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操作流程:
(1)待測樣品孔中每孔加入待測樣品100μl,每種樣品設(shè)3個平行孔;設(shè)兩個陰性對照孔,每孔加未處理組的細(xì)胞裂解液100μl;另設(shè)一個空白對照孔,加入純細(xì)胞裂解液100μl。
(2)酶標(biāo)板置4℃,包被過夜。
(3)洗板:吸干孔內(nèi)反應(yīng)液,用洗滌液過洗一遍(將洗滌液注滿板孔后,即甩去),之后將洗滌液注滿板孔,浸泡1-2分鐘,間歇搖動。甩去孔內(nèi)液體后在吸水紙上拍干。重復(fù)洗滌3-4次。
(4)陰性對照孔每孔加入PBS 50μl,樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人AIF抗體工作液50μl。
(5)酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi),孵育60min。
(6)洗板,同(4)。
(7)每孔加1:5000稀釋的HRP-標(biāo)記的山羊抗兔抗體工作液 100μl。
(8)酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi),孵育60min。
(9)洗板,同(4)。
(10)每孔加TMB顯色液 100μl,輕輕混勻10s,置37℃暗處反應(yīng)15-20min。
(11)每孔加100μl 2mol/L H2SO4終止反應(yīng)。
(12)分別測450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2,終測得的OD值為兩者之差(W1-W2),以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。
(13)數(shù)據(jù)處理:在得出標(biāo)本(S)和陰性對照(N)的 OD值后,計(jì)算S/N值。S/N≥2.1為陽性判定標(biāo)準(zhǔn)。
產(chǎn)品名稱 |
英文名稱 |
貨號 |
α半乳糖苷酶試劑盒 |
詳見說明書 |
BH-0011822 |
優(yōu)勢特點(diǎn):產(chǎn)品僅用于科研
1.高效、靈敏、特異的抗體;
2.穩(wěn)定的重復(fù)性和可靠性;
3.吸附性能好,空白值低,孔低透明度高的固相載體;
4.使用血清、血漿、組織勻漿液、細(xì)胞培養(yǎng)液、尿液、唾液等等多種標(biāo)本類型;
5.節(jié)省實(shí)驗(yàn)經(jīng)費(fèi)。
組成及試劑配制 :
1. 酶聯(lián)板:一塊(96孔)
2. 標(biāo)準(zhǔn)品(凍干品):2瓶,每瓶臨用前以樣品稀釋液稀釋至1ml,蓋好后靜置10分鐘以上,然后反復(fù)顛倒/搓動以助溶解,其濃度為100 ng/ml,做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋)后,分別稀釋成100 ng/ml,50 ng/ml,25 ng/ml,12.5 ng/ml,6.25 ng/ml,3.12 ng/ml,1.56 ng/ml,樣品稀釋液直接作為標(biāo)準(zhǔn)濃度0 ng/ml,臨用前15分鐘內(nèi)配制。
如配制50 ng/ml標(biāo)準(zhǔn)品:取0.5ml (不要少于0.5ml ) 100 ng/ml的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.5ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
3. 樣品稀釋液:1×20ml/瓶。
4. 檢測稀釋液A:1×10ml/瓶。
5. 檢測稀釋液B:1×10ml/瓶。
6. 檢測溶液A:1×120ul/瓶(1:100)臨用前以檢測稀釋液A 1:100稀釋,稀釋前根據(jù)預(yù)先計(jì)算好的每次實(shí)驗(yàn)所需的總量配制(100ul/孔),實(shí)際配制時應(yīng)多配制0.1-0.2ml。如10ul檢測溶液A加990ul檢測稀釋液A的比例配制,輕輕混勻,在使用前一小時內(nèi)配制。
7. 檢測溶液B:1×120ul/瓶(1:100)臨用前以檢測稀釋液B 1:100稀釋。稀釋方法同檢測溶液A。
8. 底物溶液:1×10ml/瓶。
9. 濃洗滌液:1×30ml/瓶,使用時每瓶用蒸餾水稀釋25倍。
10. 終止液:1×10ml/瓶(2N H2SO4)。
樣本實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備:
ELISA試劑盒液體樣本:包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清等。
(1)血清
室溫血液自然凝固10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
(2)血漿:
應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
(3)尿液:
用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實(shí)行。
(4)細(xì)胞培養(yǎng)上清:
檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。
(5)培養(yǎng)細(xì)胞
檢測細(xì)胞內(nèi)的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細(xì)胞懸液,細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融或加入組織蛋白萃取試劑,以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
(6)組織標(biāo)本
切割標(biāo)本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿化。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。
內(nèi)皮生長因子受體 1(VEGF-R1) 作用: ELISA
規(guī)格: 48T/96T
進(jìn)口分裝 Otophylloside B 4'''-O-β-D-cymaropyranoside 171422-85-8
中文名: 分子式:C56H90O19 度:98.0% 關(guān)鍵詞: 孕甾烷; 甾苷; 植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫
內(nèi)皮生長因子D 英文名稱: vascuiar endothelial growth factor D 規(guī)格: 48T/96T 英文縮寫: VEGF-D Otophylloside B 4'''-O-β-D-oleandropyranoside 168001-54-5 中文名: 分子式:C56H90O19 度:97.0% 關(guān)鍵詞: 孕甾烷; 甾苷; 植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫
內(nèi)皮生長因子C 英文名稱: vascuiar endothelial growth factor C 規(guī)格: 48T/96T 英文縮寫: VEGF-C Otophylloside B 4'''-O-β-D-oleandropyranoside 中文名: 分子式:C56H90O19
內(nèi)皮生長因子A 英文名稱: vascuiar endothelial growth factor A 規(guī)格: 48T/96T 英文縮寫: VEGF-A Otophylloside B 4'''-O-β-D-oleandropyranoside 中文名: 分子式:C56H90O19 度:97.0%
內(nèi)皮生長因子165 英文名稱:
vascuiar endothelial growth factor 165
規(guī)格: 48T/96T
英文縮寫: VEGF165
Otophylloside B 4'''-O-β-D-oleandropyranoside
168001-54-5 中文名: 分子式:C56H90O19
6-Benzyloxyindole 中文名:6-芐氧基吲哚
分子式:C15H13NO NADP0酸酶(NADPase)測試盒
可見分光光度法 50管/48樣
6-Aminouracil 中文名:6-氨基尿嘧啶 分子式:C4H5N3O2 6-0酸葡萄糖脫氫酶(G6PDH)測試盒 紫外分光光度法 50管/48樣
6-Aminoquinoxaline 中文名:6-氨基喹喔啉 分子式:C8H7N3 乙酸銨 (醋酸銨) 100g
6-Aminopenicillanic acid 中文名:6-氨基青霉烷酸 分子式:C8H12N2O3S AmmoniumAcetate 500g
6-Aminonicotinic
acid 中文名:6-氨基煙酸
分子式:C6H6N2O2 化銨 100g
芐基-N-琥珀基碳酸酯;N-(芐氧羰基氧基)琥珀亞胺;N-芐基琥珀碳酸酯;N-芐氧羰氧基丁二;N-(芐羰氧基)丁二酰胺;芐基琥珀基碳酸酯;N-芐氧羰基氧基琥珀
CBZ-OSU
其他Z-OSU;Z-ONSu;N-(Benzyloxycarbonyloxy)succinimide
產(chǎn)品規(guī)格:BR,99%
包裝:10克/25克/100克/500克
CAS號:13139-17-8
C12H11NO5=249.22
級別:BR
含量:≥99%
熔點(diǎn):78~80℃
光譜鑒定:紅外光譜與標(biāo)樣一致
性狀:結(jié)晶粉末,不溶于水
用途:生化研究
注意事項(xiàng):
1. 試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30 分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
2. 濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結(jié)果。
3. 各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性,以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時間控制在5 分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。
4. 請每次測定的同時做標(biāo)準(zhǔn)曲線,做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD 值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔孔的OD 值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n 倍)后再測定,計(jì)算時請后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。
5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
6. 底物請避光保存。
7. 嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行,試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).
8. 所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
9. 本試劑不同批號組分不得混用。
α半乳糖苷酶試劑盒服務(wù):
我們可以根據(jù)您的應(yīng)用需要,比如在檢測范圍、種屬以及靈敏度等方面有特殊要求,而量身定制檢測試劑盒,有效控制檢測試劑成本。并可提供免費(fèi)代測。