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細胞培養(yǎng)的優(yōu)點:
1.研究的對象是活細胞
在實驗過程中,根據(jù)要求可始終保持細胞活力,并可長時間監(jiān)控、檢測甚至定量評估一部分活細胞的情況,包括活細胞的形態(tài)、結構、生命活動等。
2.研究條件可以人為控制
pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學的條件,可以根據(jù)實際進行人為的控制,同時,可以施加化學、物理、生物等因素作為條件而進行實驗觀察,這些因素同樣可以處于嚴格控制之下。
3.研究的樣本可以達到比較均一性
通過細胞培養(yǎng)一定代數(shù)后,所得到的細胞系則可以達到均一性而屬于同一類型的細胞,需要時,可采用克隆化等方法使細胞達到純化。
4.研究內(nèi)容便于觀察、檢測和記錄
采用各種研究技術:如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細胞術、激光共焦顯微鏡、組織化學、原位雜交、同位素標記等各種儀器設備 記錄方式可采用攝影照片、縮時電影、電視等多種手段。
5.研究的范圍比較廣泛
應用的學科領域較為寬廣,如細胞學、腫瘤學、生物化學、遺傳學、分子生物學等;
適用的對象范圍廣,從低等動物到高等動物,一種動物的不同年齡階段以及不同組織,都可進行有針對性的研究。
6.研究的費用相對較經(jīng)濟
可提供大量、同一時期、重復性好的、生物學性狀相似的實驗對象。
產(chǎn)品名稱 |
J.gamma1細胞 |
規(guī)格 |
詳見說明書 |
貨號 |
BH-8010788 |
細胞生物學研究有以下幾個方面。產(chǎn)品僅用于科學研究
細胞生物學的研究內(nèi)容十分廣泛,主要包括。
①細胞核、染色體以及基因表達的研究。
②生物膜與細胞器的研究。
③細胞骨架體系的研究。
④細胞增殖及其調(diào)控。
⑤細胞分化及其調(diào)控。
⑥細胞的衰老與編程性死亡(凋亡)。
⑦細胞的起源與進化。
⑧細胞工程。
實驗報告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,將組織剪成1mm3左右大??;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織完全被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、熒光鑒定:
1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;
2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;
5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
培養(yǎng)操作:
1)復蘇細胞:將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,棄去上清液,補 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜(或?qū)?細胞懸液加入 10cm 皿中,加入約 8ml 培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。天換液并 檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達 80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM
EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分 變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘,棄去上清液,補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細胞懸液按 1:2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3)細胞凍存:待細胞生長狀態(tài)良好時,可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類;
1. 細胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后,PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶,細胞變圓 脫 落后,加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計數(shù)板計數(shù)。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細胞,根據(jù)細胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO,輕輕混勻,DMSO 終濃度為 10%,細胞密度不低于1x106/ml,每支凍存管凍存 1ml 細胞懸液,注意凍 存管做好標識。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80 度冰箱,2 個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
2H,2H-全氟辛酸 標準品 Piperazinecitrate 53826-12-3純品型,10mg 特征形態(tài) 固態(tài)
1h,1h,2h,2h全氟辛烷磺酸 標準品 SolventRed26 27619-97-2 純品型,10mg 特征形態(tài) 固態(tài)
全氟辛烷磺酸鉀(PFOS鉀鹽) 標準品 Phenazine 2795-39-3 純品型,0.1g 特征形態(tài) 固態(tài)
c(RGDfK)
RGDS (Glu1)-Fibrinopeptide B (Hyp474?477,Gln479)-cyclo-α -Fetoprotein
(471-479) (human
(D-Pen2,p-chloro-Phe4,D-Pen5)-Enkephalin
Cyclo(-RGDfC) RGDC Fibrinopeptide B (Hyp474?477)-α -Fetoprotein(471- 478)(human, lowland goril (3,5-Diiodo-Tyr1,D-Ala2,N-Me- Phe4,glycinol5)- Enkephalin
c(RADfV) RGD (Tyr0)-Fibrinopeptide A CV-2-Nal-M (D-Ala2)-Leu-Enkephalin amide
c(RADfC) RRGDME Fibrinopeptide A (human) H-Cys-4-Abz-Met-OH Leu-Enkephalin amide,α -Neoendorphin (1-5) amide
XJ735 Ac-DRGDS
GPGG Epidermal Mitosis Inhibiting
Pentapeptide Boc-Leu-Enkephalin
硬脂酸鈉(>95%,BR)
stearate 質(zhì)量規(guī)格:>95%,BR 寡核苷酸探針同位素法DNA斑點雜交完全試劑盒5
硫代硫酸鈉無水(>98.5%,BC) thiosulfate anhydrous 質(zhì)量規(guī)格:>98.5%,BC 寡核苷酸探針同位素法DNA南方雜交完全試劑盒5
Sulfo NHS LC Biotin Sulfo NHS LC Biotin 質(zhì)量規(guī)格:BR 寡核苷酸探針同位素法RNA北方雜交完全試劑盒5
Sulfo NHS SS Biotin Sulfo NHS SS Biotin 質(zhì)量規(guī)格:BR 光鏡樣品固著液(10%Formalin固著液)50毫升
四乙酰核糖(>98% (HPLC),BC) Tetraacetylribose 質(zhì)量規(guī)格:>98% (HPLC),BC 胱蛋白酶抑制劑(CystatinC)定量檢測試劑盒50
J.gamma1細胞酪氨酸脫羧酶 Tyrosine decarboxylase 質(zhì)量規(guī)格:>0.1 U/mg,BC 果菜D-葡萄糖酸內(nèi)脂比色法定量檢測試劑盒20
維多利亞藍 R Victoria blue R 質(zhì)量規(guī)格:染料含量:>80%,BS 果菜D-葡萄糖酸鹽比色法定量檢測試劑盒20
α-酮戊二酸單鉀鹽(>98%,BR) α-Ketoglutaric acid potassium salt 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR 果菜L-天門冬酰胺化學比色法定量檢測試劑盒20
1-環(huán)己基二乙酸單酰胺(>98%,BR) 1,1-Cyclohexanediacetic acid monoamide 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR 果菜L-天門冬酰胺酶偶聯(lián)反應比色法定量檢測試劑盒20
1,2-乙二硫醇(>98.5%,BR) 1,2-Ethanedithiol 質(zhì)量規(guī)格:>98.5%,BR 果菜比色法定量檢測試劑盒20