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檢測(cè)程序:
1. 加樣:每孔各加入標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品 100ul ,將反應(yīng)板充分混勻后置 37 ℃ 120 分鐘。
2. 洗板:用洗滌液將反應(yīng)板充分洗滌 4-6 次,向?yàn)V紙上印干。
3. 每孔中加入抗體工作液10 0ul 。將反應(yīng)板充分混勻后置 37 ℃ 6 0 分鐘。
4. 洗板:同前。
5. 每孔加酶標(biāo)抗體工作液100ul 。將反應(yīng)板置 37 ℃ 3 0 分鐘。
6. 洗板:同前。
7. 每孔加入底物工作液100ul ,置 37 ℃ 暗處反應(yīng)15 分鐘。
8. 每孔加入100ul 終止液混勻。
9. 30分鐘內(nèi)用酶標(biāo)儀在 45 0 nm 處測(cè) 吸光值。
下列是公司產(chǎn)品ELISA試劑盒的詳細(xì)說(shuō)明書(shū):
中文名稱:BAFF人B-細(xì)胞激活因子特價(jià)elisa試劑盒
英文簡(jiǎn)稱:Human B-Cell Activating Factor(BAFF)ELISA Kit
產(chǎn)品貨號(hào):PH103469
規(guī)格:96T/48T
適用范圍:僅供科研使用
保存及有效期:2-8℃保存,6個(gè)月,-20℃一年
試劑和樣本的控制方法:
一、試劑
1.試劑的選擇:國(guó)家明確要求要采用批批檢定的形式對(duì)ELISA試劑嚴(yán)格把關(guān),我司嚴(yán)格按照國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行生產(chǎn),已獲得國(guó)家承認(rèn)的“三證”,每一個(gè)產(chǎn)品都有對(duì)應(yīng)的生產(chǎn)批號(hào),只要客戶提前下單,我們就能為您提供新批次的產(chǎn)品,不必?fù)?dān)心會(huì)有過(guò)期的試劑。我司的試劑,值得您選擇。
2.試劑的準(zhǔn)備:先將試劑盒先從冰箱中拿出來(lái),在室溫下放置20-30
min后,再進(jìn)行測(cè)定,使試劑盒在使用前與室溫平衡,這樣做的目的能使反應(yīng)微孔內(nèi)的溫度較快地達(dá)到所需的溫度,以滿足后面的測(cè)定需求。
二、樣本
1.內(nèi)源性干擾因素:包括類風(fēng)濕因子、補(bǔ)體、高濃度的非特異球蛋白、異嗜性抗體、某些自身抗體等;
類風(fēng)濕因子的控制方法:
①用F(ab)2替代完整的IgG;
②標(biāo)本用聯(lián)有熱變性IgG的固相吸附劑處理;
③檢測(cè)抗原時(shí),可用2-巰基乙醇加入到標(biāo)本稀釋液中使RF降解。
使用方法:
測(cè)定法的靈敏度來(lái)自作為報(bào)告的酶。眾所周知,酶是一種有機(jī)催化劑,很少量的酶即可誘導(dǎo)大量的催化反應(yīng),產(chǎn)生可供觀察的顯色反應(yīng)現(xiàn)象。因此該體系常被稱為酶放大體系。
1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋:本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。 24μg/ml 5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 150μl的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
12μg/ml 4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品
150μl的5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
6μg/ml 3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 150μl的4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
3μg/ml 2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 150μl的3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
1.5μg/ml 1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品
150μl的2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
2. 加樣:分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl,待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測(cè)樣品10μl。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻。|
3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4. 配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外。
7. 溫育:操作同3。
8. 洗滌:操作同5。
9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.
10. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。
11. 測(cè)定:以空白空調(diào)零,450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度(OD值)。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。
ELISA 試驗(yàn)時(shí),注意事項(xiàng)如下:
1. 正式試驗(yàn)時(shí),應(yīng)分別以陽(yáng)性對(duì)照與陰性對(duì)照控制試驗(yàn)條件,待檢樣品應(yīng)作一式二份,以保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。有時(shí)本底較高,說(shuō)明有非特異性反應(yīng),可采用羊血清、兔血清或BSA等封閉。
2. 在ELISA中,進(jìn)行各項(xiàng)實(shí)驗(yàn)條件的選擇是很重要的,其中包括:
(1) 固相載體的選擇:許多物質(zhì)可作為固相載體,如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等。其形式可以是凹孔平板、試管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何種載體,在使用前均可進(jìn)行篩選:用等量抗原包被,在同一實(shí)驗(yàn)條件下進(jìn)行反應(yīng),觀察其顯色反應(yīng)是否均一性,據(jù)此判明其吸附性能是否良好。
(2) 包被抗體(或抗原)的選擇:將抗體(或抗原)吸附在固相載體表面時(shí),要求純度要好,吸附時(shí)一般要求PH在9.0~9.6之間。吸附溫度,時(shí)間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4℃18~24小時(shí)。蛋白質(zhì)包被的zui適濃度需進(jìn)行滴定:即用不同的蛋白質(zhì)濃度(0.1、1.0和10μg/ml等)進(jìn)行包被后,在其它試驗(yàn)條件相同時(shí),觀察陽(yáng)性標(biāo)本的OD值。選擇OD值z(mì)ui大而蛋白量zui少的濃度。對(duì)于多數(shù)蛋白質(zhì)來(lái)說(shuō)通常為1~10μg/ml。
(3) 酶標(biāo)記抗體工作濃度的選擇:首先用直接ELISA法進(jìn)行初步效價(jià)的滴定(見(jiàn)酶標(biāo)記抗體部份)。然后再固定其它條件或采取“方陣法”(包被物、待檢樣品的參考品及酶標(biāo)記抗體分別為不同的稀釋度)在正式實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)里準(zhǔn)確地滴定其工作濃度。
(4) 酶的底物及供氫體的選擇:對(duì)供氫體的選擇要**價(jià)廉、**、有明顯地顯色反應(yīng),而本身無(wú)色。有些供氫體(如OPD等)有潛在的致癌作用,應(yīng)注意防護(hù)。有條件者應(yīng)使用不致癌、靈敏度高的供氫體,如TMB和ABTS是目前較為滿意的供氫體。底物作用一段時(shí)間后,應(yīng)加入強(qiáng)酸或強(qiáng)堿以終止反應(yīng)。通常底物作用時(shí)間,以10-30分鐘為宜。底物使用液必須新鮮配制,尤其是H2O2在臨用前加入 。
青霉素G鈉鹽 Penicillin G,
salt 質(zhì)量規(guī)格:>1500U/mg,USP,BR 大鼠纖溶抑制因子/凝血酶激活的纖溶抑制物(TAFI)試劑盒 Rat Thrombin activatable
fibrinolysis inhibitor,TAFI ELISA Kit
青霉素G鈉(標(biāo)準(zhǔn)品) Penicillin G,
salt 質(zhì)量規(guī)格:效價(jià)測(cè)定 大鼠纖維蛋白原(Fb)試劑盒 Rat Fibrinogen,Fb Elisa Kit
米格列奈鈣 Mitiglinide calcium Hydrate 質(zhì)量規(guī)格:>99%,BR 大鼠纖維蛋白原α鏈(Fga)試劑盒 Rat fibrinogen alpha
chain,Fga ELISA kit
米格列奈鈣(標(biāo)準(zhǔn)品) Mitiglinide calcium Hydrate 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品 大鼠纖維蛋白原β鏈(Fgb/Ab1-181/Ab1-216/Ac1-581)試劑盒 Rat fibrinogen beta chain
ELISA Kit
丙基硫氧嘧啶 /6-正丙基-2-硫代尿嘧啶 Propylthiouracil 質(zhì)量規(guī)格:>99%,BR 大鼠纖維蛋白原γ鏈(Fgg)試劑盒 Rat fibrinogen gamma
chain,Fgg ELISA kit
氟米龍醋酸酯 Fluorometholone Acetate 質(zhì)量規(guī)格:>97% 大鼠酰基化饑餓素(AG)試劑盒 Rat Acylated Ghrelin,AG
ELISA Kit
十二苯醚 Pentabromophenyl ether 質(zhì)量規(guī)格:>98% 大鼠腺病(ADV)抗體(IgG)試劑盒 Rat adenovirus(ADV)aibody
IgG ELISA kit
氨基雜環(huán)鹽酸鹽 3-Amino-3-azabicyclo[
春雷霉素;春日霉素; 克死霉 Kasugamycin
質(zhì)量規(guī)格:>60%,BR 大鼠腺苷三0酸結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)體A1(ABCA1)試劑盒 Rat ATP-binding Cassette
anspoer A1,ABCA1 ELISA Kit
土拉霉素A,托拉菌素A,泰拉霉素 Tulathromycin A 質(zhì)量規(guī)格:>95% 大鼠腺苷受體A1(ADORA1)試劑盒 Rat Adenosine receptor
A1,ADORA1 ELISA kit
SF-295(人XG惡性膠質(zhì)瘤細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 胎盤(pán)羊膜細(xì)胞Many types of cells包裝:5 × 105方(1ml)特比萘芬Terbinafine 質(zhì)量規(guī)格:>98.5%
小鼠皮質(zhì)神經(jīng)元MN-c特比萘芬(標(biāo)準(zhǔn)品)Terbinafine 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品
KEAP1
Others Human 人 KEAP1 / INRF2 桿狀病-昆蟲(chóng)細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 鹽酸特比萘芬Terbinafine HCl質(zhì)量規(guī)格:>99%,EP6
蚊子幼蟲(chóng)體細(xì)胞;Aedes albopictus clone
C6/36鹽酸特比萘芬(標(biāo)準(zhǔn)品)Terbinafine HCl質(zhì)量規(guī)格:HPLC>99%,標(biāo)準(zhǔn)品
B95-8細(xì)胞,EBV 轉(zhuǎn)化的絨猴白細(xì)胞 人大腸癌細(xì)胞,CL187/CCL187細(xì)胞 CM-H125人腦成纖維細(xì)胞完全培養(yǎng)基100mL醋酸特立帕肽/重組人甲狀旁腺(1-34)Teriparatide
acetate/Human PTH(1-34)質(zhì)量規(guī)格:>95%
組織NAD依賴性甘油-3-0酸脫氫酶(NAD-Glyceraldehyde-3-PhosphateDehydrogenase;NAD-GAPDH)活性光譜法定量檢測(cè)試劑盒20次 1,6-Dioxaspiro[4.5]decan-2-methanol 83015-88-7
中文名: 分子式:C9H16O3 度:98.0% 關(guān)鍵詞: 植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫(kù)
組織NADP依賴性甘油-3-0酸脫氫酶(NADP-Glyceraldehyde-3-PhosphateDehydrogenase;NADP-GAPDH)活性光譜法定量檢測(cè)試劑盒20次 1,8-Bis(dimethylamino)naphtalene 中文名:1,8-雙二甲氨基萘
分子式:C14H18N2 度:98.0%
組織NADPH氧化酶活性化學(xué)發(fā)光法定量檢測(cè)試劑盒20次(10樣本) 11-Hydroxyjasmonic acid 140447-14-9
中文名: 分子式:C12H18O4 度:95.0% 關(guān)鍵詞: 植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫(kù)
組織NADPH氧化酶活性比色法定量檢測(cè)試劑盒20/50次(10樣本) 11α-Hydroxyandrost-4-ene-3,17-dione 中文名:11α-羥基-雄甾-4-烯-3,17-二酮 分子式:C19H26O3 度:98.0%
BAFF人B-細(xì)胞激活因子特價(jià)elisa試劑盒組織NADPH細(xì)胞色素C還原酶(NADPHCytochromeCReductase)活性高質(zhì)敏感比色法定量檢測(cè)試劑盒20次 11β,17α-Dihydroxy-6α-methylpregna-1,4-diene-3,20-dione 6870-94-6 中文名: 分子式:C22H30O4 度:98.0% 關(guān)鍵詞: