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培養(yǎng)操作步驟 :
1.用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí);
4.將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片完全浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。
產(chǎn)品名稱(chēng) |
A172細(xì)胞 |
規(guī)格 |
T25 |
貨號(hào) |
BH-0109467 |
產(chǎn)品詳細(xì) 膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞;A172
形態(tài)特性
生長(zhǎng)特性 貼壁生長(zhǎng)
特征特性 在半固體培養(yǎng)基中形成克隆。在抑制小鼠中不成瘤。
培養(yǎng)條件 DMEM(高糖)+10%FBS
傳代方法 消化CQ-5分鐘。1:2。3天內(nèi)可長(zhǎng)滿(mǎn)。
實(shí)驗(yàn)材料:
1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶;8ml小牛血清(FCS) 1瓶;100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶;PBS(-)1 瓶
2. 100ml燒杯2個(gè); 人皮膚成纖維細(xì)胞,CCC-HSF-1細(xì)胞
3、50ml離心筒2個(gè)
4、培養(yǎng)皿1個(gè),細(xì)胞培養(yǎng)瓶1個(gè)
5、1ml ,200μl移液器各1支;槍頭盒2個(gè);無(wú)菌玻璃攪拌棒1個(gè)
6、細(xì)胞計(jì)數(shù)板1塊;
7、滅好菌的鑷子1把,剪刀1把;
8、酒精燈1臺(tái);
培養(yǎng)細(xì)胞凍存方案:
以下實(shí)驗(yàn)方案介紹了培養(yǎng)細(xì)胞凍存的一般流程。詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)方案,必須參閱針對(duì)具體細(xì)胞的產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)。
1.配制凍存培養(yǎng)基,于2°C至8°C下儲(chǔ)存,直至使用。請(qǐng)注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細(xì)胞系。
2.凍存貼壁細(xì)胞時(shí),利用傳代時(shí)所用方法輕柔地使細(xì)胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來(lái)。用該細(xì)胞所需完全培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞。
3.采用血球計(jì)數(shù)器、細(xì)胞計(jì)數(shù)儀按照臺(tái)盼藍(lán)拒染法或者使用自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀測(cè)定總細(xì)胞數(shù)和活細(xì)胞百分比。根據(jù)所需活細(xì)胞密度,計(jì)算凍存培養(yǎng)基需要量。
4.以大約100-200×g的離心力將細(xì)胞懸液離心5至10分鐘。在無(wú)菌條件下小心倒掉上清液,不要攪動(dòng)細(xì)胞沉淀。
注:離心速度和時(shí)間取決于細(xì)胞種類(lèi)。
5.用預(yù)冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞沉淀,將其調(diào)整至該細(xì)胞適合的活細(xì)胞密度。
6.將細(xì)胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時(shí),應(yīng)不時(shí)輕輕混合細(xì)胞,使其保持均勻的細(xì)胞懸液狀態(tài)。
7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細(xì)胞,使溫度每分鐘大約降低 1°C?;蛘撸瑢⒀b有細(xì)胞的凍存管放入凍存盒中,然后將凍存盒置于-80°C條件下過(guò)夜。
實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說(shuō)明 :
1.本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng),而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng),懸浮細(xì)胞可使用滴片法;
2.所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)玻璃**,并經(jīng)過(guò)鉻酸洗液處理;
3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕;
4.如果需要更多生長(zhǎng)狀態(tài)一致的細(xì)胞,可以使用較大的培養(yǎng)皿,但不宜過(guò)大,以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率;
5.如果細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴(lài)氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
收到如何處理:
1、首先,觀察培養(yǎng)瓶是否完好,培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象。若有,請(qǐng)拍照,并及時(shí)與技術(shù)支持聯(lián)系(所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù))。
2、用75%酒精擦拭細(xì)胞培養(yǎng)瓶表面,顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問(wèn)題,部分貼壁細(xì)胞會(huì)有少量從瓶壁脫落;先不要打開(kāi)培養(yǎng)瓶蓋,將細(xì)胞置于細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2-4小時(shí),以便穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
3、仔細(xì)閱讀細(xì)胞說(shuō)明書(shū),了解細(xì)胞相關(guān)信息,如貼壁特性(貼壁/懸?。?、細(xì)胞形態(tài)、所用基礎(chǔ)培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子、傳代比例、換液頻率等。
4、靜置完成后,取出細(xì)胞培養(yǎng)瓶,鏡檢、拍照,記錄細(xì)胞狀態(tài)(所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù));建議細(xì)胞傳代培養(yǎng)后,定期拍照、記錄細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)。
5、貼壁細(xì)胞:若細(xì)胞生長(zhǎng)密度超過(guò)80%,可正常傳代;若未超過(guò)80%,移除細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)培養(yǎng)基,預(yù)留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng),直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右再進(jìn)行傳代操作,瓶蓋可稍微擰松。
6、懸浮細(xì)胞:將細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)液體全部轉(zhuǎn)移至50ml無(wú)菌離心管內(nèi),1200rpm離心5min,離心后上清培養(yǎng)基可收集備用,管底細(xì)胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打、重懸。鏡檢時(shí),若細(xì)胞密度超過(guò)80%,可將細(xì)胞懸液分至2個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)培養(yǎng),補(bǔ)加培養(yǎng)基至5ml;若細(xì)胞密度未超過(guò)80%,將細(xì)胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng),直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右時(shí)再進(jìn)行傳代操作。
小鼠糖原合成酶激酶(GSK)ELISAKit
Cholesterol 57-88-5 中文名:膽固醇 分子式:C27H46O
小鼠糖原0酸化酶同工酶MM(GP-MM)ELISAKit Levodopa 中文名:多巴 分子式:C9H11NO4 度:98.0%
小鼠糖原0酸化酶同工酶II(GP-II)ELISA試劑盒 Levamisole 中文名:鹽酸咪唑 分子式:C11H13ClN2S 度:98.0%
小鼠糖原0酸化酶同工酶elisa試劑盒
小鼠糖原0酸化
奧多諾甙 H HPLC≥98% 5mg 小鼠血管**素1(ANG-1)ELISA試劑盒 ,英文名: ANG-1 ELISA Kit
奧洛波爾 HPLC≥98% 5mg 小鼠鈣通道阻滯劑(CCB)ELISA檢測(cè)試劑盒Mousecalciumchannelblockers,CCBELISAKit 96T/48T
奧沙京 HPLC≥98% 5mg 人肌酸激酶同工酶MB(CK-MB)試劑盒 Human Creatine Kinase MB isoenzyme,CK-MB ELISA Kit
白曼陀羅素 HPLC≥98% 5mg RatClusterofdiffereiation30,CD30ELISAKit大鼠CD30分子(CD30)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
白桑八醇 HPLC≥98% 5mg 10倍酵母菌SD-HIS培養(yǎng)基100毫升
半齒澤蘭素色烯 HPLC≥98% 5mg MousecoagulationfactorⅧrelatedaigen,FⅧ-AgELISA試劑盒小鼠凝血因子Ⅷ相關(guān)抗原(FⅧ-Ag)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
半翅鹽膚木內(nèi)酯 HPLC≥98% 5mg 小鼠血管**素1(ANG-1)ELISA 試劑盒
北升麻寧 HPLC≥98% 5mg Rat complexed prostate specific aigen (CPSA) ELISA Kit 大鼠復(fù)合前列腺特異性抗原(CPSA)ELISA試劑盒
苯甲酰胺 HPLC≥98% 5mg Humanparaoxonase,PONELISAKit 人酶(PON)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
吡喃葡糖苷 HPLC≥98% 5mg Aflatoxin,AFTELISA試劑盒霉(AFT)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
牛種布魯氏菌單重?zé)晒釶CR檢測(cè)試劑盒48Zolmitriptan1392647佐米曲普坦
豬種布魯氏菌單重?zé)晒釶CR檢測(cè)試劑盒48Homopiperazine56高哌嗪
犬種布魯氏菌單重?zé)晒釶CR檢測(cè)試劑盒48Olopatadine 14626鹽酸奧洛他定
弗朗西斯土拉菌單重?zé)晒釶CR檢測(cè)試劑盒48Tenofovir14712泰諾福韋
A172細(xì)胞炭疽芽胞桿菌單重?zé)晒釶CR檢測(cè)試劑盒48Naftopidil di571498鹽酸萘哌地爾
我們的細(xì)胞株來(lái)源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等,A172細(xì)胞購(gòu)買(mǎi)到貨后,由我們實(shí)驗(yàn)室擴(kuò)增、凍存,凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過(guò)QC檢測(cè),100%進(jìn)口來(lái)源,100%保證5代以?xún)?nèi),活力>95%,無(wú)**、支原體污染。 細(xì)胞到達(dá)客戶(hù)手中,1個(gè)月內(nèi)出現(xiàn)任何問(wèn)題,導(dǎo)致細(xì)胞在凍存前死亡,我們公司都可以免費(fèi)再向客戶(hù)提供一次。產(chǎn)品僅用于科學(xué)研究