咨詢電話:18117197628
實驗要點及說明 :
1.本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng),而不適用于懸浮細胞培養(yǎng),懸浮細胞可使用滴片法;
2.所使用的蓋玻片應該為優(yōu)玻璃**,并經(jīng)過鉻酸洗液處理;
3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時動作要輕;
4.如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞,可以使用較大的培養(yǎng)皿,但不宜過大,以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率;
5.如果細胞貼壁生長能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
產(chǎn)品名稱 |
Jurkat,CloneEC-L1細胞 |
規(guī)格 |
T25 |
貨號 |
BH-0109460 |
產(chǎn)品詳細 急性T細胞白血病細胞;Jurkat,CloneEC-L1
形態(tài)特性 母細胞樣
生長特性 懸浮生長
特征特性 該細胞是Jurkat-FHCRC細胞株(Jurkat細胞株的衍生)的一個克隆。Jurkat細胞株來源于一個14歲男孩的外周血;經(jīng)佛波酯和外源凝集素或抗T3單克隆抗體中的一種誘導后可產(chǎn)生大量IL-2(IL-2的產(chǎn)生需兩種類型的誘導劑);表達T細胞受體、CD3。
培養(yǎng)條件 RPMI1640+10%FBS
傳代方法 1:2傳代
我們的細胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等,Jurkat,CloneEC-L1細胞購買到貨后,由我們實驗室擴增、凍存,凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測,100%進口來源,100%保證5代以內,活力>95%,無**、支原體污染。 細胞到達客戶手中,1個月內出現(xiàn)任何問題,導致細胞在凍存前死亡,我們公司都可以免費再向客戶提供一次。產(chǎn)品僅用于科學研究
實驗材料:
1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶;8ml小牛血清(FCS) 1瓶;100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶;PBS(-)1 瓶
2. 100ml燒杯2個; 人皮膚成纖維細胞,CCC-HSF-1細胞
3、50ml離心筒2個
4、培養(yǎng)皿1個,細胞培養(yǎng)瓶1個
5、1ml ,200μl移液器各1支;槍頭盒2個;無菌玻璃攪拌棒1個
6、細胞計數(shù)板1塊;
7、滅好菌的鑷子1把,剪刀1把;
8、酒精燈1臺;
培養(yǎng)細胞凍存方案:
以下實驗方案介紹了培養(yǎng)細胞凍存的一般流程。詳細的實驗方案,必須參閱針對具體細胞的產(chǎn)品說明書。
1.配制凍存培養(yǎng)基,于2°C至8°C下儲存,直至使用。請注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細胞系。
2.凍存貼壁細胞時,利用傳代時所用方法輕柔地使細胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來。用該細胞所需完全培養(yǎng)基重新懸浮細胞。
3.采用血球計數(shù)器、細胞計數(shù)儀按照臺盼藍拒染法或者使用自動細胞計數(shù)儀測定總細胞數(shù)和活細胞百分比。根據(jù)所需活細胞密度,計算凍存培養(yǎng)基需要量。
4.以大約100-200×g的離心力將細胞懸液離心5至10分鐘。在無菌條件下小心倒掉上清液,不要攪動細胞沉淀。
注:離心速度和時間取決于細胞種類。
5.用預冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細胞沉淀,將其調整至該細胞適合的活細胞密度。
6.將細胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時,應不時輕輕混合細胞,使其保持均勻的細胞懸液狀態(tài)。
7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細胞,使溫度每分鐘大約降低 1°C?;蛘?,將裝有細胞的凍存管放入凍存盒中,然后將凍存盒置于-80°C條件下過夜。
培養(yǎng)操作步驟 :
1.用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時;
4.將經(jīng)過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片完全浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時,將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及細胞化學檢測。
小鼠脫氧酚elisa試劑盒
小鼠脫氧酚試劑盒 規(guī)格型號:96T/48T 小鼠脫氧酚試劑盒,規(guī)格型號:96T/48T,來源:elisa試劑盒(進口分裝),產(chǎn)品別名:小鼠脫氧酚試劑盒、小鼠脫氧酚eisa試劑盒
保存條件:2-8℃
保質期:6個月。
Loperamide 中文名:鹽酸洛哌丁胺 分子式:C29H34Cl2N2O2 度:98.0%
小鼠脫氧酚/脫氧啉(DPD)ELISA試劑盒 Loratadine 中文名:氯雷他定 分子式:C22H23ClN2O2
小鼠
亞麻酸甲酯 GC≥98% 100mg 人肌抑素(MSTN)試劑盒 Human Myostatin ELISA Kit
去乙酰毛花苷丙 HPLC≥98% 20mg Ratc-junELISAKit大鼠c-junELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
醋酸潑尼松 HPLC≥98% 100mg 10倍is-T濃縮緩沖清理溶液100毫升
正癸酸 GC≥98% 5ml MouseClusterofdiffereiation19,CD19ELISA試劑盒小鼠CD19分子(CD19)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
鹽酸西替利嗪 HPLC≥98% 100mg 小鼠血管**素樣蛋白3(ANGPTL3)ELISA試劑盒 ,英文名: ANGPTL3 ELISA Kit
優(yōu)葛縷酮 HPLC≥98% 100mg 兔子皮質酮/腎上腺酮(CO)ELISA檢測試劑盒rabbitCoicosterone,COELISAKit 96T/48T
蛔蒿素 HPLC≥98% 100mg 犬S100鈣結合蛋白A12/鈣粒蛋白C(S100A12)試劑盒 Canine S100 calcium binding protein A12/Calgranulin-C,S100A12 ELISA Kit
(R)()桃金娘烯醛 HPLC≥98% 100mg 英文名稱Human-4ELISAKit人神經(jīng)營養(yǎng)素4(-4)規(guī)格:96T/48T
多索茶堿 HPLC≥98% 250mg 單線態(tài)氧氣(scavenging)活性熒光篩選試劑盒20
腺苷一二鈉鹽 HPLC≥98% 20mg
Ratmacrophageinflammatoryprotein2,MIP-2ELISA試劑盒大鼠巨噬細胞炎性蛋白2(MIP-2)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
偏肺病毒/腺病毒雙重熒光PCR檢測試劑盒48Manidipine di892265鹽酸馬尼地平
新雙重熒光PCR檢測試劑盒48Quetiapine1119749喹硫平
博卡(Boca)/呼吸道合胞(RSV)/偏肺(MPV)病毒三重熒光PCR檢測試劑盒48Gemcitabine9581吉西他濱
冠狀(Hcov)/副流感(PIV)/腺(ADV)病毒三重熒光PCR檢測試劑盒48Mizolastine86125咪唑司汀
乙型流感病毒(IFVB-YA)分型單重熒光PCR檢測試劑盒48Avanafil37847阿伐那非
收到如何處理:
1、首先,觀察培養(yǎng)瓶是否完好,培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象。若有,請拍照,并及時與技術支持聯(lián)系(所拍照片將作為后續(xù)服務依據(jù))。
2、用75%酒精擦拭細胞培養(yǎng)瓶表面,顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題,部分貼壁細胞會有少量從瓶壁脫落;先不要打開培養(yǎng)瓶蓋,將細胞置于細胞培養(yǎng)箱內靜置培養(yǎng)2-4小時,以便穩(wěn)定細胞狀態(tài)。
3、仔細閱讀細胞說明書,了解細胞相關信息,如貼壁特性(貼壁/懸?。?、細胞形態(tài)、所用基礎培養(yǎng)基、血清比例、所需細胞因子、傳代比例、換液頻率等。
4、靜置完成后,取出細胞培養(yǎng)瓶,鏡檢、拍照,記錄細胞狀態(tài)(所拍照片將作為后續(xù)服務依據(jù));建議細胞傳代培養(yǎng)后,定期拍照、記錄細胞生長狀態(tài)。
5、貼壁細胞:若細胞生長密度超過80%,可正常傳代;若未超過80%,移除細胞培養(yǎng)瓶內培養(yǎng)基,預留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng),直至細胞密度達80%左右再進行傳代操作,瓶蓋可稍微擰松。
6、Jurkat,CloneEC-L1細胞懸浮細胞:將細胞培養(yǎng)瓶內液體全部轉移至50ml無菌離心管內,1200rpm離心5min,離心后上清培養(yǎng)基可收集備用,管底細胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打、重懸。鏡檢時,若細胞密度超過80%,可將細胞懸液分至2個細胞培養(yǎng)瓶內培養(yǎng),補加培養(yǎng)基至5ml;若細胞密度未超過80%,將細胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng),直至細胞密度達80%左右時再進行傳代操作。