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培養(yǎng)操作步驟 :
1.用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí);
4.將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片完全浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及細(xì)胞化學(xué)檢測。
產(chǎn)品名稱 |
GH3細(xì)胞 |
規(guī)格 |
T25 |
貨號 |
BH-0109709 |
產(chǎn)品詳細(xì) 大鼠垂體瘤細(xì)胞;GH3
形態(tài)特性 上皮樣
生長特性 疏松貼壁,有漂浮的細(xì)胞簇
特征特性 GH3細(xì)胞系是由TashjianAH等在1965年7月從一只7月齡的雌性Wistar-Furth大鼠的垂體腫瘤中分離建立的。GH3細(xì)胞系不是直接來源于GH1細(xì)胞系的克隆,而是從原代培養(yǎng)的GH1細(xì)胞在大鼠身上傳代兩次形成的腫瘤中建立的。上皮樣的GH3細(xì)胞比GH1分泌更高水平的生長,也可產(chǎn)生催乳素。對調(diào)控GH3細(xì)胞分泌蛋白類的研究表明,氫化可的松可以刺激生長的分泌、抑制催乳素的產(chǎn)生。
培養(yǎng)條件 RPMI1640+10%FBS
傳代方法 1:2傳代
實(shí)驗(yàn)材料:
1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶;8ml小牛血清(FCS) 1瓶;100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶;PBS(-)1 瓶
2. 100ml燒杯2個(gè); 人皮膚成纖維細(xì)胞,CCC-HSF-1細(xì)胞
3、50ml離心筒2個(gè)
4、培養(yǎng)皿1個(gè),細(xì)胞培養(yǎng)瓶1個(gè)
5、1ml ,200μl移液器各1支;槍頭盒2個(gè);無菌玻璃攪拌棒1個(gè)
6、細(xì)胞計(jì)數(shù)板1塊;
7、滅好菌的鑷子1把,剪刀1把;
8、酒精燈1臺;
培養(yǎng)細(xì)胞凍存方案:
以下實(shí)驗(yàn)方案介紹了培養(yǎng)細(xì)胞凍存的一般流程。詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)方案,必須參閱針對具體細(xì)胞的產(chǎn)品說明書。
1.配制凍存培養(yǎng)基,于2°C至8°C下儲存,直至使用。請注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細(xì)胞系。
2.凍存貼壁細(xì)胞時(shí),利用傳代時(shí)所用方法輕柔地使細(xì)胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來。用該細(xì)胞所需完全培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞。
3.采用血球計(jì)數(shù)器、細(xì)胞計(jì)數(shù)儀按照臺盼藍(lán)拒染法或者使用自動細(xì)胞計(jì)數(shù)儀測定總細(xì)胞數(shù)和活細(xì)胞百分比。根據(jù)所需活細(xì)胞密度,計(jì)算凍存培養(yǎng)基需要量。
4.以大約100-200×g的離心力將細(xì)胞懸液離心5至10分鐘。在無菌條件下小心倒掉上清液,不要攪動細(xì)胞沉淀。
注:離心速度和時(shí)間取決于細(xì)胞種類。
5.用預(yù)冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞沉淀,將其調(diào)整至該細(xì)胞適合的活細(xì)胞密度。
6.將細(xì)胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時(shí),應(yīng)不時(shí)輕輕混合細(xì)胞,使其保持均勻的細(xì)胞懸液狀態(tài)。
7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細(xì)胞,使溫度每分鐘大約降低 1°C?;蛘撸瑢⒀b有細(xì)胞的凍存管放入凍存盒中,然后將凍存盒置于-80°C條件下過夜。
實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說明 :
1.本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng),而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng),懸浮細(xì)胞可使用滴片法;
2.所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)玻璃**,并經(jīng)過鉻酸洗液處理;
3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時(shí)動作要輕;
4.如果需要更多生長狀態(tài)一致的細(xì)胞,可以使用較大的培養(yǎng)皿,但不宜過大,以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率;
5.如果細(xì)胞貼壁生長能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
收到如何處理:
1、首先,觀察培養(yǎng)瓶是否完好,培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象。若有,請拍照,并及時(shí)與技術(shù)支持聯(lián)系(所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù))。
2、用75%酒精擦拭細(xì)胞培養(yǎng)瓶表面,顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問題,部分貼壁細(xì)胞會有少量從瓶壁脫落;先不要打開培養(yǎng)瓶蓋,將細(xì)胞置于細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2-4小時(shí),以便穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
3、仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書,了解細(xì)胞相關(guān)信息,如貼壁特性(貼壁/懸?。⒓?xì)胞形態(tài)、所用基礎(chǔ)培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子、傳代比例、換液頻率等。
4、靜置完成后,取出細(xì)胞培養(yǎng)瓶,鏡檢、拍照,記錄細(xì)胞狀態(tài)(所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù));建議細(xì)胞傳代培養(yǎng)后,定期拍照、記錄細(xì)胞生長狀態(tài)。
5、貼壁細(xì)胞:若細(xì)胞生長密度超過80%,可正常傳代;若未超過80%,移除細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)基,預(yù)留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng),直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右再進(jìn)行傳代操作,瓶蓋可稍微擰松。
6、懸浮細(xì)胞:將細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)液體全部轉(zhuǎn)移至50ml無菌離心管內(nèi),1200rpm離心5min,離心后上清培養(yǎng)基可收集備用,管底細(xì)胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打、重懸。鏡檢時(shí),若細(xì)胞密度超過80%,可將細(xì)胞懸液分至2個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng),補(bǔ)加培養(yǎng)基至5ml;若細(xì)胞密度未超過80%,將細(xì)胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng),直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右時(shí)再進(jìn)行傳代操作。
小鼠β內(nèi)啡肽(β-EP)ELISA試劑盒
Bisphenol P 2167-51-3 中文名:雙酚P
分子式:C24H26O2
小鼠β內(nèi)啡肽(β-EP)ELISAKit Formestane 566-48-3 中文名:福美司坦 分子式:C19H26O3
小鼠β內(nèi)啡肽
英文名稱:
Beta-Endorphin 規(guī)格: 48T/96T 英文縮寫:
β-EP Meclizine 1104-22-9
中文名:鹽酸美克洛嗪
利拉萘酯(標(biāo)準(zhǔn)品)
Liranaftate 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品 RatInhibin,INH-AELISAKit大鼠抑制素A(INH-A)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
萘普生鈉 Naproxen 質(zhì)量規(guī)格:>99%,USP32,BR BrdU標(biāo)記法載玻片細(xì)胞繁殖NBT顯色檢測試劑盒10/20
萘普生鈉(標(biāo)準(zhǔn)品) Naproxen 質(zhì)量規(guī)格:含量測定 Mousekeratinocyteaocrinefactor/Amphiregulin,KAF/ARELISA試劑盒小鼠角化細(xì)胞因子(KAF)/雙調(diào)蛋白(AR)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
齊多夫定 Zidovudine 質(zhì)量規(guī)格:>98%,USP34,BR,可用于細(xì)胞培養(yǎng) 小鼠上皮中性粒細(xì)胞活化肽78(ENA-78/CXCL5)ELISA試劑盒 ,英文名: ENA-78/CXCL5 ELISA Kit
齊多夫定(標(biāo)準(zhǔn)品) Zidovudine 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品 小鼠基質(zhì)金屬蛋白酶7(MMP-7)ELISA檢測試劑盒Mousemaixmetalloproteinase7,MMP-7ELISAkit 96T/48T
尼可地爾 Nicorandil 質(zhì)量規(guī)格:>98.5(C8H9N3O4干品),BR,可用于細(xì)胞培養(yǎng) 人甘膽酸(CG)試劑盒 Human cholyglycine,CG ELISA Kit
尼可地爾(標(biāo)準(zhǔn)品) Nicorandil 質(zhì)量規(guī)格:HPLC法含量測定 RatinhibitorysubunitofNF-κBα,IKBαELISAKit大鼠核因子κB抑制蛋白α(IKBα)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
煙酸 Nicotinic acid 質(zhì)量規(guī)格:>99%,BR,可用于細(xì)胞培養(yǎng) BrdU標(biāo)記法載玻片細(xì)胞繁殖熒光顯微鏡檢測試劑盒10/20
利福平;利發(fā)霉素 Rifampicin 質(zhì)量規(guī)格:≥97%,BR,可用于細(xì)胞培養(yǎng) Mousekeyholelimpethemocyanin,KLHELISA試劑盒小鼠鑰孔蟲戚血藍(lán)蛋白(KLH)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
利福平(標(biāo)準(zhǔn)品)
Rifampicin 質(zhì)量規(guī)格:>98%,標(biāo)準(zhǔn)品 小鼠山梨醇脫氫酶(SDH)ELISA試劑盒 ,英文名: SDH ELISA Kit
M13通用引物
ul4,4'-Bis(2-benzoxazolyl)stilbene153354,4'-雙(2-苯并惡唑基)芪
pRT-T載體試劑盒次 4,4'-Biphenyldicarboxylic acid784,4'-二甲酸
BL21(DE3)化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞 ×0ul 4,4'-Biphenol9284,4'-酚
DH5α化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞 ×0μl 4-(Phenylthio)benzyl alcohol63176
JM9化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞 ×0μl 4-(N-Methyl)-aminoantipyrine5198
GH3細(xì)胞我們的細(xì)胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等,購買到貨后,由我們實(shí)驗(yàn)室擴(kuò)增、凍存,凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測,100%進(jìn)口來源,100%保證5代以內(nèi),活力>95%,無**、支原體污染。 細(xì)胞到達(dá)客戶手中,1個(gè)月內(nèi)出現(xiàn)任何問題,導(dǎo)致細(xì)胞在凍存前死亡,我們公司都可以免費(fèi)再向客戶提供一次。產(chǎn)品僅用于科學(xué)研究