咨詢電話:18117197628
培養(yǎng)操作步驟 :
1.用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時;
4.將經(jīng)過計數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片完全浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時,將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及細(xì)胞化學(xué)檢測。
產(chǎn)品名稱 |
RWPE-1細(xì)胞 |
規(guī)格 |
T25 |
貨號 |
BH-0109508 |
產(chǎn)品詳細(xì) 正常前列腺上皮細(xì)胞;RWPE-1
形態(tài)特性 上皮細(xì)胞
生長特性 貼壁生長
特征特性 腫瘤抑制基因: p53 + [PubMed: 9214605] pRB + [PubMed: 9214605] 一位正常男性前列腺組織切片的周圍區(qū)域的上皮細(xì)胞用單拷貝的人瘤病毒的18(HPV-18)進行轉(zhuǎn)化,建立了RWPE-1 (ATCC CRL-11609) 細(xì)胞株 [PubMed: 9214605]. 在三維Matrigel培養(yǎng)時,在雄作用下,RWPE-1細(xì)胞形成腺胞并向培養(yǎng)基中分泌PSA。[PubMed: 11170142]. 當(dāng)與Matrigel或基質(zhì)細(xì)胞混合注射雄性裸鼠時,RWPE-1細(xì)胞也能形
培養(yǎng)條件 這株細(xì)胞的基本培養(yǎng)基作為Invitrogen (GIBCO)提供的kit的部分: 角化細(xì)胞無血清培養(yǎng)基K-SFM,kit目錄號17005-042。隨kit提供這株細(xì)胞生長所需的兩種添加劑(牛垂體提取物BPE及人重組表皮生長因子EGF)。 配制完全生長培養(yǎng)基,需添加以下成分: 0.05 mg/ml BPE – 隨K-SFM提供 5 ng/ml EGF -隨K-SFM提供。 注意: 不要過濾完全培養(yǎng)基。 氣相: 空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度: 37.0°C。或者KM培養(yǎng)基
傳代方法 1:3傳代,2-3天傳一代。
實驗材料:
1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶;8ml小牛血清(FCS) 1瓶;100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶;PBS(-)1 瓶
2. 100ml燒杯2個; 人皮膚成纖維細(xì)胞,CCC-HSF-1細(xì)胞
3、50ml離心筒2個
4、培養(yǎng)皿1個,細(xì)胞培養(yǎng)瓶1個
5、1ml ,200μl移液器各1支;槍頭盒2個;無菌玻璃攪拌棒1個
6、細(xì)胞計數(shù)板1塊;
7、滅好菌的鑷子1把,剪刀1把;
8、酒精燈1臺;
培養(yǎng)細(xì)胞凍存方案:
以下實驗方案介紹了培養(yǎng)細(xì)胞凍存的一般流程。詳細(xì)的實驗方案,必須參閱針對具體細(xì)胞的產(chǎn)品說明書。
1.配制凍存培養(yǎng)基,于2°C至8°C下儲存,直至使用。請注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細(xì)胞系。
2.凍存貼壁細(xì)胞時,利用傳代時所用方法輕柔地使細(xì)胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來。用該細(xì)胞所需完全培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞。
3.采用血球計數(shù)器、細(xì)胞計數(shù)儀按照臺盼藍拒染法或者使用自動細(xì)胞計數(shù)儀測定總細(xì)胞數(shù)和活細(xì)胞百分比。根據(jù)所需活細(xì)胞密度,計算凍存培養(yǎng)基需要量。
4.以大約100-200×g的離心力將細(xì)胞懸液離心5至10分鐘。在無菌條件下小心倒掉上清液,不要攪動細(xì)胞沉淀。
注:離心速度和時間取決于細(xì)胞種類。
5.用預(yù)冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞沉淀,將其調(diào)整至該細(xì)胞適合的活細(xì)胞密度。
6.將細(xì)胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時,應(yīng)不時輕輕混合細(xì)胞,使其保持均勻的細(xì)胞懸液狀態(tài)。
7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細(xì)胞,使溫度每分鐘大約降低 1°C?;蛘?,將裝有細(xì)胞的凍存管放入凍存盒中,然后將凍存盒置于-80°C條件下過夜。
實驗要點及說明 :
1.本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng),而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng),懸浮細(xì)胞可使用滴片法;
2.所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)玻璃**,并經(jīng)過鉻酸洗液處理;
3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時動作要輕;
4.如果需要更多生長狀態(tài)一致的細(xì)胞,可以使用較大的培養(yǎng)皿,但不宜過大,以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率;
5.如果細(xì)胞貼壁生長能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
收到如何處理:
1、首先,觀察培養(yǎng)瓶是否完好,培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象。若有,請拍照,并及時與技術(shù)支持聯(lián)系(所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù))。
2、用75%酒精擦拭細(xì)胞培養(yǎng)瓶表面,顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運輸問題,部分貼壁細(xì)胞會有少量從瓶壁脫落;先不要打開培養(yǎng)瓶蓋,將細(xì)胞置于細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2-4小時,以便穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
3、仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書,了解細(xì)胞相關(guān)信息,如貼壁特性(貼壁/懸?。?、細(xì)胞形態(tài)、所用基礎(chǔ)培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子、傳代比例、換液頻率等。
4、靜置完成后,取出細(xì)胞培養(yǎng)瓶,鏡檢、拍照,記錄細(xì)胞狀態(tài)(所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù));建議細(xì)胞傳代培養(yǎng)后,定期拍照、記錄細(xì)胞生長狀態(tài)。
5、貼壁細(xì)胞:若細(xì)胞生長密度超過80%,可正常傳代;若未超過80%,移除細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)基,預(yù)留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng),直至細(xì)胞密度達80%左右再進行傳代操作,瓶蓋可稍微擰松。
6、懸浮細(xì)胞:將細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)液體全部轉(zhuǎn)移至50ml無菌離心管內(nèi),1200rpm離心5min,離心后上清培養(yǎng)基可收集備用,管底細(xì)胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打、重懸。鏡檢時,若細(xì)胞密度超過80%,可將細(xì)胞懸液分至2個細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng),補加培養(yǎng)基至5ml;若細(xì)胞密度未超過80%,將細(xì)胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng),直至細(xì)胞密度達80%左右時再進行傳代操作。
小鼠前列腺特異性抗原elisa試劑盒
小鼠前列腺特異性抗原試劑盒 規(guī)格型號:96T/48T 小鼠前列腺特異性抗原試劑盒,規(guī)格型號:96T/48T,來源:elisa試劑盒(進口分裝),產(chǎn)品別名:小鼠前列腺特異性抗原試劑盒、小鼠前列腺特異性抗原elisa試劑盒
保存條件:2-8℃
保質(zhì)期:6個月。
Ginsenoyne K 中文名: 分子式:C17H24O3 度:%
小鼠前列腺特異性抗原(PSA)ELISA試劑盒 Gliclazide 21187-98-
銀線草醇 D HPLC≥98% 5mg 載玻片細(xì)胞BCL2蛋白表達熒光顯微鏡檢測試劑盒10/20
印度黃酮,優(yōu)咕噸酮 HPLC≥98% 5mg MouseHighmobilitygroupproteinB1,HMGB-1ELISAKit小鼠高遷移率族蛋白B1(HMGB-1)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
印楝素 HPLC≥98% 5mg 小鼠心肌營養(yǎng)素1(CT-1)ELISA試劑盒 ,英文名: CT-1 ELISA Kit
英西卡林 HPLC≥98% 5mg 小鼠肝脂酶(HL)ELISA檢測試劑盒Mousehepaticlipase,HLELISAKit 96T/48T
櫻花亭 HPLC≥98% 5mg 人花生四烯酸5脂氧合酶(ALOX5/LOG5)試劑盒 Human Arachidonate 5-lipoxygenase,ALOX5/LOG5 ELISA kit
櫻黃素 HPLC≥98% 5mg RatC-PeptideELISAKit大鼠C肽(C-Peptide)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
櫻桃甙;洋李甙 HPLC≥98% 5mg 20%Formalin固著液50毫升
幼枝含斷氧化馬錢子甙 HPLC≥98% 10mg MouseCXC-chemokineligand16,CXCL16ELISA試劑盒小鼠CXC趨化因子配體16(CXCL16)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
羽扇豆鹼 HPLC≥98% 5mg 小鼠心肌營養(yǎng)素1(CT1)ELISA試劑盒 ,英文名: CT1 ELISA Kit
RWPE-1細(xì)胞羽扇豆異黃酮 HPLC≥98% 5mg 兔子組織型纖溶酶原激活劑(t-PA)ELISA檢測試劑盒rabbitTissue-typePlasiminogenActilyse,t-PAELISAKit
96T/48T
喹諾酮快速檢測卡(膠體金法)Benzoin methyl ether35242安息香甲基醚
β-內(nèi)酰胺類快速檢測卡(膠體金法)Benzanthrone1982/5/3苯并蒽酮
β-內(nèi)酰胺酶快速檢測卡(膠體金法)L-(+)-Arginine749L-(+)-精氨酸
鏈霉素快速檢測卡(膠體金法)D-Aspartic acid17836D-天冬氨酸
四環(huán)素快速檢測卡(膠體金法)L-Ascorbic acid1L-抗壞血酸
我們的細(xì)胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等,購買RWPE-1細(xì)胞到貨后,由我們實驗室擴增、凍存,凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測,100%進口來源,100%保證5代以內(nèi),活力>95%,無**、支原體污染。 細(xì)胞到達客戶手中,1個月內(nèi)出現(xiàn)任何問題,導(dǎo)致細(xì)胞在凍存前死亡,我們公司都可以免費再向客戶提供一次。產(chǎn)品僅用于科學(xué)研究