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下列是公司產(chǎn)品ELISA試劑盒的詳細(xì)說明書:
中文名稱:UL15結(jié)合蛋白-3試劑盒
英文簡稱:詳見說明書
產(chǎn)品貨號:BH-0011806
規(guī)格:96T/48T
適用范圍:僅供科研使用
保存及有效期:2-8℃保存,6個月,-20℃一年
試劑和樣本的控制方法:
一、試劑
1.試劑的選擇:國家明確要求要采用批批檢定的形式對ELISA試劑嚴(yán)格把關(guān),我司嚴(yán)格按照國家標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行生產(chǎn),已獲得國家承認(rèn)的“三證”,每一個產(chǎn)品都有對應(yīng)的生產(chǎn)批號,只要客戶提前下單,我們就能為您提供新批次的產(chǎn)品,不必?fù)?dān)心會有過期的試劑。我司的試劑,值得您選擇。
2.試劑的準(zhǔn)備:先將試劑盒先從冰箱中拿出來,在室溫下放置20-30
min后,再進(jìn)行測定,使試劑盒在使用前與室溫平衡,這樣做的目的能使反應(yīng)微孔內(nèi)的溫度較快地達(dá)到所需的溫度,以滿足后面的測定需求。
二、樣本
1.內(nèi)源性干擾因素:包括類風(fēng)濕因子、補(bǔ)體、高濃度的非特異球蛋白、異嗜性抗體、某些自身抗體等;
類風(fēng)濕因子的控制方法:
①用F(ab)2替代完整的IgG;
②標(biāo)本用聯(lián)有熱變性IgG的固相吸附劑處理;
③檢測抗原時,可用2-巰基乙醇加入到標(biāo)本稀釋液中使RF降解。
檢測程序:
1. 加樣:每孔各加入標(biāo)準(zhǔn)品或待測樣品 100ul ,將反應(yīng)板充分混勻后置 37 ℃ 120 分鐘。
2. 洗板:用洗滌液將反應(yīng)板充分洗滌 4-6 次,向濾紙上印干。
3. 每孔中加入抗體工作液10 0ul 。將反應(yīng)板充分混勻后置 37 ℃ 6 0 分鐘。
4. 洗板:同前。
5. 每孔加酶標(biāo)抗體工作液100ul 。將反應(yīng)板置 37 ℃ 3 0 分鐘。
6. 洗板:同前。
7. 每孔加入底物工作液100ul ,置 37 ℃ 暗處反應(yīng)15 分鐘。
8. 每孔加入100ul 終止液混勻。
9. 30分鐘內(nèi)用酶標(biāo)儀在 45 0 nm 處測 吸光值。
使用方法:
測定法的靈敏度來自作為報告的酶。眾所周知,酶是一種有機(jī)催化劑,很少量的酶即可誘導(dǎo)大量的催化反應(yīng),產(chǎn)生可供觀察的顯色反應(yīng)現(xiàn)象。因此該體系常被稱為酶放大體系。
1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋:本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。 24μg/ml 5號標(biāo)準(zhǔn)品 150μl的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
12μg/ml 4號標(biāo)準(zhǔn)品
150μl的5號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
6μg/ml 3號標(biāo)準(zhǔn)品 150μl的4號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
3μg/ml 2號標(biāo)準(zhǔn)品 150μl的3號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
1.5μg/ml 1號標(biāo)準(zhǔn)品
150μl的2號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
2. 加樣:分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。|
3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4. 配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外。
7. 溫育:操作同3。
8. 洗滌:操作同5。
9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.
10. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。
11. 測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。
緊張素Ⅱ一型受體抗原 英文名稱:
Angiotensin 2 Receptor 1 Aigen 規(guī)格: 48T/96T
英文縮寫: AT1R
3-Amino-5-mercapto-1,2,4-triazole
16691-43-3 中文名:3-氨基-5-巰基-1,2,4-三唑 分子式:C2H4N4S
緊張素Ⅱ 英文名稱:
Angiotensin Ⅱ 英文縮寫:
ANGⅡ 規(guī)格:
48T/96T Ophiopogonin D 945619-74-9
中文名:麥冬皂苷D 分子式:C44H70O16
緊張素Ⅰ 英文名稱:
AngiotensinⅠ 英文縮寫:
ANGⅠ 規(guī)格:
48T/96T Ophiopogonin D 945619-74-9
中文名:麥冬皂苷D 分子式:C44H70O16 度:% 關(guān)鍵詞: 抗增殖; 麥冬; 螺甾烷; 甾苷; 中藥對照品; 中藥標(biāo)準(zhǔn)品; 植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫
緊張素Ⅰ 英文名稱:
AngiotensinⅠ 規(guī)格:
48T/96T 英文縮寫: ANGⅠ 3-Amino-4-methylbenzamide 中文名:3-氨基-4-甲基苯甲酰胺 分子式:C8H10N2O
緊張素2受體1型 英文名稱:
Human Angiotensin 2 receptor Type 1
規(guī)格: 48T/96T
英文縮寫: AG2
Ondansetron 9
5α-Androstanedione
中文名:5α-雄甾烷二酮 分子式:C19H28O2 錳過氧化物酶(MnP)測試盒
可見分光光度法 50管/24樣
5α-Androstane-3β,17β-diol 中文名:5α-雄烷二醇 分子式:C19H32O2 雙縮脲法蛋白含量測試盒
可見分光光度法 50管/48樣
5-O-Ethylcleroindicin
D 中文名:
分子式:C10H16O4 雙縮脲法蛋白含量測試盒
可見分光光度法 100管/96樣
5'-O-Dimethoxytrityl-N-benzoyl-desoxycytidine 中文名:5'-O-(4,4'-二甲氧基三苯基)-N(4)-苯甲?;?2'-脫氧胞苷 分子式:C37H35N3O7 胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白5
英文名稱: human Insulin like Growth Factor Binding
Protein 5 規(guī)格: 48T/96T
英文縮寫: IGFBP5
5-Hydroxymethylfurfural 中文名:5-羥甲基糠醛
分子式:C6H6O3 胰島素
英文名稱: Human Insulin 規(guī)格:
48T/96T 英文縮寫: INS
組胺磷酸鹽;二磷酸組織胺;二磷酸組胺;磷酸組織胺;組織胺二磷酸鹽
Histamine
diphospate
其他2-(4-Imidazolyl)ethylamine
diphosphate salt
產(chǎn)品規(guī)格:BR,98%
包裝:5克/25克/100克/500克
CAS號:51-74-1
C5H15N3O8P2?H2O=325.15
級別:BR
含量:≥98.0%
PH:3.75~3.95
溶解度:清澈
組氨酸:未檢出
硫酸鹽:≤0.02%
重金屬:≤10ppm
砷鹽:≤10ppm
灼燒殘渣:≤0.2%
性狀:結(jié)晶或結(jié)晶粉末,無臭,有吸濕性。在空氣中穩(wěn)定,但在日光下易變質(zhì);溶于4份水,水溶液對石蕊顯酸性反應(yīng)。微溶于乙醇。低毒,半數(shù)致死量(小鼠,經(jīng)口)807mG/kG。有刺激性
用途:生化研究
ELISA 試驗時,注意事項如下:
1. 正式試驗時,應(yīng)分別以陽性對照與陰性對照控制試驗條件,待檢樣品應(yīng)作一式二份,以保證實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性。有時本底較高,說明有非特異性反應(yīng),可采用羊血清、兔血清或BSA等封閉。
2. 在ELISA中,進(jìn)行各項實驗條件的選擇是很重要的,其中包括:
(1) 固相載體的選擇:許多物質(zhì)可作為固相載體,如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等。其形式可以是凹孔平板、試管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何種載體,在使用前均可進(jìn)行篩選:用等量抗原包被,在同一實驗條件下進(jìn)行反應(yīng),觀察其顯色反應(yīng)是否均一性,據(jù)此判明其吸附性能是否良好。
(2) 包被抗體(或抗原)的選擇:將抗體(或抗原)吸附在固相載體表面時,要求純度要好,吸附時一般要求PH在9.0~9.6之間。吸附溫度,時間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4℃18~24小時。蛋白質(zhì)包被的zui適濃度需進(jìn)行滴定:即用不同的蛋白質(zhì)濃度(0.1、1.0和10μg/ml等)進(jìn)行包被后,在其它試驗條件相同時,觀察陽性標(biāo)本的OD值。選擇OD值zui大而蛋白量zui少的濃度。對于多數(shù)蛋白質(zhì)來說通常為1~10μg/ml。
UL15結(jié)合蛋白-3試劑盒 (3) 酶標(biāo)記抗體工作濃度的選擇:首先用直接ELISA法進(jìn)行初步效價的滴定(見酶標(biāo)記抗體部份)。然后再固定其它條件或采取“方陣法”(包被物、待檢樣品的參考品及酶標(biāo)記抗體分別為不同的稀釋度)在正式實驗系統(tǒng)里準(zhǔn)確地滴定其工作濃度。
(4) 酶的底物及供氫體的選擇:對供氫體的選擇要**價廉、**、有明顯地顯色反應(yīng),而本身無色。有些供氫體(如OPD等)有潛在的致癌作用,應(yīng)注意防護(hù)。有條件者應(yīng)使用不致癌、靈敏度高的供氫體,如TMB和ABTS是目前較為滿意的供氫體。底物作用一段時間后,應(yīng)加入強(qiáng)酸或強(qiáng)堿以終止反應(yīng)。通常底物作用時間,以10-30分鐘為宜。底物使用液必須新鮮配制,尤其是H2O2在臨用前加入 。