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操作流程:
(1)待測樣品孔中每孔加入待測樣品100μl,每種樣品設(shè)3個(gè)平行孔;設(shè)兩個(gè)陰性對照孔,每孔加未處理組的細(xì)胞裂解液100μl;另設(shè)一個(gè)空白對照孔,加入純細(xì)胞裂解液100μl。
(2)酶標(biāo)板置4℃,包被過夜。
(3)洗板:吸干孔內(nèi)反應(yīng)液,用洗滌液過洗一遍(將洗滌液注滿板孔后,即甩去),之后將洗滌液注滿板孔,浸泡1-2分鐘,間歇搖動。甩去孔內(nèi)液體后在吸水紙上拍干。重復(fù)洗滌3-4次。
(4)陰性對照孔每孔加入PBS 50μl,樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人AIF抗體工作液50μl。
(5)酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi),孵育60min。
(6)洗板,同(4)。
(7)每孔加1:5000稀釋的HRP-標(biāo)記的山羊抗兔抗體工作液 100μl。
(8)酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi),孵育60min。
(9)洗板,同(4)。
(10)每孔加TMB顯色液 100μl,輕輕混勻10s,置37℃暗處反應(yīng)15-20min。
(11)每孔加100μl 2mol/L H2SO4終止反應(yīng)。
(12)分別測450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2,終測得的OD值為兩者之差(W1-W2),以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。
(13)數(shù)據(jù)處理:在得出標(biāo)本(S)和陰性對照(N)的 OD值后,計(jì)算S/N值。S/N≥2.1為陽性判定標(biāo)準(zhǔn)。
產(chǎn)品名稱 |
英文名稱 |
貨號 |
PON1人對氧磷酶1免費(fèi)代測試劑盒 |
Human Paraoxonase 1(PON1)ELISA Kit |
PH102315 |
優(yōu)勢特點(diǎn):產(chǎn)品僅用于科研
1.高效、靈敏、特異的抗體;
2.穩(wěn)定的重復(fù)性和可靠性;
3.吸附性能好,空白值低,孔低透明度高的固相載體;
4.使用血清、血漿、組織勻漿液、細(xì)胞培養(yǎng)液、尿液、唾液等等多種標(biāo)本類型;
5.節(jié)省實(shí)驗(yàn)經(jīng)費(fèi)。
組成及試劑配制 :
1. 酶聯(lián)板:一塊(96孔)
2. 標(biāo)準(zhǔn)品(凍干品):2瓶,每瓶臨用前以樣品稀釋液稀釋至1ml,蓋好后靜置10分鐘以上,然后反復(fù)顛倒/搓動以助溶解,其濃度為100 ng/ml,做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋)后,分別稀釋成100 ng/ml,50 ng/ml,25 ng/ml,12.5 ng/ml,6.25 ng/ml,3.12 ng/ml,1.56 ng/ml,樣品稀釋液直接作為標(biāo)準(zhǔn)濃度0 ng/ml,臨用前15分鐘內(nèi)配制。
如配制50 ng/ml標(biāo)準(zhǔn)品:取0.5ml (不要少于0.5ml ) 100 ng/ml的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.5ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
3. 樣品稀釋液:1×20ml/瓶。
4. 檢測稀釋液A:1×10ml/瓶。
5. 檢測稀釋液B:1×10ml/瓶。
6. 檢測溶液A:1×120ul/瓶(1:100)臨用前以檢測稀釋液A 1:100稀釋,稀釋前根據(jù)預(yù)先計(jì)算好的每次實(shí)驗(yàn)所需的總量配制(100ul/孔),實(shí)際配制時(shí)應(yīng)多配制0.1-0.2ml。如10ul檢測溶液A加990ul檢測稀釋液A的比例配制,輕輕混勻,在使用前一小時(shí)內(nèi)配制。
7. 檢測溶液B:1×120ul/瓶(1:100)臨用前以檢測稀釋液B 1:100稀釋。稀釋方法同檢測溶液A。
8. 底物溶液:1×10ml/瓶。
9. 濃洗滌液:1×30ml/瓶,使用時(shí)每瓶用蒸餾水稀釋25倍。
10. 終止液:1×10ml/瓶(2N H2SO4)。
樣本實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備:
ELISA試劑盒液體樣本:包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清等。
(1)血清
室溫血液自然凝固10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
(2)血漿:
應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
(3)尿液:
用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實(shí)行。
(4)細(xì)胞培養(yǎng)上清:
檢測分泌性的成份時(shí),用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。
(5)培養(yǎng)細(xì)胞
檢測細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí),用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細(xì)胞懸液,細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融或加入組織蛋白萃取試劑,以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
(6)組織標(biāo)本
切割標(biāo)本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿化。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。
鹽酸吡哆胺(>98%,BC )質(zhì)量規(guī)格:>98%,BC Pyridoxamine,
di rabbitFibrinogenDegradationProduct,FDPELISA試劑盒兔子血纖蛋白原降解產(chǎn)物(FDP)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 人抗血小板抗體IgG/M/A(PA-IgG/M/A)ELISA試劑盒 ,英文名: PA-IgG/M/A ELISA Kit
水楊酸鈉(>99%,USP)質(zhì)量規(guī)格:>99%,USP salicylate 小鼠超敏C反應(yīng)蛋白(hs-CRP)ELISA試劑盒 ,英文名: hs-CRP ELISA Kit RatFractalkine/CX3CL1ELISA試劑盒大鼠趨化因子(fractalkine/CX3CL1)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
3-(環(huán)己氨基 )-1-丙磺酸鈉(分子生物學(xué)級)質(zhì)量規(guī)格:>99%,分子生物學(xué)級CAPS, salt 大鼠可溶性Toll樣受體2(sTLR2)ELISA檢測試劑盒RatsolubleToll-likereceptor2,sTLR-2ELISAKit 96T/48T Humaneosinophilcationicprotein,ECPELISA試劑盒人嗜酸性粒細(xì)胞陽離子蛋白(ECP)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
稻瘟靈(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品,97.5% Isoprothiolane 人β淀粉樣蛋白1-42(Aβ1-42)試劑盒 Human amyloid beta peptide 1-42,Aβ1-42 ELISA Kit 96T Humanhepatocytegrowthfactor,HGFELISAKit人肝細(xì)胞生長因子(HGF)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
炔雌醇17-β-D-葡萄糖苷酸質(zhì)量規(guī)格:美國進(jìn)口Ethynyl Estradiol 17-β-D-Glucuronide Humaetinoicacidinduciblegene/RIG-likereceptor,RLR-9ELISAKit人視黃酸誘導(dǎo)基因/RIG-1樣受體(RLR)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 谷胱甘肽過氧化物酶(GPX)測試盒 GR法 50管/48樣
炔雌醇3-醋酸鹽質(zhì)量規(guī)格:美國進(jìn)口Ethynyl Estradiol 3-Acetate 小鼠P選擇素(P-Selectin/CD62P)ELISA試劑盒 ,英文名: P-Selectin/CD62P ELISA Kit Ratneuophilactivatingprotein-2,NAP-2ELISA試劑盒大鼠中性粒細(xì)胞趨化蛋白2(NAP-2/CXCL7)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
β-雌二醇 3-(β-D-葡萄糖苷酸)鈉鹽質(zhì)量規(guī)格:美國進(jìn)口β-Estradiol 3-(β-D-glucuronide) salt 大鼠巨噬細(xì)胞炎癥蛋白5(MIP-5)ELISA檢測試劑盒Ratmacrophageinflammatoryprotein5,MIP-5ELISAKit 96T/48T HumanhighsensitivityC-ReactiveProtein,hs-CRPELISA試劑盒人超敏C反應(yīng)蛋白(hs-CRP)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
2-羥基炔雌醇質(zhì)量規(guī)格:美國進(jìn)口2-Hydroxy Ethynyl
Estradiol 人FOS 樣抗原2(FOSL2)試劑盒 Human FOSL2 ELISA Kit
Humanmacrophageinflammatoryprotein2,MIP-2ELISAKit人巨噬細(xì)胞炎性蛋白2(MIP-2)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
聚乙二醇10000PEG 10000質(zhì)量規(guī)格:分子量9,000~11,000 Humanangiotensinogen,aGTELISA試劑盒人血管緊張素原(aGT)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 人促卵泡素(FSH)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
DL-蘋果酸DL-Malic acid質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR 植物根瘤原生質(zhì)細(xì)胞分離試劑盒5 小鼠17-酮類(17-KS)試劑盒 Mouse 17-ketosteroids,17-KS ELISA Kit
D-酪氨酸D-Tyrosine質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR Humanβ-Lactamaseinhibitors,BLIELISAKit人β內(nèi)酰胺酶抑制劑(BLI)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 糖原1酸化酶同工酶II(GP-II)ELISA試劑盒 ,英文名: GP-II ELISA Kit
D-組氨酸D-Histidine質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR 小鼠抗核抗體(ANA)ELISA試劑盒 ,英文名: ANA ELISA Kit
Mousesmallnuclearribonucleoprotein,sNP/SmELISA試劑盒小鼠抗小核糖核蛋白/Sm抗體(sNP/Sm)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
注意事項(xiàng):
1. 試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30 分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
2. 濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,洗滌時(shí)不影響結(jié)果。
3. 各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性,以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間控制在5 分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。
4. 請每次測定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線,做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD 值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔孔的OD 值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n 倍)后再測定,計(jì)算時(shí)請后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。
5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
6. 底物請避光保存。
7. 嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行,試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).
8. 所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
9. 本試劑不同批號組分不得混用。
PON1人對氧磷酶1免費(fèi)代測試劑盒服務(wù):
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