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操作流程:
(1)待測(cè)樣品孔中每孔加入待測(cè)樣品100μl,每種樣品設(shè)3個(gè)平行孔;設(shè)兩個(gè)陰性對(duì)照孔,每孔加未處理組的細(xì)胞裂解液100μl;另設(shè)一個(gè)空白對(duì)照孔,加入純細(xì)胞裂解液100μl。
(2)酶標(biāo)板置4℃,包被過(guò)夜。
(3)洗板:吸干孔內(nèi)反應(yīng)液,用洗滌液過(guò)洗一遍(將洗滌液注滿板孔后,即甩去),之后將洗滌液注滿板孔,浸泡1-2分鐘,間歇搖動(dòng)。甩去孔內(nèi)液體后在吸水紙上拍干。重復(fù)洗滌3-4次。
(4)陰性對(duì)照孔每孔加入PBS 50μl,樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人AIF抗體工作液50μl。
(5)酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi),孵育60min。
(6)洗板,同(4)。
(7)每孔加1:5000稀釋的HRP-標(biāo)記的山羊抗兔抗體工作液 100μl。
(8)酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi),孵育60min。
(9)洗板,同(4)。
(10)每孔加TMB顯色液 100μl,輕輕混勻10s,置37℃暗處反應(yīng)15-20min。
(11)每孔加100μl 2mol/L H2SO4終止反應(yīng)。
(12)分別測(cè)450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2,終測(cè)得的OD值為兩者之差(W1-W2),以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。
(13)數(shù)據(jù)處理:在得出標(biāo)本(S)和陰性對(duì)照(N)的 OD值后,計(jì)算S/N值。S/N≥2.1為陽(yáng)性判定標(biāo)準(zhǔn)。
產(chǎn)品名稱 |
英文名稱 |
貨號(hào) |
BAGE3人B-黑色素瘤抗原3特價(jià)elisa試劑盒 |
Human B-Melanoma Antigen 3(BAGE3)ELISA Kit |
PH103477 |
優(yōu)勢(shì)特點(diǎn):產(chǎn)品僅用于科研
1.高效、靈敏、特異的抗體;
2.穩(wěn)定的重復(fù)性和可靠性;
3.吸附性能好,空白值低,孔低透明度高的固相載體;
4.使用血清、血漿、組織勻漿液、細(xì)胞培養(yǎng)液、尿液、唾液等等多種標(biāo)本類型;
5.節(jié)省實(shí)驗(yàn)經(jīng)費(fèi)。
組成及試劑配制 :
1. 酶聯(lián)板:一塊(96孔)
2. 標(biāo)準(zhǔn)品(凍干品):2瓶,每瓶臨用前以樣品稀釋液稀釋至1ml,蓋好后靜置10分鐘以上,然后反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解,其濃度為100 ng/ml,做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋)后,分別稀釋成100 ng/ml,50 ng/ml,25 ng/ml,12.5 ng/ml,6.25 ng/ml,3.12 ng/ml,1.56 ng/ml,樣品稀釋液直接作為標(biāo)準(zhǔn)濃度0 ng/ml,臨用前15分鐘內(nèi)配制。
如配制50 ng/ml標(biāo)準(zhǔn)品:取0.5ml (不要少于0.5ml ) 100 ng/ml的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.5ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
3. 樣品稀釋液:1×20ml/瓶。
4. 檢測(cè)稀釋液A:1×10ml/瓶。
5. 檢測(cè)稀釋液B:1×10ml/瓶。
6. 檢測(cè)溶液A:1×120ul/瓶(1:100)臨用前以檢測(cè)稀釋液A 1:100稀釋,稀釋前根據(jù)預(yù)先計(jì)算好的每次實(shí)驗(yàn)所需的總量配制(100ul/孔),實(shí)際配制時(shí)應(yīng)多配制0.1-0.2ml。如10ul檢測(cè)溶液A加990ul檢測(cè)稀釋液A的比例配制,輕輕混勻,在使用前一小時(shí)內(nèi)配制。
7. 檢測(cè)溶液B:1×120ul/瓶(1:100)臨用前以檢測(cè)稀釋液B 1:100稀釋。稀釋方法同檢測(cè)溶液A。
8. 底物溶液:1×10ml/瓶。
9. 濃洗滌液:1×30ml/瓶,使用時(shí)每瓶用蒸餾水稀釋25倍。
10. 終止液:1×10ml/瓶(2N H2SO4)。
樣本實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備:
ELISA試劑盒液體樣本:包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清等。
(1)血清
室溫血液自然凝固10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
(2)血漿:
應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
(3)尿液:
用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實(shí)行。
(4)細(xì)胞培養(yǎng)上清:
檢測(cè)分泌性的成份時(shí),用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。
(5)培養(yǎng)細(xì)胞
檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí),用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細(xì)胞懸液,細(xì)胞濃度達(dá)到100萬(wàn)/ml左右。通過(guò)反復(fù)凍融或加入組織蛋白萃取試劑,以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
(6)組織標(biāo)本
切割標(biāo)本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆谩?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿化。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測(cè),其余冷凍備用。
瓊脂糖(Biowest,電泳級(jí));西班牙瓊脂糖 Agarose
質(zhì)量規(guī)格:進(jìn)口原裝Biowest 111860;電泳級(jí) 大鼠整合素αM型((ITG αM/CD11b)試劑盒 Rat Iegrin αM,ITG/CD11b ELISA Kit
聚乙二醇400 PEG 400 質(zhì)量規(guī)格:BR 大鼠整合素樣金屬蛋白酶17(ADAM17)試劑盒 Rat ADAM metallopeptidase domain 17,ADAM17 ELISA kit
消膽胺樹脂;考來(lái)烯胺 Cholestyramine resin 質(zhì)量規(guī)格:Each g exchanges 1.8 g- 2.2 g of glycocholate 大鼠正常T細(xì)胞表達(dá)和分泌因子(RAES/CCL5)試劑盒 Rat RAES ELISA kit
蔗糖 Sucrose 質(zhì)量規(guī)格:分子生物學(xué)級(jí) 大鼠脂蛋白α(Lp-α)ELISA檢測(cè)試劑盒Ratlipoproteinα,Lp-αELISAKit 96T/48T
D-海藻糖二水 D-(+)-Trehalose, dihydrate 質(zhì)量規(guī)格:≥98%,BR 大鼠脂蛋白α(Lp-α)試劑盒 Rat lipoprotein α,Lp-α ELISA Kit
氯化鈉 chloride 質(zhì)量規(guī)格:>99%,AR 大鼠脂蛋白脂酶(LPL)ELISA檢測(cè)試劑盒Ratlipoproteinlipase,LPLELISAKit 96T/48T
鹽酸胍 Guanidine 質(zhì)量規(guī)格:>99%,分子生物學(xué)級(jí) 大鼠脂蛋白脂酶(LPL)試劑盒 Rat lipoprotein lipase,LPL ELISA Kit
側(cè)金盞花醇,阿東糖醇,核糖醇 Adonitol 質(zhì)量規(guī)格:>97.0%(GC) ,進(jìn)口 大鼠脂蛋脂酶A2(Lp-PL-A2)ELISA檢測(cè)試劑盒Ratlipoprotein-associatedphospholipaseA2,Lp-PL-A2ELISAKit 96T/48T
酵母浸粉;酵母粉 Yeast extract 質(zhì)量規(guī)格:FMB Grade 大鼠脂蛋脂酶A2(Lp-PLA2)試劑盒 Rat lipoprotein-associated phospholipase A2,Lp-PLA2 ELISA Kit
核糖核酸酶 A 溶液 RNase A Solution 質(zhì)量規(guī)格:分子生物學(xué)級(jí),>60 U/mg,10 mg/ml 大鼠脂多糖/內(nèi)(LPS)試劑盒 Rat
Lipopolysaccharides,LPS ELISA Kit
TE-10細(xì)胞,人食管癌細(xì)胞 人腦膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞,TG-905細(xì)胞 家貓皮膚細(xì)胞;FCA-S1試亞鐵靈Ferroin indicator solution質(zhì)量規(guī)格:AR
Calu-1(人肺癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2鈣紅,乙二醛縮雙(鄰氨基酚)Glyoxal-bis(2-hydroxyanil)質(zhì)量規(guī)格:AR;98%
PTPRC Others Human 人 CD45 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 羥基萘酚藍(lán)Hydroxynaphthol blue質(zhì)量規(guī)格:金屬滴定指示劑
小鼠前胃癌細(xì)胞;MFC硼試劑1-Hydroxy-4-p-toluidinoanthraquinone質(zhì)量規(guī)格:AR
人海馬星形膠質(zhì)細(xì)胞(HA-h)(1×106)石蕊L(fēng)itmus質(zhì)量規(guī)格:AR
組織PKA激酶活性定量檢測(cè)試劑盒(A/B/C)20次 (S)-4-Methoxydalbergione 2543-95-5
中文名:(S)-4-甲氧基黃檀醌 分子式:C16H14O3 度:98.0% 關(guān)鍵詞:
組織PIM2激酶活性定量檢測(cè)試劑盒(A/B/C)20次 (S,E)-Deca-2,9-diene-4,6-diyne-1,8-diol 中文名: 分子式:C10H10O2 度:%
組織PIM1激酶活性定量檢測(cè)試劑盒(A/B/C)20次 (Z)-Butylidenephthalide 72917-31-8 中文名: 分子式:C12H12O2 度:% 關(guān)鍵詞:
組織PI3K激酶活性定量檢測(cè)試劑盒(A/B/C)20次 (Z)-Lachnophyllum lactone 中文名: 分子式:C10H10O2 度:%
組織PHKG2激酶活性定量檢測(cè)試劑盒(A/B/C)20次
1-(2-Chloroacetyl)pyrrolidine-2-carbonitrile 207557-30-5
中文名: 分子式:C7H9ClN2O 度:98.0% 關(guān)鍵詞:
注意事項(xiàng):
1. 試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30 分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
2. 濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出,稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,洗滌時(shí)不影響結(jié)果。
3. 各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性,以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間控制在5 分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。
4. 請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線,做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過(guò)高(樣本OD 值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔孔的OD 值),請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n 倍)后再測(cè)定,計(jì)算時(shí)請(qǐng)后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。
5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
6. 底物請(qǐng)避光保存。
7. 嚴(yán)格按照說(shuō)明書的操作進(jìn)行,試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).
8. 所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
9. 本試劑不同批號(hào)組分不得混用。
BAGE3人B-黑色素瘤抗原3特價(jià)elisa試劑盒服務(wù):
我們可以根據(jù)您的應(yīng)用需要,比如在檢測(cè)范圍、種屬以及靈敏度等方面有特殊要求,而量身定制檢測(cè)試劑盒,有效控制檢測(cè)試劑成本。并可提供免費(fèi)代測(cè)。