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檢測程序:
1. 加樣:每孔各加入標準品或待測樣品 100ul ,將反應板充分混勻后置 37 ℃ 120 分鐘。
2. 洗板:用洗滌液將反應板充分洗滌 4-6 次,向濾紙上印干。
3. 每孔中加入抗體工作液10 0ul 。將反應板充分混勻后置 37 ℃ 6 0 分鐘。
4. 洗板:同前。
5. 每孔加酶標抗體工作液100ul 。將反應板置 37 ℃ 3 0 分鐘。
6. 洗板:同前。
7. 每孔加入底物工作液100ul ,置 37 ℃ 暗處反應15 分鐘。
8. 每孔加入100ul 終止液混勻。
9. 30分鐘內用酶標儀在 45 0 nm 處測 吸光值。
下列是公司產品ELISA試劑盒的詳細說明書:
中文名稱:α淀粉酶試劑盒
英文簡稱:詳見說明書
產品貨號:BH-0011824
規(guī)格:96T/48T
適用范圍:僅供科研使用
保存及有效期:2-8℃保存,6個月,-20℃一年
試劑和樣本的控制方法:
一、試劑
1.試劑的選擇:國家明確要求要采用批批檢定的形式對ELISA試劑嚴格把關,我司嚴格按照國家標準進行生產,已獲得國家承認的“三證”,每一個產品都有對應的生產批號,只要客戶提前下單,我們就能為您提供新批次的產品,不必擔心會有過期的試劑。我司的試劑,值得您選擇。
2.試劑的準備:先將試劑盒先從冰箱中拿出來,在室溫下放置20-30
min后,再進行測定,使試劑盒在使用前與室溫平衡,這樣做的目的能使反應微孔內的溫度較快地達到所需的溫度,以滿足后面的測定需求。
二、樣本
1.內源性干擾因素:包括類風濕因子、補體、高濃度的非特異球蛋白、異嗜性抗體、某些自身抗體等;
類風濕因子的控制方法:
①用F(ab)2替代完整的IgG;
②標本用聯(lián)有熱變性IgG的固相吸附劑處理;
③檢測抗原時,可用2-巰基乙醇加入到標本稀釋液中使RF降解。
使用方法:
測定法的靈敏度來自作為報告的酶。眾所周知,酶是一種有機催化劑,很少量的酶即可誘導大量的催化反應,產生可供觀察的顯色反應現(xiàn)象。因此該體系常被稱為酶放大體系。
1. 標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。 24μg/ml 5號標準品 150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液
12μg/ml 4號標準品
150μl的5號標準品加入150μl標準品稀釋液
6μg/ml 3號標準品 150μl的4號標準品加入150μl標準品稀釋液
3μg/ml 2號標準品 150μl的3號標準品加入150μl標準品稀釋液
1.5μg/ml 1號標準品
150μl的2號標準品加入150μl標準品稀釋液
2. 加樣:分別設空白孔、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。|
3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4. 配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。
7. 溫育:操作同3。
8. 洗滌:操作同5。
9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.
10. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。
11. 測定:以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。
ELISA 試驗時,注意事項如下:
1. 正式試驗時,應分別以陽性對照與陰性對照控制試驗條件,待檢樣品應作一式二份,以保證實驗結果的準確性。有時本底較高,說明有非特異性反應,可采用羊血清、兔血清或BSA等封閉。
2. 在ELISA中,進行各項實驗條件的選擇是很重要的,其中包括:
(1) 固相載體的選擇:許多物質可作為固相載體,如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等。其形式可以是凹孔平板、試管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何種載體,在使用前均可進行篩選:用等量抗原包被,在同一實驗條件下進行反應,觀察其顯色反應是否均一性,據(jù)此判明其吸附性能是否良好。
(2) 包被抗體(或抗原)的選擇:將抗體(或抗原)吸附在固相載體表面時,要求純度要好,吸附時一般要求PH在9.0~9.6之間。吸附溫度,時間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4℃18~24小時。蛋白質包被的zui適濃度需進行滴定:即用不同的蛋白質濃度(0.1、1.0和10μg/ml等)進行包被后,在其它試驗條件相同時,觀察陽性標本的OD值。選擇OD值zui大而蛋白量zui少的濃度。對于多數(shù)蛋白質來說通常為1~10μg/ml。
(3) 酶標記抗體工作濃度的選擇:首先用直接ELISA法進行初步效價的滴定(見酶標記抗體部份)。然后再固定其它條件或采取“方陣法”(包被物、待檢樣品的參考品及酶標記抗體分別為不同的稀釋度)在正式實驗系統(tǒng)里準確地滴定其工作濃度。
(4) 酶的底物及供氫體的選擇:對供氫體的選擇要**價廉、**、有明顯地顯色反應,而本身無色。有些供氫體(如OPD等)有潛在的致癌作用,應注意防護。有條件者應使用不致癌、靈敏度高的供氫體,如TMB和ABTS是目前較為滿意的供氫體。底物作用一段時間后,應加入強酸或強堿以終止反應。通常底物作用時間,以10-30分鐘為宜。底物使用液必須新鮮配制,尤其是H2O2在臨用前加入 。
內皮細胞合酶 (eNOS) 作用:
ELISA 規(guī)格: 48T/96T
進口分裝 Oxandrolone 53-39-4
中文名:氧甲氫龍 分子式:C19H30O3
內皮素受體A 英文名稱:
Human Endothelin Receptor A 規(guī)格: 48T/96T
英文縮寫: EA
2''-O-Acetylsprengerinin C 中文名: 分子式:C46H72O17
內皮素 -1(Endothelin-1) 作用:
ELISA 規(guī)格: 48T/96T
進口分裝 Oxandrolone
中文名:氧甲氫龍 分子式:C19H30O3
腺來源的內皮生長因子 英文名稱:
endocrine gland-derived vascular endothelial growth factor 規(guī)格:
48T/96T 英文縮寫: EG-VEGF
β-Sitosterol 83-46-5
中文名:β-谷甾醇 分子式:C29H50O 度:98.0% 關鍵詞: 豆甾烷; 中藥對照品; 中藥標準品; 植物提取物; 天然產物; 天然產物庫
內啡肽 - b (Endorphin- b ) 作用:
ELISA 規(guī)格: 48T/96T
進口分裝 Oxandrolone
53-39-4 中文名:氧甲氫龍 分子式:C19H30O3 度:98.0% 關鍵詞:
2-Acetyl-1H-Isoindole-1,3(2H)-Dione 1971-49-9
中文名:2-乙?;?1H-異吲哚-1,3(2H)-二酮 分子式:C10H7NO3 乳鐵蛋白( Lactoferrin ) 作用:
ELISA 規(guī)格: 48T/96T
進口分裝
DL-Alanyl-DL-Mine 1999-43-5
中文名:DL-丙氨酰-DL-蛋氨酸 分子式:C8H16N2O3S 白血病抑制因子 (LIF) 作用:
ELISA 規(guī)格: 48T/96T
進口分裝
2-Acetamidothiazole 2719-23-5
中文名:2-乙酰氨基噻唑 分子式:C5H6N2OS 脂蛋脂酶 A2(LP-PLA2) 作用:
ELISA 規(guī)格: 48T/96T
進口分裝
4-Allyloxy-2-hydroxybenzophenone 2549-87-3
中文名:4-丙烯氧基-2-羥基二苯甲酮 分子式:C16H14O3 脂肪細胞刺激因子 (LSP) 作用:
ELISA 規(guī)格: 48T/96T
進口分裝
2-Acetyl-6-methoxynaphthalene 3900-45-6
中文名:6-甲氧基-2-乙酰萘 分子式:C13H12O2 乳糖 100g
對氨基馬尿酸鈉;4-甲酰胺基乙酸鈉;4-甲?;拾彼徕c;對氨馬尿酸鈉
4-aminohippurate
其他p-Aminohippuric acid salt;N-(p-Aminobenzoyl)glycine
產品規(guī)格:BR,98%
包裝:5克/25克/100克
CAS號:94-16-6
C9H9N2NaO3=216.17
級別:BR
含量:≥98%
α淀粉酶試劑盒熔點:123~127℃
性狀:結晶。溶于水。水溶液呈堿性
用途:生化研究