīng)，觀察其顯色反應(yīng)是否均一性，據(jù)此判明其吸附性能是否良好。 
     （2） 包被抗體（或抗原）的選擇：將抗體（或抗原）吸附在固相載體表面時，要求純度要好,吸附時一般要求PH在9.0～9.6之間。吸附溫度，時間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4℃18～24小時。蛋白質(zhì)包被的zui適濃度需進(jìn)行滴定：即用不同的蛋白質(zhì)濃度（0.1、1.0和10μg／ml等）進(jìn)行包被后，在其它試驗條件相同時，觀察陽性標(biāo)本的OD值。選擇OD值zui大而蛋白量zui少的濃度。對于多數(shù)蛋白質(zhì)來說通常為1～10μg／ml。 
     （3） 酶標(biāo)記抗體工作濃度的選擇：首先用直接ELISA法進(jìn)行初步效價的滴定（見酶標(biāo)記抗體部份）。然后再固定其它條件或采取“方陣法”（包被物、待檢樣品的參考品及酶標(biāo)記抗體分別為不同的稀釋度）在正式實(shí)驗系統(tǒng)里準(zhǔn)確地滴定其工作濃度。 
     （4） 酶的底物及供氫體的選擇：對供氫體的選擇要**價廉、**、有明顯地顯色反應(yīng)，而本身無色。有些供氫體（如OPD等）有潛在的致癌作用，應(yīng)注意防護(hù)。有條件者應(yīng)使用不致癌、靈敏度高的供氫體，如TMB和ABTS是目前較為滿意的供氫體。底物作用一段時間后，應(yīng)加入強(qiáng)酸或強(qiáng)堿以終止反應(yīng)。通常底物作用時間，以10-30分鐘為宜。底物使用液必須新鮮配制，尤其是H2O2在臨用前加入 。

正十三烷基-beta-D-麥牙糖苷(>98%,BC)n-Tridecyl-b-D-maltopyranoside (e)質(zhì)量規(guī)格：>98%,BC  病毒HRP標(biāo)記制備試劑盒5(100微克/)  HumanapoproteinB100,apo-B100ELISAKit 人載脂蛋白B100(apo-B100)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

辛二酸(>98%,BR)Octanedioic acid質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR  Ratfibroblastgrowthfactor-10,FGF-10ELISA試劑盒大鼠成纖維細(xì)胞生長因子10(FGF-10)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  Humanmannanbindinglectinassociatedserineprotease,MASPELISA試劑盒人甘露聚糖結(jié)合凝集素相關(guān)絲氨酸蛋白酶(MASP)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

橄欖油Olive oil質(zhì)量規(guī)格：商品級  小鼠組織蛋白酶S(CTSS)ELISA試劑盒 ，英文名： CTSS ELISA Kit  組織氧化應(yīng)激活性氧(ROS)比色法測定試劑盒(單線態(tài)氧氣)20

鄰甲氧基肉桂醛(>98%,BR)o-Methoxycinnamaldehyde質(zhì)量規(guī)格：>98%，BR  綿羊白介素1(IL-1)ELISA檢測試劑盒SheepIerleukin1,IL-1ELISAKit 96T/48T  HumanHelicobacterpyloriIgM，Hp-IgMELISAKit人幽門螺旋桿菌IgM(Hp-IgM)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
頭孢唑啉Cefazolin質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口  HumanarylsulfataseA,ASAELISAKit 人芳基硫酸酯酶A(ASA)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝  人前心肽(Pro-ANP)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

17β-羧酸氟替卡松Fluticasone 17β-Carboxylic Acid質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口  AMPKELISA試劑盒魚1酸化腺苷酸活化蛋白激酶規(guī)格：96T/48T  小鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子受體-3(VEGFR-3/Flt-4)試劑盒 Mouse Vascular endothelial cell growth factor receptor 3,VEGFR-3/Flt-4 ELISA kit

酸棗仁皂苷B(標(biāo)準(zhǔn)品)Jujuboside B質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品  游離脂肪酸化學(xué)比色法定量檢測試劑盒50  麻風(fēng)桿菌(ML)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法) 48T

穗花杉雙黃酮（標(biāo)準(zhǔn)品）Amentoflavone質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品  Mouseiercellularadhesionmolecule1,ICAM-1ELISAKit小鼠細(xì)胞間粘附分子1(ICAM-1/CD54)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  Humaecombinationactivatinggene2,RAG-2ELISA試劑盒人重組激活基因2(RAG-2)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
NUCB1人核連蛋白1免費(fèi)代測試劑盒麥芽1酸化酶, 硫酸銨懸浮液質(zhì)量規(guī)格：BC GradeMaltose Phosphorylase 5U/mg  ELISAKitECF人鼠嗜酸粒細(xì)胞趨化因子規(guī)格：48T/96T  人抗硬皮病抗體70(SCL70/topoⅠ)ELISA試劑盒 ，英文名： SCL70/topoⅠ ELISA Kit

嗪草酮(>95%,植物級)質(zhì)量規(guī)格：>95%,植物級Metribuzin  小鼠成纖維細(xì)胞生長因子10(FGF10)ELISA試劑盒 ，英文名： FGF10 ELISA Kit  RatFibronectin,FNELISA試劑盒大鼠纖連蛋白(FN)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

4-甲基傘形酮酰-alpha-D-吡喃糖苷質(zhì)量規(guī)格：分子生物學(xué)級MU-alpha-GAL  大鼠白三烯E4(LTE4)ELISA檢測試劑盒RatleukoieneE4,LT-E4ELISAKit 96T/48T  HumanEndothelialniicoxidesyhase,eNOSELISA試劑盒人內(nèi)皮型合成酶(eNOS)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

粘酸(>98%，BC)質(zhì)量規(guī)格：>98%，BCMucic acid  人β淀粉樣多肽42(Aβ 42)試劑盒 Human Amyloid beta 42,Aβ 42 ELISA kit  HumanHepatitisCvirusIgM，HCV-IgMELISAKit人型肝炎IgM(HCV-IgM)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T