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試劑和樣本的控制方法：
一、試劑
1.試劑的選擇：國(guó)家明確要求要采用批批檢定的形式對(duì)ELISA試劑嚴(yán)格把關(guān)，我司嚴(yán)格按照國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行生產(chǎn)，已獲得國(guó)家承認(rèn)的“三證”，每一個(gè)產(chǎn)品都有對(duì)應(yīng)的生產(chǎn)批號(hào)，只要客戶提前下單，我們就能為您提供新批次的產(chǎn)品，不必?fù)?dān)心會(huì)有過(guò)期的試劑。我司的試劑，值得您選擇。
2.試劑的準(zhǔn)備：先將試劑盒先從冰箱中拿出來(lái)，在室溫下放置20-30
min后，再進(jìn)行測(cè)定，使試劑盒在使用前與室溫平衡，這樣做的目的能使反應(yīng)微孔內(nèi)的溫度較快地達(dá)到所需的溫度，以滿足后面的測(cè)定需求。
二、樣本
1.內(nèi)源性干擾因素：包括類(lèi)風(fēng)濕因子、補(bǔ)體、高濃度的非特異球蛋白、異嗜性抗體、某些自身抗體等；
類(lèi)風(fēng)濕因子的控制方法：
①用F(ab)2替代完整的IgG；
②標(biāo)本用聯(lián)有熱變性IgG的固相吸附劑處理；
③檢測(cè)抗原時(shí)，可用2-巰基乙醇加入到標(biāo)本稀釋液中使RF降解。
下列是公司產(chǎn)品ELISA試劑盒的詳細(xì)說(shuō)明書(shū)：
中文名稱(chēng)：PLA2G4D人ⅣD組磷脂酶A2elisa試劑盒說(shuō)明書(shū)
英文簡(jiǎn)稱(chēng)：Human Phospholipase A2, Group IVD(PLA2G4D)ELISA Kit
產(chǎn)品貨號(hào)：PH103572
規(guī)格：96T/48T
適用范圍：僅供科研使用
保存及有效期：2-8℃保存，6個(gè)月，-20℃一年
使用方法：
測(cè)定法的靈敏度來(lái)自作為報(bào)告的酶。眾所周知，酶是一種有機(jī)催化劑，很少量的酶即可誘導(dǎo)大量的催化反應(yīng)，產(chǎn)生可供觀察的顯色反應(yīng)現(xiàn)象。因此該體系常被稱(chēng)為酶放大體系。
1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋?zhuān)罕驹噭┖刑峁┰稑?biāo)準(zhǔn)品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。 24μg/ml 5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 150μl的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
12μg/ml 4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品
150μl的5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
6μg/ml 3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 150μl的4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
3μg/ml 2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 150μl的3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
1.5μg/ml 1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品
150μl的2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
2. 加樣：分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl，待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測(cè)樣品10μl。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。|
3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4. 配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。
7. 溫育：操作同3。
8. 洗滌：操作同5。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.
10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。
11. 測(cè)定：以空白空調(diào)零，450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（OD值）。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。
ELISA 試驗(yàn)時(shí)，注意事項(xiàng)如下：
1. 正式試驗(yàn)時(shí)，應(yīng)分別以陽(yáng)性對(duì)照與陰性對(duì)照控制試驗(yàn)條件，待檢樣品應(yīng)作一式二份，以保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。有時(shí)本底較高，說(shuō)明有非特異性反應(yīng)，可采用羊血清、兔血清或BSA等封閉。
2. 在ELISA中，進(jìn)行各項(xiàng)實(shí)驗(yàn)條件的選擇是很重要的，其中包括:
（1） 固相載體的選擇：許多物質(zhì)可作為固相載體，如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等。其形式可以是凹孔平板、試管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何種載體，在使用前均可進(jìn)行篩選：用等量抗原包被，在同一實(shí)驗(yàn)條件下進(jìn)行反應(yīng)，觀察其顯色反應(yīng)是否均一性，據(jù)此判明其吸附性能是否良好。
（2） 包被抗體（或抗原）的選擇：將抗體（或抗原）吸附在固相載體表面時(shí)，要求純度要好,吸附時(shí)一般要求PH在9.0～9.6之間。吸附溫度，時(shí)間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4℃18～24小時(shí)。蛋白質(zhì)包被的zui適濃度需進(jìn)行滴定：即用不同的蛋白質(zhì)濃度（0.1、1.0和10μg／ml等）進(jìn)行包被后，在其它試驗(yàn)條件相同時(shí)，觀察陽(yáng)性標(biāo)本的OD值。選擇OD值z(mì)ui大而蛋白量zui少的濃度。對(duì)于多數(shù)蛋白質(zhì)來(lái)說(shuō)通常為1～10μg／ml。
（3） 酶標(biāo)記抗體工作濃度的選擇：首先用直接ELISA法進(jìn)行初步效價(jià)的滴定（見(jiàn)酶標(biāo)記抗體部份）。然后再固定其它條件或采取“方陣法”（包被物、待檢樣品的參考品及酶標(biāo)記抗體分別為不同的稀釋度）在正式實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)里準(zhǔn)確地滴定其工作濃度。
（4） 酶的底物及供氫體的選擇：對(duì)供氫體的選擇要**價(jià)廉、**、有明顯地顯色反應(yīng)，而本身無(wú)色。有些供氫體（如OPD等）有潛在的致癌作用，應(yīng)注意防護(hù)。有條件者應(yīng)使用不致癌、靈敏度高的供氫體，如TMB和ABTS是目前較為滿意的供氫體。底物作用一段時(shí)間后，應(yīng)加入強(qiáng)酸或強(qiáng)堿以終止反應(yīng)。通常底物作用時(shí)間，以10-30分鐘為宜。底物使用液必須新鮮配制，尤其是H2O2在臨用前加入 。
司帕沙星 Sparfloxacin
質(zhì)量規(guī)格：>98.5%,BR,可用于細(xì)胞培養(yǎng) 大鼠甲狀旁腺相關(guān)蛋白(PTHrP)ELISA檢測(cè)試劑盒RatParathyroidHormone-LikeRelatedProtein,PTHrPELISAKit
96T/48T
司帕沙星（標(biāo)準(zhǔn)品） Sparfloxacin
質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品 大鼠甲狀腺過(guò)氧化物酶(TPO)ELISA檢測(cè)試劑盒RatThyroid-Peroxidase,TPOELISAKit
96T/48T
氟喹酮 Afloqualone 質(zhì)量規(guī)格：>98% 大鼠甲狀腺球蛋白(TG)ELISA檢測(cè)試劑盒RatThyroglobulin,TGELISAKit
96T/48T
氟喹酮(標(biāo)準(zhǔn)品) Afloqualone
質(zhì)量規(guī)格：>98%,標(biāo)準(zhǔn)品 大鼠甲狀腺素(T4)ELISA檢測(cè)試劑盒Ratthyroxine,T4ELISAKit
96T/48T
磺胺醋酰鈉 SA-NA Sufacetamide
質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR 大鼠甲狀腺素抗體(TAb)ELISA檢測(cè)試劑盒RatThyroxineaibody,TAbELISAKit
96T/48T
磺胺醋酰鈉 SA-NA（標(biāo)準(zhǔn)品） Sufacetamide
質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品 大鼠堿性0酸酶(ALP)ELISA檢測(cè)試劑盒Ratalkalinephosphatase,ALPELISAKit
96T/48T
舒必利 Sulpiride
質(zhì)量規(guī)格：>98.5%,EP6.0 大鼠降鈣素(CT)ELISA檢測(cè)試劑盒RatCalcitonin,CTELISAKit
96T/48T
他達(dá)那非 Tadalafil
質(zhì)量規(guī)格：>99% 大鼠降鈣素基因相關(guān)肽(CGRP)ELISA檢測(cè)試劑盒Ratcalcitoningenerelatedpeptide,CGRPELISAKit
96T/48T
他達(dá)那非（標(biāo)準(zhǔn)品） Tadalafil
質(zhì)量規(guī)格：HPLC>99%,標(biāo)準(zhǔn)品 大鼠交聯(lián)物(PY)ELISA檢測(cè)試劑盒Ratpyridiniumcrosslink/PyriLinks,PYELISAKit
96T/48T
替拉替尼 17-AAG
質(zhì)量規(guī)格：HSP90 抑制劑,BR,進(jìn)分 大鼠膠原C末端肽(CTX)試劑盒 Rat C-telopeptide of collagen,CTX
ELISA Kit
LNCaP clone FGC人前列腺癌細(xì)胞 LNCaP clone human
prostate cancer cell FGC RPMI-1640(GIBCO)+10%FBS煙酰胺/尼克酰胺/維生素B3Nicotinamide質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR
CTF1
Protein Human 重組人 Cardioophin-1 / CTF1 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)維生素B3(標(biāo)準(zhǔn)品)Nicotinamide質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥99%,標(biāo)準(zhǔn)品
小鼠顆粒神經(jīng)元(MGC)(1×106) 6-10B, 人鼻咽癌細(xì)胞系 Human醋酸環(huán)丙孕酮,醋酸環(huán)丙氯地孕酮Cyproterone acetate質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR
敘利亞倉(cāng)鼠腎細(xì)胞;BHK-21醋酸環(huán)丙孕酮(標(biāo)準(zhǔn)品)Cyproterone acetate質(zhì)量規(guī)格：含量測(cè)定
EPHB6
Others Cynomolgus 食蟹猴 EphB6 / EphB6 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 甲地孕酮Megestrol base質(zhì)量規(guī)格：>98.5%,BR
Atractylodin
55290-63-6 中文名：蒼術(shù)素 分子式：C13H10O
Humanai-ribosomalPproteinaibody,ARPA/Rib-PELISAKit 人抗核糖體P蛋白抗體(ARPA/Rib-P)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
Crenulatin 6
1-Monopalmitin 542-44-9
中文名：1-棕櫚酸單甘油酯 分子式：C19H38O4 組織IRAK1激酶活性定量檢測(cè)試劑盒(A/B/C)20次
Ethyl
β-D-apiofuranoside 1932405-61-2
中文名： 分子式：C7H14O5 Humanplasmin-aiplasmincomplex,PAPELISAKit人纖溶酶抗纖溶酶復(fù)合物(PAP)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
Myricadenin
A 1612239-23-2 中文名：
分子式：C39H40O17 兔子血栓調(diào)節(jié)蛋白(TM)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
PLA2G4D人ⅣD組磷脂酶A2elisa試劑盒說(shuō)明書(shū)檢測(cè)程序：
1. 加樣：每孔各加入標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品 100ul ，將反應(yīng)板充分混勻后置 37 ℃ 120 分鐘。
2. 洗板：用洗滌液將反應(yīng)板充分洗滌 4-6 次，向?yàn)V紙上印干。
3. 每孔中加入抗體工作液10 0ul 。將反應(yīng)板充分混勻后置 37 ℃ 6 0 分鐘。
4. 洗板：同前。
5. 每孔加酶標(biāo)抗體工作液100ul 。將反應(yīng)板置 37 ℃ 3 0 分鐘。
6. 洗板：同前。
7. 每孔加入底物工作液100ul ，置 37 ℃ 暗處反應(yīng)15 分鐘。
8. 每孔加入100ul 終止液混勻。
9. 30分鐘內(nèi)用酶標(biāo)儀在 45 0 nm 處測(cè) 吸光值。