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我們的細(xì)胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等,購買到貨后,由我們實(shí)驗(yàn)室擴(kuò)增、凍存,凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測,100%進(jìn)口來源,100%保證5代以內(nèi),活力>95%,無**、支原體污染。 細(xì)胞到達(dá)客戶手中,1個(gè)月內(nèi)出現(xiàn)任何問題,導(dǎo)致細(xì)胞在凍存前死亡,我們公司都可以免費(fèi)再向客戶提供一次。產(chǎn)品僅用于科學(xué)研究
產(chǎn)品名稱 |
Hela細(xì)胞 |
規(guī)格 |
T25 |
貨號(hào) |
BH-0109617 |
產(chǎn)品詳細(xì) 宮頸癌細(xì)胞;Hela
形態(tài)特性 上皮樣
生長特性 貼壁生長
特征特性 HeLa是**個(gè)來自人體組織經(jīng)連續(xù)培養(yǎng)獲得的非整倍體上皮樣細(xì)胞系,它由GeyGO等在1951年從31歲女性黑人的宮頸癌組織建立。經(jīng)原始組織切片重新觀察,Jones等將其診斷為腺癌。已知該細(xì)胞系含有人狀瘤病毒HPV18序列,需在2級(jí)生物**防護(hù)臺(tái)操作。該細(xì)胞角蛋白陽性,p53表達(dá)量較低,但表達(dá)正常水平的pRB(視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤抑制因子)。
培養(yǎng)條件 RPMI1640+10%FBS
傳代方法 1:3傳代,2-3天換液一次
實(shí)驗(yàn)材料:
1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶;8ml小牛血清(FCS) 1瓶;100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶;PBS(-)1 瓶
2. 100ml燒杯2個(gè); 人皮膚成纖維細(xì)胞,CCC-HSF-1細(xì)胞
3、50ml離心筒2個(gè)
4、培養(yǎng)皿1個(gè),細(xì)胞培養(yǎng)瓶1個(gè)
5、1ml ,200μl移液器各1支;槍頭盒2個(gè);無菌玻璃攪拌棒1個(gè)
6、細(xì)胞計(jì)數(shù)板1塊;
7、滅好菌的鑷子1把,剪刀1把;
8、酒精燈1臺(tái);
培養(yǎng)細(xì)胞凍存方案:
以下實(shí)驗(yàn)方案介紹了培養(yǎng)細(xì)胞凍存的一般流程。詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)方案,必須參閱針對(duì)具體細(xì)胞的產(chǎn)品說明書。
1.配制凍存培養(yǎng)基,于2°C至8°C下儲(chǔ)存,直至使用。請(qǐng)注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細(xì)胞系。
2.凍存貼壁細(xì)胞時(shí),利用傳代時(shí)所用方法輕柔地使細(xì)胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來。用該細(xì)胞所需完全培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞。
3.采用血球計(jì)數(shù)器、細(xì)胞計(jì)數(shù)儀按照臺(tái)盼藍(lán)拒染法或者使用自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀測定總細(xì)胞數(shù)和活細(xì)胞百分比。根據(jù)所需活細(xì)胞密度,計(jì)算凍存培養(yǎng)基需要量。
4.以大約100-200×g的離心力將細(xì)胞懸液離心5至10分鐘。在無菌條件下小心倒掉上清液,不要攪動(dòng)細(xì)胞沉淀。
注:離心速度和時(shí)間取決于細(xì)胞種類。
5.用預(yù)冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞沉淀,將其調(diào)整至該細(xì)胞適合的活細(xì)胞密度。
6.將細(xì)胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時(shí),應(yīng)不時(shí)輕輕混合細(xì)胞,使其保持均勻的細(xì)胞懸液狀態(tài)。
7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細(xì)胞,使溫度每分鐘大約降低 1°C。或者,將裝有細(xì)胞的凍存管放入凍存盒中,然后將凍存盒置于-80°C條件下過夜。
培養(yǎng)操作步驟 :
1.用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí);
4.將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片完全浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及細(xì)胞化學(xué)檢測。
實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說明 :
1.本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng),而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng),懸浮細(xì)胞可使用滴片法;
2.所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)玻璃**,并經(jīng)過鉻酸洗液處理;
3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕;
4.如果需要更多生長狀態(tài)一致的細(xì)胞,可以使用較大的培養(yǎng)皿,但不宜過大,以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率;
5.如果細(xì)胞貼壁生長能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
小鼠固 英文名稱: Aldosterone 規(guī)格:
48T/96T 英文縮寫: ALD Dexamethasone 21-phosphate di salt 中文名:地塞米松磷酸鈉 分子式:C22H30FO8P 度:98.0%
小鼠骨粘連蛋白(ON)ELISA試劑盒 Desloratadine 中文名:脫羧氯雷他定 分子式:C19H19ClN2 度:98.0%
小鼠骨粘連蛋白(ON)ELISAKit Mitiglinide calcium 中文名:米
鹽酸甲氯芬酯(標(biāo)準(zhǔn)品)
Meclofenoxate HCl 質(zhì)量規(guī)格:含量測定 小鼠調(diào)節(jié)激活正常T-細(xì)胞表達(dá)分泌因子(RAES)ELISA試劑盒 ,英文名: RAES ELISA Kit
醋酸甲地孕酮 Megestrol Acetate 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR,USP31 豚鼠超氧化物歧化酶(SOD)ELISA檢測試劑盒GuineaPigSuperOxidaseDimase,SODELISAKit 96T/48T
醋酸甲地孕酮(標(biāo)準(zhǔn)品) Megestrol Acetate 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品 牛葡萄糖60酸脫氫酶(G6PD)試劑盒 Bovine Glucose-6-Phosphate Dehydrogenase,G6PD ELISA Kit
美拉諾坦II;MTII Melanotan ⅡAcetate 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR 英文名稱HumanMaixmetalloproteinase-10—MMP-10ELISAkit人基質(zhì)金屬蛋白酶10(MMP-10)規(guī)格:96T/48T
美洛昔康 Meloxicam 質(zhì)量規(guī)格:>99% 動(dòng)物全血線粒體粗提分離試劑盒10
美洛昔康(標(biāo)準(zhǔn)品) Meloxicam 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品 Ratprostatespecificaigen,PSAELISA試劑盒大鼠前列腺特異性抗原(PSA)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
鹽酸美金剛胺 Memantine HCl 質(zhì)量規(guī)格:>99% 小鼠天門冬酸基轉(zhuǎn)移酶(AST)ELISA試劑盒 ,英文名: AST ELISA Kit
鹽酸美金剛(標(biāo)準(zhǔn)品) Memantine 質(zhì)量規(guī)格:含量測定 小鼠白介素17(IL-17)ELISA檢測試劑盒MouseIerleukin17,IL-17ELISAKit 96T/48T
甲氨蝶呤 Methotrexate 質(zhì)量規(guī)格:>99%,BR 人骨形成蛋白4(BMP4)試劑盒 Human BMP4 ELISA Kit
甲氨蝶呤(標(biāo)準(zhǔn)品)
Methotrexate 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>99%,標(biāo)準(zhǔn)品 RatFcoagulationfactorⅨ,FⅨELISAKiatFcoagulationfactorⅨ,FⅨELISAKit大鼠凝血因子IX(FIX)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
超廣譜β-內(nèi)酰胺酶(ESBL)大腸埃希菌單重?zé)晒釶CR檢測試劑盒48Nandrolone4342諾龍
肺炎支原體/肺炎衣原體雙重?zé)晒釶CR檢測試劑盒48Guaiacol glycidyl ether224
銅綠假單胞菌/肺炎克雷伯菌雙重?zé)晒釶CR檢測試劑盒48N-(2,6-Diphenylmethyl)-piperazine acetylamine52941
A組鏈球菌/金黃色葡萄球菌雙重?zé)晒釶CR檢測試劑盒482-[(Acetylthio)methyl]-phenylpropionic acid9128
流感嗜血桿菌/肺炎鏈球菌雙重?zé)晒釶CR檢測試劑盒48Cinnamyl 3-aminobut-enoate1138987
收到如何處理:
1、首先,觀察培養(yǎng)瓶是否完好,培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象。若有,請(qǐng)拍照,并及時(shí)與技術(shù)支持聯(lián)系(所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù))。
2、用75%酒精擦拭細(xì)胞培養(yǎng)瓶表面,顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問題,部分貼壁細(xì)胞會(huì)有少量從瓶壁脫落;先不要打開培養(yǎng)瓶蓋,將細(xì)胞置于細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2-4小時(shí),以便穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
3、仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書,了解細(xì)胞相關(guān)信息,如貼壁特性(貼壁/懸?。?、細(xì)胞形態(tài)、所用基礎(chǔ)培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子、傳代比例、換液頻率等。
4、靜置完成后,取出細(xì)胞培養(yǎng)瓶,鏡檢、拍照,記錄細(xì)胞狀態(tài)(所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù));建議細(xì)胞傳代培養(yǎng)后,定期拍照、記錄細(xì)胞生長狀態(tài)。
5、貼壁細(xì)胞:若細(xì)胞生長密度超過80%,可正常傳代;若未超過80%,移除細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)基,預(yù)留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng),直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右再進(jìn)行傳代操作,瓶蓋可稍微擰松。
6、Hela細(xì)胞懸浮細(xì)胞:將細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)液體全部轉(zhuǎn)移至50ml無菌離心管內(nèi),1200rpm離心5min,離心后上清培養(yǎng)基可收集備用,管底細(xì)胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打、重懸。鏡檢時(shí),若細(xì)胞密度超過80%,可將細(xì)胞懸液分至2個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng),補(bǔ)加培養(yǎng)基至5ml;若細(xì)胞密度未超過80%,將細(xì)胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng),直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右時(shí)再進(jìn)行傳代操作。