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產品名稱 |
hacat細胞 |
規(guī)格 |
詳見說明書 |
貨號 |
BH-8010769 |
細胞生物學研究有以下幾個方面。產品僅用于科學研究
細胞生物學的研究內容十分廣泛,主要包括。
①細胞核、染色體以及基因表達的研究。
②生物膜與細胞器的研究。
③細胞骨架體系的研究。
④細胞增殖及其調控。
⑤細胞分化及其調控。
⑥細胞的衰老與編程性死亡(凋亡)。
⑦細胞的起源與進化。
⑧細胞工程。
實驗報告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,將組織剪成1mm3左右大小;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織完全被消化;
4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、熒光鑒定:
1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;
2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;
5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
培養(yǎng)操作:
1)復蘇細胞:將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,棄去上清液,補 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜(或將 細胞懸液加入 10cm 皿中,加入約 8ml 培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。天換液并 檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達 80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM
EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分 變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘,棄去上清液,補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細胞懸液按 1:2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3)細胞凍存:待細胞生長狀態(tài)良好時,可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類;
1. 細胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后,PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶,細胞變圓 脫 落后,加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計數板計數。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細胞,根據細胞數量加 入血 清和 DMSO,輕輕混勻,DMSO 終濃度為 10%,細胞密度不低于1x106/ml,每支凍存管凍存 1ml 細胞懸液,注意凍 存管做好標識。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80 度冰箱,2 個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
2,4,5-Trichlorophenol ethanolamine salt,c
2,4,6-Tri-tert-butylphenol - 純品型,0.1G 特征形態(tài) 固態(tài)
3,4,5-Trichlorophenol acetate Tributylethyltin - 純品型,25mg 特征形態(tài) 固態(tài)
2,3,4-Trichlorophenol
acetate Tribromomethane - 純品型,25mg 特征形態(tài) 固態(tài)
Acetyl-(D-Arg10,Cys11,D-Phe14,Cys17)-β -MSH
(10-17) amide Myelin Basic Protein
(4-14)
Abz-Lys-Pro-Leu-Gly-Leu-Dap(Dnp)-Ala-Arg-NH2 Mca-PLGL-Dap(Dnp)-AR-NH2 LHRH (free acid)
Acetyl-(Cys11,D-2-Nal14,Cys18)-β -MSH (11-22) amide (Des-Gly77,Des-His78)- Myelin Basic Protein(68-84) (bovine) Ac-Pro-Leu-Gly-OH Mca-PLGLEEA-Dap(Dnp)-NH2 LHRH (1-5) (free acid)
(Deamino-Cys11,D-2- Nal14,Cys18)-β -MSH (11-22) amide, JKC-3 (Des-Gly77,Des-His78)-Myelin Basic Protein (68-84) (guinea p CTT Mca-PKPLAL-Dap(Dnp)-AR-NH2 LHRH (1-6) (free acid)
β -MSH (monkey), β -MSH(5-22) (human) Myelin Basic Protein(83-99) (bovine) DABCYL-γ -Abu-PQGL-Glu(EDANS)-AK-NH2 Peptide 74 LHRH (1-6) amide
β -MSH
(porcine), β -Lipotropin (41-58) (porcine)
Myelin Basic Protein (87-99) (human, bovine, rat) Dnp-RPLALWRS-OH Metorphamide
(D-Leu6)-LHRH (1-8)(free acid)
皂土(膨潤土)(Bentone SD-1,適于中至低極性溶劑) Bentonite 質量規(guī)格:Bentone SD-1,適于中至低極性溶劑 犬透明質酸(HA)試劑盒 Canine Hyaluronic acid,HA ELISA Kit
皂土(膨潤土)(Bentone SD-2,適于中高極性溶劑) Bentonite 質量規(guī)格:Bentone SD-2,適于中高極性溶劑 犬透明質酸酶1(HAase 1)試劑盒 Canine Hyaluronidase 1,HAase 1 ELISA Kit
活性炭粉(AR,200目,粉末狀,褐色) Activated charcoal 質量規(guī)格:AR,200目,粉末狀,褐色 犬透明質酸酶2(HAase 2)試劑盒 Canine Hyaluronidase 2,HAase 2 ELISA Kit
活性炭(CP,200目,粉末狀,褐色) Activated charcoal 質量規(guī)格:CP,200目,粉末狀,褐色 犬透明質酸酶3(HAase 3)試劑盒 Canine Hyaluronidase 3,HAase 3 ELISA Kit
活性炭顆粒(AR,20-50目) Activated charcoal 質量規(guī)格:AR,20-50目 犬透明質酸酶4(HAase 4)試劑盒 Canine Hyaluronidase 4,HAase 4 ELISA Kit
活性炭(電鍍脫色,200目,from wood) Activated charcoal 質量規(guī)格:電鍍脫色,200目,from wood 犬維生素A(VA)ELISA檢測試劑盒CanineVitaminA,VAELISAKit 96T/48T
活性炭(催化劑載體,8-16目) Activated charcoal 質量規(guī)格:催化劑載體,8-16目 犬維生素A(VA)試劑盒 Dog Vitamin A,VA ELISA Kit
活性炭(凈水、氣體化,棒,φ1.0mm) Activated charcoal 質量規(guī)格:凈水、氣體化,棒,φ1.0mm 犬維生素E(VE)ELISA檢測試劑盒CanineVitaminE,VEELISAKit 96T/48T
活性炭(凈水、氣體化,10-24目) Activated charcoal 質量規(guī)格:凈水、氣體化,10-24目 犬維生素E(VE)試劑盒 Canine Vitamin E,VE ELISA Kit
活性炭(電鍍脫色,40-60目,from Nutshell) Activated charcoal 質量規(guī)格:電鍍脫色,40-60目,from Nutshell 犬維生素K1(VK1)ELISA檢測試劑盒CanineVitaminK1,VK1ELISAKit 96T/48T
細胞培養(yǎng)的優(yōu)點:
1.研究的對象是活細胞
在實驗過程中,根據要求可始終保持細胞活力,并可長時間監(jiān)控、檢測甚至定量評估一部分活細胞的情況,包括活細胞的形態(tài)、結構、生命活動等。
2.研究條件可以人為控制
pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學的條件,可以根據實際進行人為的控制,同時,可以施加化學、物理、生物等因素作為條件而進行實驗觀察,這些因素同樣可以處于嚴格控制之下。
3.研究的樣本可以達到比較均一性
hacat細胞通過細胞培養(yǎng)一定代數后,所得到的細胞系則可以達到均一性而屬于同一類型的細胞,需要時,可采用克隆化等方法使細胞達到純化。
4.研究內容便于觀察、檢測和記錄
采用各種研究技術:如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細胞術、激光共焦顯微鏡、組織化學、原位雜交、同位素標記等各種儀器設備 記錄方式可采用攝影照片、縮時電影、電視等多種手段。
5.研究的范圍比較廣泛
應用的學科領域較為寬廣,如細胞學、腫瘤學、生物化學、遺傳學、分子生物學等;
適用的對象范圍廣,從低等動物到高等動物,一種動物的不同年齡階段以及不同組織,都可進行有針對性的研究。
6.研究的費用相對較經濟
可提供大量、同一時期、重復性好的、生物學性狀相似的實驗對象。