檢測程序：
1.  加樣：每孔各加入標準品或待測樣品 100ul ，將反應板充分混勻后置 37 ℃ 120 分鐘。
2.  洗板：用洗滌液將反應板充分洗滌 4-6 次，向濾紙上印干。
3.  每孔中加入抗體工作液10 0ul 。將反應板充分混勻后置 37 ℃ 6 0 分鐘。
4.  洗板：同前。
5.  每孔加酶標抗體工作液100ul 。將反應板置 37 ℃ 3 0 分鐘。
6.  洗板：同前。
7.  每孔加入底物工作液100ul ，置 37   ℃ 暗處反應15 分鐘。
8.  每孔加入100ul 終止液混勻。
9.  30分鐘內(nèi)用酶標儀在 45 0 nm 處測 吸光值。

下列是公司產(chǎn)品ELISA試劑盒的詳細說明書：
中文名稱：CYTSA人Cytospin人A蛋白免費代測試劑盒
英文簡稱：Human Cytospin A(CYTSA)ELISA Kit
產(chǎn)品貨號：PH103383
規(guī)格：96T/48T
適用范圍：僅供科研使用
保存及有效期：2-8℃保存，6個月，-20℃一年

試劑和樣本的控制方法：
一、試劑
1.試劑的選擇：國家明確要求要采用批批檢定的形式對ELISA試劑嚴格把關(guān)，我司嚴格按照國家標準進行生產(chǎn)，已獲得國家承認的“三證”，每一個產(chǎn)品都有對應的生產(chǎn)批號，只要客戶提前下單，我們就能為您提供新批次的產(chǎn)品，不必擔心會有過期的試劑。我司的試劑，值得您選擇。
2.試劑的準備：先將試劑盒先從冰箱中拿出來，在室溫下放置20-30 min后，再進行測定，使試劑盒在使用前與室溫平衡，這樣做的目的能使反應微孔內(nèi)的溫度較快地達到所需的溫度，以滿足后面的測定需求。
二、樣本
1.內(nèi)源性干擾因素：包括類風濕因子、補體、高濃度的非特異球蛋白、異嗜性抗體、某些自身抗體等；
類風濕因子的控制方法：
①用F(ab)2替代完整的IgG；
②標本用聯(lián)有熱變性IgG的固相吸附劑處理；
③檢測抗原時，可用2-巰基乙醇加入到標本稀釋液中使RF降解。

使用方法：
測定法的靈敏度來自作為報告的酶。眾所周知，酶是一種有機催化劑，很少量的酶即可誘導大量的催化反應，產(chǎn)生可供觀察的顯色反應現(xiàn)象。因此該體系常被稱為酶放大體系。
1. 標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。   24μg/ml    5號標準品    150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液
 12μg/ml    4號標準品    150μl的5號標準品加入150μl標準品稀釋液
 6μg/ml     3號標準品    150μl的4號標準品加入150μl標準品稀釋液
 3μg/ml     2號標準品    150μl的3號標準品加入150μl標準品稀釋液
 1.5μg/ml   1號標準品    150μl的2號標準品加入150μl標準品稀釋液
2. 加樣：分別設空白孔、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。|
3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。   
4. 配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。
7. 溫育：操作同3。
8. 洗滌：操作同5。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.
10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。
11. 測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。
ELISA 試驗時，注意事項如下： 
     1. 正式試驗時，應分別以陽性對照與陰性對照控制試驗條件，待檢樣品應作一式二份，以保證實驗結(jié)果的準確性。有時本底較高，說明有非特異性反應，可采用羊血清、兔血清或BSA等封閉。 
     2. 在ELISA中，進行各項實驗條件的選擇是很重要的，其中包括: 
     （1） 固相載體的選擇：許多物質(zhì)可作為固相載體，如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等。其形式可以是凹孔平板、試管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何種載體，在使用前均可進行篩選：用等量抗原包被，在同一實驗條件下進行反應，觀察其顯色反應是否均一性，據(jù)此判明其吸附性能是否良好。 
     （2） 包被抗體（或抗原）的選擇：將抗體（或抗原）吸附在固相載體表面時，要求純度要好,吸附時一般要求PH在9.0～9.6之間。吸附溫度，時間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4℃18～24小時。蛋白質(zhì)包被的zui適濃度需進行滴定：即用不同的蛋白質(zhì)濃度（0.1、1.0和10μg／ml等）進行包被后，在其它試驗條件相同時，觀察陽性標本的OD值。選擇OD值zui大而蛋白量zui少的濃度。對于多數(shù)蛋白質(zhì)來說通常為1～10μg／ml。 
     （3） 酶標記抗體工作濃度的選擇：首先用直接ELISA法進行初步效價的滴定（見酶標記抗體部份）。然后再固定其它條件或采取“方陣法”（包被物、待檢樣品的參考品及酶標記抗體分別為不同的稀釋度）在正式實驗系統(tǒng)里準確地滴定其工作濃度。 
     （4） 酶的底物及供氫體的選擇：對供氫體的選擇要**價廉、**、有明顯地顯色反應，而本身無色。有些供氫體（如OPD等）有潛在的致癌作用，應注意防護。有條件者應使用不致癌、靈敏度高的供氫體，如TMB和ABTS是目前較為滿意的供氫體。底物作用一段時間后，應加入強酸或強堿以終止反應。通常底物作用時間，以10-30分鐘為宜。底物使用液必須新鮮配制，尤其是H2O2在臨用前加入 。

木蝴蝶苷B（標準品）  Oroxin B  質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標準品 小鼠壞死因子α(TNFα)ELISA試劑盒 ，英文名： TNFα ELISA Kit

磷霉素氨丁三醇  Fosfomycin tromethamine  質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR 小鼠壞死因子α(TNF-α)ELISA試劑盒 ，英文名： TNF-α ELISA Kit

磷霉素氨丁三醇(標準品)  Fosfomycin tromethamine  質(zhì)量規(guī)格：含量測定 小鼠壞死因子β(TNF-β)ELISA檢測試劑盒MouseTumornecrosisfactorβ,TNF-βELISAKIT 96T/48T

木犀草苷(標準品)  Cynaroside  質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標準品 小鼠壞死因子β(TNF-β)ELISA試劑盒 ，英文名： TNF-β ELISA Kit

木香烴內(nèi)酯(標準品)  Costundide  質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標準品 小鼠壞死因子可溶性受體Ⅰ(TNFsR-Ⅰ)ELISA檢測試劑盒MouseTumornecrosisfactorsolublereceptorⅠ,TNFsR-ⅠELISAKIT 96T/48T

擬人參皂苷F11(標準品)  Pseudoginsenoside F11  質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標準品 小鼠壞死因子可溶性受體Ⅰ(TNFsR-Ⅰ)ELISA試劑盒 ，英文名： TNFsR-Ⅰ ELISA Kit

擬人參皂苷RT5(標準品)  Pseudoginsenoside RT5  質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標準品 小鼠壞死因子可溶性受體Ⅱ(TNFsR-Ⅱ)ELISA檢測試劑盒MouseTumornecrosisfactorsolublereceptorⅡ,TNFsR-ⅡELISAKIT 96T/48T

尿囊素（標準品）  Allantoin  質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標準品 小鼠壞死因子可溶性受體Ⅱ(TNFsR-Ⅱ)ELISA試劑盒 ，英文名： TNFsR-Ⅱ ELISA Kit

檸檬苦素；吳茱萸內(nèi)酯(標準品,吳茱萸提取)  Limonin  質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標準品,吳茱萸提取 小鼠壞死因子配體相關(guān)分子1(TL1)ELISA試劑盒 ，英文名： TL1 ELISA Kit

檸檬苦素，黃柏內(nèi)酯(標準品,橙皮提取)   Limonin  質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%,標準品,橙皮提取 小鼠壞死因子受體超家族成員11A(TNFRSF11A/RANK)ELISA試劑盒 ，英文名： TNFRSF11A/RANK ELISA Kit
人結(jié)直腸腺癌細胞;COLO 320DM [COLO320DM] 大鼠腎小管上皮細胞完全培養(yǎng)基 100mL硝呋酚；硝呋奇特Nifuroxazide質(zhì)量規(guī)格：>99%

MLTC-1 小鼠間質(zhì)細胞瘤細胞硝呋酚；硝呋奇特(標準品)Nifuroxazide質(zhì)量規(guī)格：HPLC>99%,標準品

EDA2R Others Human 人 EDA2R / XEDAR / TNFRSF27 人細胞裂解液 (陽性對照) 千金藤素Cepharanthine質(zhì)量規(guī)格：HPLC ≥98%,BR

小鼠垂體瘤細胞;GT1-1千金藤素(標準品)Cepharanthine質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%,標準品

BTC Others Human 人 BTC / Betacellulin 人細胞裂解液 (陽性對照) 醋酸卡泊芬凈Caspofungin Acetate質(zhì)量規(guī)格：>97%,BR
豬可溶性內(nèi)皮生長因子受體2(VEGFR-2/sFLK-1)ELISAKit   ELISA.   96T/48T              Taxilluside A  1661914-46-0  中文名：  分子式：C18H24O10 

豬可溶性細胞間粘附分子1(sICAM-1)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝  Stigmastane-3β,5α,6β-triol  20835-91-0  中文名：豆甾-3β,5α,6β-三醇  分子式：C29H52O3  度：96.5%  關(guān)鍵詞：  甘蔗; 分株紫萁; 豆甾烷; 中藥對照品; 中藥標準品; 植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫

豬可溶性細胞間粘附分子1(sICAM-1)ELISAKit   ELISA.   96T/48T              Sorafenib tosylate  475207-59-1  中文名：索拉非尼  分子式：C28H24ClF3N4O6S 

CYTSA人Cytospin人A蛋白免費代測試劑盒豬可溶性P選擇素(sP-Selectin)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝  Stigmastane-3β,5α,6β-triol  20835-91-0  中文名：豆甾-3β,5α,6β-三醇  分子式：C29H52O3 

豬可溶性P選擇素(sP-Selectin)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  Stigmasterol  中文名：豆甾醇  分子式：C29H48O