實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說明 ：
1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法； 
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)玻璃**，并經(jīng)過鉻酸洗液處理； 
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時(shí)動作要輕； 
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率； 
5．如果細(xì)胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

產(chǎn)品詳細(xì) 非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞
形態(tài)特性 上皮樣
生長特性 貼壁生長
特征特性 該細(xì)胞源于一位51歲患有非小細(xì)胞肺癌黑人男性患者的**前的腫瘤組織，表達(dá)CS-myc、L-myc、v-src、v-abl、v-erb B、CS-raf 1、Ha-ras、Ki-ras、N-ras RNAs；該細(xì)胞攜帶K-ras 12突變；p53基因246位密碼子突變ATC→ATG；表達(dá)PDGF A和B鏈的異源mRNA；表達(dá)TGFα、TGFβ和EGFR；角蛋白 5、8和18陽性，波形蛋白陽性，神經(jīng)絲蛋白陰性，多巴脫氫酶陰性；據(jù)報(bào)道，在軟瓊脂中該細(xì)胞形成克隆的效率為9.7%。
培養(yǎng)條件 RPMI1640+10%FBS
傳代方法 1:3傳代；3~4天1次。
我們的細(xì)胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購買到貨后，由我們實(shí)驗(yàn)室擴(kuò)增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測，100%進(jìn)口來源，100%保證5代以內(nèi)，活力>95%，無**、支原體污染。 細(xì)胞到達(dá)客戶手中，1個(gè)月內(nèi)出現(xiàn)任何問題，導(dǎo)致細(xì)胞在凍存前死亡，我們公司都可以免費(fèi)再向客戶提供一次。產(chǎn)品僅用于科學(xué)研究
實(shí)驗(yàn)材料： 
1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶 
2. 100ml燒杯2個(gè)； 人皮膚成纖維細(xì)胞,CCC-HSF-1細(xì)胞
3、50ml離心筒2個(gè) 
4、培養(yǎng)皿1個(gè)，細(xì)胞培養(yǎng)瓶1個(gè) 
5、1ml ，200μl移液器各1支；槍頭盒2個(gè)；無菌玻璃攪拌棒1個(gè) 
6、細(xì)胞計(jì)數(shù)板1塊； 
7、滅好菌的鑷子1把，剪刀1把； 
8、酒精燈1臺； 

培養(yǎng)細(xì)胞凍存方案：
以下實(shí)驗(yàn)方案介紹了培養(yǎng)細(xì)胞凍存的一般流程。詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)方案，必須參閱針對具體細(xì)胞的產(chǎn)品說明書。 
1.配制凍存培養(yǎng)基，于2°C至8°C下儲存，直至使用。請注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細(xì)胞系。
2.凍存貼壁細(xì)胞時(shí)，利用傳代時(shí)所用方法輕柔地使細(xì)胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來。用該細(xì)胞所需完全培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞。
3.采用血球計(jì)數(shù)器、細(xì)胞計(jì)數(shù)儀按照臺盼藍(lán)拒染法或者使用自動細(xì)胞計(jì)數(shù)儀測定總細(xì)胞數(shù)和活細(xì)胞百分比。根據(jù)所需活細(xì)胞密度，計(jì)算凍存培養(yǎng)基需要量。
4.以大約100-200×g的離心力將細(xì)胞懸液離心5至10分鐘。在無菌條件下小心倒掉上清液，不要攪動細(xì)胞沉淀。
注：離心速度和時(shí)間取決于細(xì)胞種類。
5.用預(yù)冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞沉淀，將其調(diào)整至該細(xì)胞適合的活細(xì)胞密度。
6.將細(xì)胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時(shí)，應(yīng)不時(shí)輕輕混合細(xì)胞，使其保持均勻的細(xì)胞懸液狀態(tài)。
7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細(xì)胞，使溫度每分鐘大約降低  1°C?；蛘撸瑢⒀b有細(xì)胞的凍存管放入凍存盒中，然后將凍存盒置于-80°C條件下過夜。 
培養(yǎng)操作步驟 ：
1．用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布； 
2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）； 
3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)； 
4．將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片完全浸在培養(yǎng)液中； 
5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及細(xì)胞化學(xué)檢測。 
兔基質(zhì)金屬蛋白酶-12(rabbit MMP-12)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進(jìn)口分裝  4-Oxododecanedioic acid  30828-09-2  中文名：  分子式：C12H20O5  度：95.0%  關(guān)鍵詞：  植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫

兔基質(zhì)金屬蛋白酶-1(rabbit MMP-1)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進(jìn)口分裝  4-Methyl-2-propyl-1H-benzimidazole-6
7-羥基-3-羧酸(>98.0%(HPLC))  7-Hydroxycoumarin-3-carboxylic Acid  質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(HPLC) Rat macrophage migration inhibitory factor (MIF) ELISA Kit 大鼠巨噬細(xì)胞移動抑制因子(MIF)ELISA試劑盒

7-二乙氨基-4-甲基(>98.0%(GC)(T))  7-Diethylamino-4-methylcoumarin  質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(GC)(T) Humanmyelinassociatedglycoproteinaoaibody,MAGELISAKit 人抗髓鞘相關(guān)糖蛋白抗體(MAG)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

甲基鈣黃綠素藍(lán)水合物[用于配位滴定銅時(shí)的指示劑]  Methyl Calcein Blue Hydrate  質(zhì)量規(guī)格：用于配位滴定銅時(shí)的指示劑 Humanalpha-fetoproteinLensculinarisaggliin1,AFP-L1ELISA試劑盒人小扁結(jié)合型甲胎蛋白/甲胎蛋白異質(zhì)體1(AFP-L1)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

6,7-亞甲二氧基-4-甲基-3-馬來(>98.0%(HPLC)(N))  6,7-Methylenedioxy-4-methyl-3-maleimidocoumarin  質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(HPLC)(N) 植物氨含量光譜法定量檢測試劑盒20

4-甲基-6,7-亞甲基二氧代(>99.0 %(GC))  4-Methyl-6,7-methylenedioxycoumarin  質(zhì)量規(guī)格： >99.0 %(GC) Mouse17-Hydroxycoicosteroids,17-OHCSELISAKit小鼠17羥皮質(zhì)類(17-OHCS)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

7-甲氧基-3-羧酸(>98.0%(GC)(T))  7-Methoxycoumarin-3-carboxylic Acid  質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(GC)(T) 小鼠可溶性Endoglin(ENG/sCD105)ELISA試劑盒 ，英文名： ENG/sCD105 ELISA Kit

溶劑綠 7(>85.0%(E))  Pyranin  質(zhì)量規(guī)格：>85.0%(E) 大鼠維生素D2(VD2)ELISA檢測試劑盒RatVitaminD2,VD2ELISAKit 96T/48T

磺酰熒光素(>75.0%(HPLC)(T))  Sulfonfluorescein  質(zhì)量規(guī)格：>75.0%(HPLC)(T) 人蛋白酪氨酸0酸酶自身抗體試劑盒 Human Tyrosine Phosphatase Aoaibodies ELISA Kit

N-琥珀基-7-羥基-3-羧酸酯(>95.0%(HPLC)(T))  N-Succinimidyl 7-Hydroxycoumarin-3-carboxylate  質(zhì)量規(guī)格：>95.0%(HPLC)(T) RatPeosidineELISAKit大鼠戊糖素(Peosidine)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

N-琥珀基-7-甲氧基-3-羧酸酯(>98.0%(HPLC)(N))  N-Succinimidyl 7-Methoxycoumarin-3-carboxylate  質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(HPLC)(N) GMS10甲基化基因電轉(zhuǎn)感受態(tài)5X100微升
人蛋白酶3(PR3)酶聯(lián)吸附測定試劑盒 別稱:PRTN3, ACPA, AGP7, C-ANCA, CANCA, MBN, MBT, NP-4, NP4, P29, PR-3, PR3, proteinase 3 Human PR3(Proteinase 3) ELISA Kit 用途 該試劑盒用于體外定量檢測Human 血清，血漿或其他生物體液中天然及部分重組PR3濃度
收到如何處理:
1、首先，觀察培養(yǎng)瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象。若有，請拍照，并及時(shí)與技術(shù)支持聯(lián)系（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）。
2、用75%酒精擦拭細(xì)胞培養(yǎng)瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問題，部分貼壁細(xì)胞會有少量從瓶壁脫落；先不要打開培養(yǎng)瓶蓋，將細(xì)胞置于細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2-4小時(shí)，以便穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
3、仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如貼壁特性（貼壁/懸?。?、細(xì)胞形態(tài)、所用基礎(chǔ)培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子、傳代比例、換液頻率等。
4、靜置完成后，取出細(xì)胞培養(yǎng)瓶，鏡檢、拍照，記錄細(xì)胞狀態(tài)（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）；建議細(xì)胞傳代培養(yǎng)后，定期拍照、記錄細(xì)胞生長狀態(tài)。
5、貼壁細(xì)胞：若細(xì)胞生長密度超過80%，可正常傳代；若未超過80%，移除細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)基，預(yù)留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng)，直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右再進(jìn)行傳代操作，瓶蓋可稍微擰松。
6、NCI-H23細(xì)胞懸浮細(xì)胞：將細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)液體全部轉(zhuǎn)移至50ml無菌離心管內(nèi)，1200rpm離心5min，離心后上清培養(yǎng)基可收集備用，管底細(xì)胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打、重懸。鏡檢時(shí)，若細(xì)胞密度超過80%，可將細(xì)胞懸液分至2個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)，補(bǔ)加培養(yǎng)基至5ml；若細(xì)胞密度未超過80%，將細(xì)胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng)，直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右時(shí)再進(jìn)行傳代操作。