產(chǎn)品詳細(xì) 乳腺導(dǎo)管癌細(xì)胞；BT474
形態(tài)特性 上皮樣；圓形、成團(tuán)
生長特性 貼壁生長
特征特性 該細(xì)胞系由LasfarguesE和CoutinhoWG建立，源于一名60歲患有浸潤性乳腺導(dǎo)管癌的白人女性的實體瘤。
培養(yǎng)條件 DMEM/F12+10%FBS(GIBCO)
傳代方法 1:2~1:3傳代；2~3天換液1次。
細(xì)胞生物學(xué)研究有以下幾個方面。產(chǎn)品僅用于科學(xué)研究
細(xì)胞生物學(xué)的研究內(nèi)容十分廣泛,主要包括。
①細(xì)胞核、染色體以及基因表達(dá)的研究。
②生物膜與細(xì)胞器的研究。
③細(xì)胞骨架體系的研究。
④細(xì)胞增殖及其調(diào)控。
⑤細(xì)胞分化及其調(diào)控。
⑥細(xì)胞的衰老與編程性死亡(凋亡)。
⑦細(xì)胞的起源與進(jìn)化。
⑧細(xì)胞工程。

實驗報告：
一、分離與培養(yǎng)：
    1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大??；
    2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
    3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織完全被消化；
    4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
    5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二、熒光鑒定：
    1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；
    2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
    3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；
    4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；
    5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
    6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

培養(yǎng)操作：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。天換液并 檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。      
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細(xì)胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。 
3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類；
1. 細(xì)胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，細(xì)胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數(shù)板計數(shù)。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細(xì)胞，根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO，輕輕混勻，DMSO 終濃度為 10%，細(xì)胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細(xì)胞懸液，注意凍 存管做好標(biāo)識。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱，2 個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
小鼠凝血因子X(mouse FX)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進(jìn)口分裝  Menthyl-5-(4-amino-2-oxo-2H-pyrimidin-1-yl)-[1,3]oxathiolane-2-carboxylic acid  147027-10-9  中文名：  分子式：C18H27N3O4S  度：98.0%  關(guān)鍵詞： 

小鼠凝血因子X   英文名稱：   blood coagulation factor X   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫
異海松烯,二醇 HPLC≥98% 5mg 人紅細(xì)胞原卟啉(EP)試劑盒 Human erythrocyte protoporphyrin,EP ELISA Kit

貝殼杉烯,,三醇 HPLC≥98% 5mg Ratcross-linkedC-telopeptidesofTypeⅠcollagen,CⅠCPELISAKit大鼠Ⅰ型前膠原C末端肽(CⅠCP)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

羥基漿果赤霉素 III HPLC≥98% 5mg 20毫升玻璃勻漿器1個

甲氧基羰基beta咔啉 HPLC≥98% 5mg MouseCyclin-D3ELISA試劑盒小鼠細(xì)胞周期素D3(Cyclin-D3)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

脫羧氧代茶酸 HPLC≥98% 5mg 小鼠硝基酪酸()ELISA試劑盒 ，英文名：  ELISA Kit

乙?；淙f壽局素 A HPLC≥98% 5mg 兔半胱氨酸蛋白酶抑制劑/胱抑素C(Cys-C)ELISA檢測試劑盒RabbitCystatinC,Cys-CELISAKit 96T/48T

,貝殼杉烷二醇 HPLC≥98% 5mg 牛脂多糖結(jié)合蛋白(LBP)試劑盒 Bovine lipopolysaccharide binding protein,LBP ELISA kit

,,三羥基齊墩果烯酸 HPLC≥98% 5mg 英文名稱HumanBrainderivedneuroophicfacorELISAKit人腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(BDNF)ELISAKit規(guī)格：96T/48T

,,三鄰甲基鞣花酸 HPLC≥98% 5mg 蛋白樣品賴氨酸層析法去內(nèi)試劑盒20

,脫氫維酮 HPLC≥98% 5mg Ratmyelinbasicprotein,MBPELISA試劑盒大鼠髓0脂堿性蛋白(MBP)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
克倫特羅 ELISA試劑盒96TN-(2-Methoxyphenyl)acetamide9362-乙酰

孔雀石綠 ELISA試劑盒96TN-(2-Hydroxyethyl)-(4-nitrophenyl)propylamine16349

泰樂菌素 ELISA試劑盒96TN-(2,6-Diphenylmethyl)-piperazine acetylamine52941

硝基咪唑 ELISA試劑盒96TN-(2,6-Dimethylphenyl)-piperidinecarboxamide2726

新霉素 ELISA試劑盒96TN-(2,3-Epoxypropyl)phthalimide1615967
細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點：
1.研究的對象是活細(xì)胞
在實驗過程中，根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力，并可長時間監(jiān)控、檢測甚至定量評估一部分活細(xì)胞的情況，包括活細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動等。
2.研究條件可以人為控制
pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件，可以根據(jù)實際進(jìn)行人為的控制，同時，可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進(jìn)行實驗觀察，這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下。
3.研究的樣本可以達(dá)到比較均一性
通過細(xì)胞培養(yǎng)一定代數(shù)后，所得到的細(xì)胞系則可以達(dá)到均一性而屬于同一類型的細(xì)胞，需要時，可采用克隆化等方法使細(xì)胞達(dá)到純化。
4.研究內(nèi)容便于觀察、檢測和記錄
采用各種研究技術(shù)：如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、組織化學(xué)、原位雜交、同位素標(biāo)記等各種儀器設(shè)備  記錄方式可采用攝影照片、縮時電影、電視等多種手段。
5BT474細(xì)胞.研究的范圍比較廣泛
應(yīng)用的學(xué)科領(lǐng)域較為寬廣，如細(xì)胞學(xué)、腫瘤學(xué)、生物化學(xué)、遺傳學(xué)、分子生物學(xué)等； 
適用的對象范圍廣，從低等動物到高等動物，一種動物的不同年齡階段以及不同組織，都可進(jìn)行有針對性的研究。
6.研究的費用相對較經(jīng)濟(jì)
可提供大量、同一時期、重復(fù)性好的、生物學(xué)性狀相似的實驗對象。