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培養(yǎng)操作步驟 :
1.用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時;
4.將經(jīng)過計數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片完全浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時,將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及細(xì)胞化學(xué)檢測。
產(chǎn)品名稱 |
F55細(xì)胞 |
規(guī)格 |
詳見說明書 |
貨號 |
BH-8010768 |
實驗材料:
1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶;8ml小牛血清(FCS) 1瓶;100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶;PBS(-)1 瓶
2. 100ml燒杯2個; 人皮膚成纖維細(xì)胞,CCC-HSF-1細(xì)胞
3、50ml離心筒2個
4、培養(yǎng)皿1個,細(xì)胞培養(yǎng)瓶1個
5、1ml ,200μl移液器各1支;槍頭盒2個;無菌玻璃攪拌棒1個
6、細(xì)胞計數(shù)板1塊;
7、滅好菌的鑷子1把,剪刀1把;
8、酒精燈1臺;
培養(yǎng)細(xì)胞凍存方案:
以下實驗方案介紹了培養(yǎng)細(xì)胞凍存的一般流程。詳細(xì)的實驗方案,必須參閱針對具體細(xì)胞的產(chǎn)品說明書。
1.配制凍存培養(yǎng)基,于2°C至8°C下儲存,直至使用。請注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細(xì)胞系。
2.凍存貼壁細(xì)胞時,利用傳代時所用方法輕柔地使細(xì)胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來。用該細(xì)胞所需完全培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞。
3.采用血球計數(shù)器、細(xì)胞計數(shù)儀按照臺盼藍(lán)拒染法或者使用自動細(xì)胞計數(shù)儀測定總細(xì)胞數(shù)和活細(xì)胞百分比。根據(jù)所需活細(xì)胞密度,計算凍存培養(yǎng)基需要量。
4.以大約100-200×g的離心力將細(xì)胞懸液離心5至10分鐘。在無菌條件下小心倒掉上清液,不要攪動細(xì)胞沉淀。
注:離心速度和時間取決于細(xì)胞種類。
5.用預(yù)冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞沉淀,將其調(diào)整至該細(xì)胞適合的活細(xì)胞密度。
6.將細(xì)胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時,應(yīng)不時輕輕混合細(xì)胞,使其保持均勻的細(xì)胞懸液狀態(tài)。
7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細(xì)胞,使溫度每分鐘大約降低 1°C?;蛘撸瑢⒀b有細(xì)胞的凍存管放入凍存盒中,然后將凍存盒置于-80°C條件下過夜。
實驗要點及說明 :
1.本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng),而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng),懸浮細(xì)胞可使用滴片法;
2.所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)玻璃**,并經(jīng)過鉻酸洗液處理;
3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時動作要輕;
4.如果需要更多生長狀態(tài)一致的細(xì)胞,可以使用較大的培養(yǎng)皿,但不宜過大,以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率;
5.如果細(xì)胞貼壁生長能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
收到如何處理:
1、首先,觀察培養(yǎng)瓶是否完好,培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象。若有,請拍照,并及時與技術(shù)支持聯(lián)系(所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù))。
2、用75%酒精擦拭細(xì)胞培養(yǎng)瓶表面,顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問題,部分貼壁細(xì)胞會有少量從瓶壁脫落;先不要打開培養(yǎng)瓶蓋,將細(xì)胞置于細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2-4小時,以便穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
3、仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書,了解細(xì)胞相關(guān)信息,如貼壁特性(貼壁/懸?。?、細(xì)胞形態(tài)、所用基礎(chǔ)培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子、傳代比例、換液頻率等。
4、靜置完成后,取出細(xì)胞培養(yǎng)瓶,鏡檢、拍照,記錄細(xì)胞狀態(tài)(所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù));建議細(xì)胞傳代培養(yǎng)后,定期拍照、記錄細(xì)胞生長狀態(tài)。
5、貼壁細(xì)胞:若細(xì)胞生長密度超過80%,可正常傳代;若未超過80%,移除細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)基,預(yù)留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng),直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右再進(jìn)行傳代操作,瓶蓋可稍微擰松。
6、懸浮細(xì)胞:將細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)液體全部轉(zhuǎn)移至50ml無菌離心管內(nèi),1200rpm離心5min,離心后上清培養(yǎng)基可收集備用,管底細(xì)胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打、重懸。鏡檢時,若細(xì)胞密度超過80%,可將細(xì)胞懸液分至2個細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng),補(bǔ)加培養(yǎng)基至5ml;若細(xì)胞密度未超過80%,將細(xì)胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng),直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右時再進(jìn)行傳代操作。
2,4,5-T-iso-propyl ester,certified 標(biāo)準(zhǔn)品 Carbophenothion,10ng/ul 93-78-7 純品型,0.1G 特征形態(tài) 固態(tài)
2,4,5-T-iso-octyl ester (technical),certi Carbondisulfide 25168-15-4 純品型,0.1G 特征形態(tài) 固態(tài)
2,4,5-T-2-ethylhexyl
ester,certified 標(biāo)準(zhǔn) Carbofuran-3-hydroxy 1928-47-8 純品型,250MG
α -MSH (11-13) (free acid)
γ 1-MSH Myelin Oligodendrocyte
Glycoprotein (35-55) (mouse, rat),
Mca-RPKPYA-Nva-WM-Lys(Dnp)-NH2
GHG
Acetyl-α -MSH (11-13) Acetyl-(Lys0,Nle3)-γ 2-MSH amide Myelin Proteolipid Protein (139-151) (depalmitoylated)(human Mca-RPKPVE-Nva-WR-Lys(Dnp)-NH2 HK
(D-Pro12)-α -MSH (11-13)(free acid) γ 2-MSH (Ser140)-Myelin Proteolipid Protein (139-151)(depalmitoylate Mca-KPLGL-Dap(Dnp)-AR-NH2 Liver Cell Growth Factor
MSH-B γ 3-MSH (Leu144,Arg147)-Myelin Proteolipid Protein (139-151) Mca-Pro-β -cyclohexyl-AG-Nva-HA-Dap(Dnp)-NH2 SPARC (119-122) (mouse)
β -MSH
(human) δ -MSH MBP (85-99) Peptide Antagonist Mca-PLA-Nva-Dap(Dnp)-AR- NH2 LHRH
澤瀉醇 HPLC≥98% 5mg Rat dopamine D2 receptor (D2R)
ELISA Kit 大鼠多巴胺D2受體(D2R)ELISA試劑盒
氈毛美洲茶素 HPLC≥98% 5mg Rat endocrine gland vascular endothelial growth factor (EG-VEGF) ELISA Kit 大鼠腺來源的血管內(nèi)皮生長因子(EG-VEGF)ELISA試劑盒
粘毛黃芩素 III 四乙酸酯 HPLC≥98% 5mg Rat endostatin (ES) ELISA Kit 大鼠內(nèi)皮抑素(ES)ELISA試劑盒
粘毛黃芩素III HPLC≥98% 5mg Rat endothelial lipase (EL) ELISA Kit 大鼠內(nèi)皮脂肪酶(EL)ELISA試劑盒
樟葉木防己堿 HPLC≥98% 5mg Rat endothelial niic oxide syhase (eNOS) ELISA Kit 大鼠內(nèi)皮型合成酶(eNOS)ELISA試劑盒
柘樹口山酮 A HPLC≥98% 5mg Rat endothelial niic oxide syhase 3 (eNOS-3) ELISA Kit 大鼠內(nèi)皮型合成酶3(eNOS-3)ELISA試劑盒
梔子醛 HPLC≥98% 5mg Rat endothelin 1 (ET-1) ELISA Kit 大鼠內(nèi)皮素1(ET-1)ELISA試劑盒
珠子草素 HPLC≥98% 5mg Rat endotoxin (ET) ELISA Kit 大鼠內(nèi)(ET)ELISA試劑盒
梓苷,梓實糖苷 HPLC≥98% 5mg Rat erythropoietin (EPO) ELISA Kit 大鼠紅細(xì)胞**素(EPO)ELISA試劑盒
梓木內(nèi)酯 HPLC≥98% 5mg Rat factor related apoptosis
inducing ligand (FASL) ELISA Kit 大鼠凋亡相關(guān)因子配體(FASL)ELISA試劑盒
我們的細(xì)胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等,購買F55細(xì)胞到貨后,由我們實驗室擴(kuò)增、凍存,凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測,100%進(jìn)口來源,100%保證5代以內(nèi),活力>95%,無**、支原體污染。 細(xì)胞到達(dá)客戶手中,1個月內(nèi)出現(xiàn)任何問題,導(dǎo)致細(xì)胞在凍存前死亡,我們公司都可以免費(fèi)再向客戶提供一次。產(chǎn)品僅用于科學(xué)研究