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試劑和樣本的控制方法:
一、試劑
1.試劑的選擇:國家明確要求要采用批批檢定的形式對ELISA試劑嚴(yán)格把關(guān),我司嚴(yán)格按照國家標(biāo)準(zhǔn)進行生產(chǎn),已獲得國家承認(rèn)的“三證”,每一個產(chǎn)品都有對應(yīng)的生產(chǎn)批號,只要客戶提前下單,我們就能為您提供新批次的產(chǎn)品,不必?fù)?dān)心會有過期的試劑。我司的試劑,值得您選擇。
2.試劑的準(zhǔn)備:先將試劑盒先從冰箱中拿出來,在室溫下放置20-30
min后,再進行測定,使試劑盒在使用前與室溫平衡,這樣做的目的能使反應(yīng)微孔內(nèi)的溫度較快地達(dá)到所需的溫度,以滿足后面的測定需求。
二、樣本
1.內(nèi)源性干擾因素:包括類風(fēng)濕因子、補體、高濃度的非特異球蛋白、異嗜性抗體、某些自身抗體等;
類風(fēng)濕因子的控制方法:
①用F(ab)2替代完整的IgG;
②標(biāo)本用聯(lián)有熱變性IgG的固相吸附劑處理;
③檢測抗原時,可用2-巰基乙醇加入到標(biāo)本稀釋液中使RF降解。
下列是公司產(chǎn)品ELISA試劑盒的詳細(xì)說明書:
中文名稱:MANSC1人含MANSC域蛋白1ELISA試劑盒說明書
英文簡稱:Human MANSC Domain Containing Protein 1(MANSC1)ELISA Kit
產(chǎn)品貨號:PH101800
規(guī)格:96T/48T
適用范圍:僅供科研使用
保存及有效期:2-8℃保存,6個月,-20℃一年
使用方法:
測定法的靈敏度來自作為報告的酶。眾所周知,酶是一種有機催化劑,很少量的酶即可誘導(dǎo)大量的催化反應(yīng),產(chǎn)生可供觀察的顯色反應(yīng)現(xiàn)象。因此該體系常被稱為酶放大體系。
1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋:本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。 24μg/ml 5號標(biāo)準(zhǔn)品 150μl的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
12μg/ml 4號標(biāo)準(zhǔn)品
150μl的5號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
6μg/ml 3號標(biāo)準(zhǔn)品 150μl的4號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
3μg/ml 2號標(biāo)準(zhǔn)品 150μl的3號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
1.5μg/ml 1號標(biāo)準(zhǔn)品
150μl的2號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
2. 加樣:分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。|
3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4. 配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外。
7. 溫育:操作同3。
8. 洗滌:操作同5。
9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.
10. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。
11. 測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。
ELISA 試驗時,注意事項如下:
1. 正式試驗時,應(yīng)分別以陽性對照與陰性對照控制試驗條件,待檢樣品應(yīng)作一式二份,以保證實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性。有時本底較高,說明有非特異性反應(yīng),可采用羊血清、兔血清或BSA等封閉。
2. 在ELISA中,進行各項實驗條件的選擇是很重要的,其中包括:
(1) 固相載體的選擇:許多物質(zhì)可作為固相載體,如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等。其形式可以是凹孔平板、試管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何種載體,在使用前均可進行篩選:用等量抗原包被,在同一實驗條件下進行反應(yīng),觀察其顯色反應(yīng)是否均一性,據(jù)此判明其吸附性能是否良好。
(2) 包被抗體(或抗原)的選擇:將抗體(或抗原)吸附在固相載體表面時,要求純度要好,吸附時一般要求PH在9.0~9.6之間。吸附溫度,時間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4℃18~24小時。蛋白質(zhì)包被的zui適濃度需進行滴定:即用不同的蛋白質(zhì)濃度(0.1、1.0和10μg/ml等)進行包被后,在其它試驗條件相同時,觀察陽性標(biāo)本的OD值。選擇OD值zui大而蛋白量zui少的濃度。對于多數(shù)蛋白質(zhì)來說通常為1~10μg/ml。
(3) 酶標(biāo)記抗體工作濃度的選擇:首先用直接ELISA法進行初步效價的滴定(見酶標(biāo)記抗體部份)。然后再固定其它條件或采取“方陣法”(包被物、待檢樣品的參考品及酶標(biāo)記抗體分別為不同的稀釋度)在正式實驗系統(tǒng)里準(zhǔn)確地滴定其工作濃度。
(4) 酶的底物及供氫體的選擇:對供氫體的選擇要**價廉、**、有明顯地顯色反應(yīng),而本身無色。有些供氫體(如OPD等)有潛在的致癌作用,應(yīng)注意防護。有條件者應(yīng)使用不致癌、靈敏度高的供氫體,如TMB和ABTS是目前較為滿意的供氫體。底物作用一段時間后,應(yīng)加入強酸或強堿以終止反應(yīng)。通常底物作用時間,以10-30分鐘為宜。底物使用液必須新鮮配制,尤其是H2O2在臨用前加入 。
澤瀉醇B醋酸酯(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品Alisol B 23-acetate 人血清總補體(CH50)ELISA檢測試劑盒Human50%complemehemolysis,CH50ELISAKit
96T/48T
Humangranulocytespecificainuclearaibody,GS-ANAELISA試劑盒人粒細(xì)胞特異性抗核抗體(GS-ANA)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
獐牙菜苷(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品Sweroside 大鼠解整合素樣金屬蛋白酶8(ADAM8)試劑盒 Rat A Disiegrin And Metalloprotease
8,ADAM8 ELISA Kit
Humanlambdaimmunoglobulinlightchain,λ-IgLCELISAKit人球蛋白輕鏈lambda(λ-IgLC)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
獐牙菜苦苷(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品Swertiamarin 英文名稱RatMGα1ELISAKit大鼠α1微球蛋白(MGα1)規(guī)格:96T/48T 大鼠載脂蛋白C-II(APOC2)ELISA試劑盒 ,英文名: APOC2 ELISA Kit
樟腦(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥96%,標(biāo)準(zhǔn)品Camphor 咖啡環(huán)氨酸(cyclamate)含量薄層色譜法定性檢測試劑盒20 人抗IgE受體抗體ELISA檢測試劑盒Humanai-IgEreceptoraibodyELISAKit 96T/48T
頭孢呋辛Cefuroxime質(zhì)量規(guī)格:美國進口 載玻片細(xì)胞CASPASE-3蛋白表達(dá)熒光顯微鏡檢測試劑盒10/20 羊特定基因序列(Ovine)核酸檢測試劑盒 48T
羌活醇(標(biāo)準(zhǔn)品)Notopterol質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品 MousehepatitisBviruseaigen,HBeAgELISAKit小鼠乙型肝炎e抗原(HBeAg)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T HumanSpecifieMacrophageArmingPaetot,SMAFELISA試劑盒人特異性巨噬細(xì)胞武裝因子(SMAF)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
10-羥基癸酸(標(biāo)準(zhǔn)品)10-Hydroxydecanoic acid質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥96%,標(biāo)準(zhǔn)品 小鼠線粒體轉(zhuǎn)錄因子A(TFAM)ELISA試劑盒 ,英文名: TFAM ELISA Kit ELISAKitPLGF小鼠胎盤生長因子規(guī)格:48T/96T
羥基紅花黃色素A(標(biāo)準(zhǔn)品)Hydroxysafflor yellow A質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品 兔兒茶酚胺(CA)ELISA檢測試劑盒Rabbitcatecholamine,CAELISAKit
96T/48T
HumanB-CellLinkerProtein,BLNKELISAKit人B細(xì)胞連接蛋白(BLNK)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
馬來酸桂哌齊特(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格:含量測定Cinepazide maleate Rat cytochrome P450 (CYP450) ELISA Kit 大鼠細(xì)胞色素P450(CYP450)ELISA試劑盒 HumanIerleukin3,IL-3ELISA試劑盒人白介素3(IL-3)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
磺胺嘧啶鈉質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR
sulfadiazine(SD-Na)
Human8-isoprostaglandin,8-iso-PGELISAKit 人8異前列腺素(8-iso-PG)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝 Humanmyelinbasicprotein,MBPELISAKit人髓1脂堿性蛋白(MBP)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
補骨脂寧;補骨脂異黃酮質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品Corylin HumanComplemefragme3b,C3bELISA試劑盒人補體片斷3b(C3b)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 大鼠糖皮質(zhì)受體β(GR-β)ELISA試劑盒 ,英文名: GR-β ELISA Kit
補骨脂素(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品Psoralen 組織CASEINKINASE1δ激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C)20 人甲基化酶(Methylase)ELISA檢測試劑盒HumanMethylaseELISAKit
96T/48T
MANSC1人含MANSC域蛋白1ELISA試劑盒說明書檢測程序:
1. 加樣:每孔各加入標(biāo)準(zhǔn)品或待測樣品 100ul ,將反應(yīng)板充分混勻后置 37 ℃ 120 分鐘。
2. 洗板:用洗滌液將反應(yīng)板充分洗滌 4-6 次,向濾紙上印干。
3. 每孔中加入抗體工作液10 0ul 。將反應(yīng)板充分混勻后置 37 ℃ 6 0 分鐘。
4. 洗板:同前。
5. 每孔加酶標(biāo)抗體工作液100ul 。將反應(yīng)板置 37 ℃ 3 0 分鐘。
6. 洗板:同前。
7. 每孔加入底物工作液100ul ,置 37 ℃ 暗處反應(yīng)15 分鐘。
8. 每孔加入100ul 終止液混勻。
9. 30分鐘內(nèi)用酶標(biāo)儀在 45 0 nm 處測 吸光值。