試劑和樣本的控制方法：
一、試劑
1.試劑的選擇：國(guó)家明確要求要采用批批檢定的形式對(duì)ELISA試劑嚴(yán)格把關(guān)，我司嚴(yán)格按照國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行生產(chǎn)，已獲得國(guó)家承認(rèn)的“三證”，每一個(gè)產(chǎn)品都有對(duì)應(yīng)的生產(chǎn)批號(hào)，只要客戶提前下單，我們就能為您提供新批次的產(chǎn)品，不必?fù)?dān)心會(huì)有過(guò)期的試劑。我司的試劑，值得您選擇。
2.試劑的準(zhǔn)備：先將試劑盒先從冰箱中拿出來(lái)，在室溫下放置20-30 min后，再進(jìn)行測(cè)定，使試劑盒在使用前與室溫平衡，這樣做的目的能使反應(yīng)微孔內(nèi)的溫度較快地達(dá)到所需的溫度，以滿足后面的測(cè)定需求。
二、樣本
1.內(nèi)源性干擾因素：包括類風(fēng)濕因子、補(bǔ)體、高濃度的非特異球蛋白、異嗜性抗體、某些自身抗體等；
類風(fēng)濕因子的控制方法：
①用F(ab)2替代完整的IgG；
②標(biāo)本用聯(lián)有熱變性IgG的固相吸附劑處理；
③檢測(cè)抗原時(shí)，可用2-巰基乙醇加入到標(biāo)本稀釋液中使RF降解。

下列是公司產(chǎn)品ELISA試劑盒的詳細(xì)說(shuō)明書：
中文名稱：COL13人ⅩⅢ型膠原免費(fèi)代測(cè)試劑盒
英文簡(jiǎn)稱：Human Collagen Type XIII(COL13)ELISA Kit
產(chǎn)品貨號(hào)：PH103563
規(guī)格：96T/48T
適用范圍：僅供科研使用
保存及有效期：2-8℃保存，6個(gè)月，-20℃一年

使用方法：
測(cè)定法的靈敏度來(lái)自作為報(bào)告的酶。眾所周知，酶是一種有機(jī)催化劑，很少量的酶即可誘導(dǎo)大量的催化反應(yīng)，產(chǎn)生可供觀察的顯色反應(yīng)現(xiàn)象。因此該體系常被稱為酶放大體系。
1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。   24μg/ml    5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品    150μl的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
 12μg/ml    4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品    150μl的5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
 6μg/ml     3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品    150μl的4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
 3μg/ml     2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品    150μl的3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
 1.5μg/ml   1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品    150μl的2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
2. 加樣：分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl，待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測(cè)樣品10μl。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。|
3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。   
4. 配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。
7. 溫育：操作同3。
8. 洗滌：操作同5。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.
10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。
11. 測(cè)定：以空白空調(diào)零，450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（OD值）。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。
ELISA 試驗(yàn)時(shí)，注意事項(xiàng)如下： 
     1. 正式試驗(yàn)時(shí)，應(yīng)分別以陽(yáng)性對(duì)照與陰性對(duì)照控制試驗(yàn)條件，待檢樣品應(yīng)作一式二份，以保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。有時(shí)本底較高，說(shuō)明有非特異性反應(yīng)，可采用羊血清、兔血清或BSA等封閉。 
     2. 在ELISA中，進(jìn)行各項(xiàng)實(shí)驗(yàn)條件的選擇是很重要的，其中包括: 
     （1） 固相載體的選擇：許多物質(zhì)可作為固相載體，如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等。其形式可以是凹孔平板、試管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何種載體，在使用前均可進(jìn)行篩選：用等量抗原包被，在同一實(shí)驗(yàn)條件下進(jìn)行反應(yīng)，觀察其顯色反應(yīng)是否均一性，據(jù)此判明其吸附性能是否良好。 
     （2） 包被抗體（或抗原）的選擇：將抗體（或抗原）吸附在固相載體表面時(shí)，要求純度要好,吸附時(shí)一般要求PH在9.0～9.6之間。吸附溫度，時(shí)間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4℃18～24小時(shí)。蛋白質(zhì)包被的zui適濃度需進(jìn)行滴定：即用不同的蛋白質(zhì)濃度（0.1、1.0和10μg／ml等）進(jìn)行包被后，在其它試驗(yàn)條件相同時(shí)，觀察陽(yáng)性標(biāo)本的OD值。選擇OD值z(mì)ui大而蛋白量zui少的濃度。對(duì)于多數(shù)蛋白質(zhì)來(lái)說(shuō)通常為1～10μg／ml。 
     （3） 酶標(biāo)記抗體工作濃度的選擇：首先用直接ELISA法進(jìn)行初步效價(jià)的滴定（見(jiàn)酶標(biāo)記抗體部份）。然后再固定其它條件或采取“方陣法”（包被物、待檢樣品的參考品及酶標(biāo)記抗體分別為不同的稀釋度）在正式實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)里準(zhǔn)確地滴定其工作濃度。 
     （4） 酶的底物及供氫體的選擇：對(duì)供氫體的選擇要**價(jià)廉、**、有明顯地顯色反應(yīng)，而本身無(wú)色。有些供氫體（如OPD等）有潛在的致癌作用，應(yīng)注意防護(hù)。有條件者應(yīng)使用不致癌、靈敏度高的供氫體，如TMB和ABTS是目前較為滿意的供氫體。底物作用一段時(shí)間后，應(yīng)加入強(qiáng)酸或強(qiáng)堿以終止反應(yīng)。通常底物作用時(shí)間，以10-30分鐘為宜。底物使用液必須新鮮配制，尤其是H2O2在臨用前加入 。

雙氯芬酸鈉（標(biāo)準(zhǔn)品）  Diclofenac   質(zhì)量規(guī)格：HPLC>97%,標(biāo)準(zhǔn)品 RNA聚烯酰胺凝膠電泳試劑盒10

加巴噴丁  Gabapentin  質(zhì)量規(guī)格：>99.5%,USP30 RNA酶溶液(RNA酶保護(hù)分析)50毫升

加巴噴?。?biāo)準(zhǔn)品）  Gabapentin  質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品 RNA試劑盒100

多潘立酮  Domperidone  質(zhì)量規(guī)格：>99%,EP5.0 RNA探針聚合酶標(biāo)記試劑盒10

多潘立酮（標(biāo)準(zhǔn)品）  Domperidone  質(zhì)量規(guī)格：HPLC>99%,標(biāo)準(zhǔn)品 RNA探針同位素([α32P]CTP)聚合酶標(biāo)記試劑盒20

氯硝柳胺  Niclosamide  質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR RNA樣品儲(chǔ)存液50毫升

氯硝柳胺(標(biāo)準(zhǔn)品)  Niclosamide  質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品 RNA樣品儲(chǔ)存液50毫升

環(huán)丙沙星  Ciprofloxacin  質(zhì)量規(guī)格：>99%,USP32,BR,可用于細(xì)胞培養(yǎng) RNA熒光(RiboGreen)定量檢測(cè)試劑盒20

環(huán)丙沙星（標(biāo)準(zhǔn)品）  Ciprofloxacin  質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品 RNA熒光(RiboGreen)定量檢測(cè)試劑盒20

泛昔洛韋  Famciclovir  質(zhì)量規(guī)格：>98.5%,BR RPE蛋白標(biāo)記試劑盒(不含RPE)3(1毫克/)
ANGPT2 Others Human 人 ANG2 / Angiopoietin-2 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 溴鄰苯三酚紅Bromopyrogallol red質(zhì)量規(guī)格：IND

星形膠質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)基ACM鹽酸副品紅Basic Fuchsin質(zhì)量規(guī)格：BS,用于生物學(xué)染色

CD164 Others Human 人 CD164 / Endolyn 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 燦爛黃Brilliant Yellow質(zhì)量規(guī)格：IND

GPS5 豚鼠皮膚成纖維樣細(xì)胞剛果紅(AR)Congo red質(zhì)量規(guī)格：AR

CM-R123大鼠角膜成纖維細(xì)胞完全培養(yǎng)基100mL鈣羧酸指示劑(AR)Calconcarboxylic acid質(zhì)量規(guī)格：AR
Tokinolide B  112966-16-2  中文名：  分子式：C24H28O4    組織KSHV(KAPOSISARCOMA-ASSOCIATEDHERPESVIRUS)病定性檢測(cè)試劑盒20次

Methyl 4-O-feruloylquinate  195723-10-5  中文名：  分子式：C18H22O9    HumanPlacealalkalinepkosphatase,PLAPELISAKit人胎盤堿性0酸酶(PLAP)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

Trehalose  99-20-7  中文名：海藻糖  分子式：C12H22O11    兔子脫氧酚/脫氧啉(DPD)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

Chlorogenic acid  327-97-9  中文名：綠原酸  分子式：C16H18O9    Human plasminogen activator inhibitor 1 (PAI-1) ELISA Kit 人纖溶酶原激活物抑制因子1(PAI-1)ELISA試劑盒

Ethyl rutinoside  187539-57-7  中文名：蕓香糖乙苷  分子式：C14H26O10    HumansolubleClusterofdiffereiation86,sCD86ELISAKit 人可溶性白細(xì)胞分化抗原86(B7-2/sCD86)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

COL13人ⅩⅢ型膠原免費(fèi)代測(cè)試劑盒檢測(cè)程序：
1.  加樣：每孔各加入標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品 100ul ，將反應(yīng)板充分混勻后置 37 ℃ 120 分鐘。
2.  洗板：用洗滌液將反應(yīng)板充分洗滌 4-6 次，向?yàn)V紙上印干。
3.  每孔中加入抗體工作液10 0ul 。將反應(yīng)板充分混勻后置 37 ℃ 6 0 分鐘。
4.  洗板：同前。
5.  每孔加酶標(biāo)抗體工作液100ul 。將反應(yīng)板置 37 ℃ 3 0 分鐘。
6.  洗板：同前。
7.  每孔加入底物工作液100ul ，置 37   ℃ 暗處反應(yīng)15 分鐘。
8.  每孔加入100ul 終止液混勻。
9.  30分鐘內(nèi)用酶標(biāo)儀在 45 0 nm 處測(cè) 吸光值。