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細胞培養(yǎng)的優(yōu)點:
1.研究的對象是活細胞
在實驗過程中,根據(jù)要求可始終保持細胞活力,并可長時間監(jiān)控、檢測甚至定量評估一部分活細胞的情況,包括活細胞的形態(tài)、結構、生命活動等。
2.研究條件可以人為控制
pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學的條件,可以根據(jù)實際進行人為的控制,同時,可以施加化學、物理、生物等因素作為條件而進行實驗觀察,這些因素同樣可以處于嚴格控制之下。
3.研究的樣本可以達到比較均一性
通過細胞培養(yǎng)一定代數(shù)后,所得到的細胞系則可以達到均一性而屬于同一類型的細胞,需要時,可采用克隆化等方法使細胞達到純化。
4.研究內容便于觀察、檢測和記錄
采用各種研究技術:如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細胞術、激光共焦顯微鏡、組織化學、原位雜交、同位素標記等各種儀器設備 記錄方式可采用攝影照片、縮時電影、電視等多種手段。
5.研究的范圍比較廣泛
應用的學科領域較為寬廣,如細胞學、腫瘤學、生物化學、遺傳學、分子生物學等;
適用的對象范圍廣,從低等動物到高等動物,一種動物的不同年齡階段以及不同組織,都可進行有針對性的研究。
6.研究的費用相對較經濟
可提供大量、同一時期、重復性好的、生物學性狀相似的實驗對象。
產品名稱 |
Hs746T細胞 |
規(guī)格 |
T25 |
貨號 |
BH-0109573 |
產品詳細 胃癌細胞;Hs746T
形態(tài)特性 上皮細胞樣
生長特性 貼壁生長
特征特性 HS-746T細胞1973年建系(Naval bioscienCA-s laboratory)。該細胞系的細胞大小,形狀及核狀態(tài)均會在培養(yǎng)過程中發(fā)生變化。由于細胞的惡性化,染色多為亞三倍體(46%)。
培養(yǎng)條件 DMEM-H: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose) 10%FBS (GIBCO)
傳代方法 1:3傳代,2-3天傳一代
細胞生物學研究有以下幾個方面。產品僅用于科學研究
細胞生物學的研究內容十分廣泛,主要包括。
①細胞核、染色體以及基因表達的研究。
②生物膜與細胞器的研究。
③細胞骨架體系的研究。
④細胞增殖及其調控。
⑤細胞分化及其調控。
⑥細胞的衰老與編程性死亡(凋亡)。
⑦細胞的起源與進化。
⑧細胞工程。
實驗報告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,將組織剪成1mm3左右大??;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織完全被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、熒光鑒定:
1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;
2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;
5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
培養(yǎng)操作:
1)復蘇細胞:將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,棄去上清液,補 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜(或將 細胞懸液加入 10cm 皿中,加入約 8ml 培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。天換液并 檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達 80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM
EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分 變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘,棄去上清液,補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細胞懸液按 1:2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3)細胞凍存:待細胞生長狀態(tài)良好時,可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類;
1. 細胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后,PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶,細胞變圓 脫 落后,加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計數(shù)板計數(shù)。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細胞,根據(jù)細胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO,輕輕混勻,DMSO 終濃度為 10%,細胞密度不低于1x106/ml,每支凍存管凍存 1ml 細胞懸液,注意凍 存管做好標識。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80 度冰箱,2 個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
小鼠巨嗜細胞炎性蛋白 -1β(mouse MIP-1β) 作用: ELISA 規(guī)格:
96T 美國 R&D
Dyphylline 中文名:二羥丙茶堿 分子式:C10H14N4O4
小鼠巨嗜細胞炎性蛋白 -1 g (mouse MIP-1 g ) 作用: ELISA 規(guī)格: 96T 美國 R&D Dyphylline 中文名:二羥丙茶堿 分子式:C10H14N4O4 度:98.0%
小鼠巨嗜細胞炎性蛋白 -1 a (mouse MIP-1 a /CC
表去氫茯苓酸 HPLC≥95% 20mg 調料D-葡萄糖酸鹽比色法定量檢測試劑盒20
多孔菌酸C HPLC≥95% 20mg Ratphospho-exacellularsignal-regulatedkinase,pERKELISA試劑盒大鼠0酸化細胞外信號調節(jié)激酶(pERK)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
二氫齒孔酸 HPLC≥95% 20mg 小鼠維生素D結合蛋白(DBP)ELISA試劑盒 ,英文名: DBP ELISA Kit
α羥基豬苓酸C HPLC≥95% 20mg 兔超敏C反應蛋白(hs-CRP)ELISA檢測試劑盒RabbithighsensitivityC-ReactiveProtein,hs-CRPELISAKit 96T/48T
表去氫土莫酸 HPLC≥95% 20mg 牛銅鋅-過氧化物岐化酶(Cu/Zn-SOD)試劑盒 Bovine Cu/Zn-Superoxide Dismase,Cu/Zn-SOD ELISA Kit
山橘脂酸 HPLC≥95% 20mg 英文名稱HumanHaptoglobinELISAKIT人結合珠蛋白(Hpt)規(guī)格:96T/48T
地芰普內酯 HPLC≥95% 20mg 調料D-乳酸比色法定量檢測試劑盒20
筋骨草素F HPLC≥95% 20mg Ratphospho-inhibitorysubunitofNF-κBα,pIKBαELISA試劑盒大鼠0酸化核因子κB抑制蛋白α(pIKBα)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
筋骨草素H HPLC≥95% 20mg 小鼠維生素D3(VD3)ELISA試劑盒 ,英文名: VD3 ELISA Kit
筋骨草素G HPLC≥95% 20mg 小鼠嗜酸粒細胞趨化因子(ECF)ELISA檢測試劑盒Mouseeosinophilchemotacticfactor,ECFELISAKit
96T/48T
谷胱甘肽還原酶 GR
0U17-Ethylendioxyandrosta,4-dien-one2398317-亞乙二氧基-雄,4-二烯-酮
果膠酶Y3 Hs746T細胞 0mg3β-Acetoxyα-androstan7β-ol03-乙?;?雄烷二醇
過氧化氫酶 Catalase 1g 17β-Benzoyloxy-androsta,4-dien-one141617β-苯甲酰氧基-雄甾,4-二烯-酮
還原型谷胱甘肽(GSH) 1g/5g 5α-Androstaneβ,17β-diol575α-雄烷二醇
己糖激酶(HK) 25mg3-O-Methyl-methoxymaxterone92283-O-甲基-甲氧基α-雄烷二醇