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我們的細(xì)胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等,購買到貨后,由我們實(shí)驗(yàn)室擴(kuò)增、凍存,凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測(cè),100%進(jìn)口來源,100%保證5代以內(nèi),活力>95%,無**、支原體污染。 細(xì)胞到達(dá)客戶手中,1個(gè)月內(nèi)出現(xiàn)任何問題,導(dǎo)致細(xì)胞在凍存前死亡,我們公司都可以免費(fèi)再向客戶提供一次。產(chǎn)品僅用于科學(xué)研究
產(chǎn)品名稱 |
HCT116/L細(xì)胞 |
規(guī)格 |
T25 |
貨號(hào) |
BH-0110337 |
產(chǎn)品詳細(xì) 結(jié)腸癌耐奧沙利鉑耐藥株
形態(tài)特性
生長(zhǎng)特性 貼壁生長(zhǎng)
特征特性
培養(yǎng)條件 DMEM+10%FBS
傳代方法 1:2傳代
實(shí)驗(yàn)材料:
1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶;8ml小牛血清(FCS) 1瓶;100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶;PBS(-)1 瓶
2. 100ml燒杯2個(gè); 人皮膚成纖維細(xì)胞,CCC-HSF-1細(xì)胞
3、50ml離心筒2個(gè)
4、培養(yǎng)皿1個(gè),細(xì)胞培養(yǎng)瓶1個(gè)
5、1ml ,200μl移液器各1支;槍頭盒2個(gè);無菌玻璃攪拌棒1個(gè)
6、細(xì)胞計(jì)數(shù)板1塊;
7、滅好菌的鑷子1把,剪刀1把;
8、酒精燈1臺(tái);
培養(yǎng)細(xì)胞凍存方案:
以下實(shí)驗(yàn)方案介紹了培養(yǎng)細(xì)胞凍存的一般流程。詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)方案,必須參閱針對(duì)具體細(xì)胞的產(chǎn)品說明書。
1.配制凍存培養(yǎng)基,于2°C至8°C下儲(chǔ)存,直至使用。請(qǐng)注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細(xì)胞系。
2.凍存貼壁細(xì)胞時(shí),利用傳代時(shí)所用方法輕柔地使細(xì)胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來。用該細(xì)胞所需完全培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞。
3.采用血球計(jì)數(shù)器、細(xì)胞計(jì)數(shù)儀按照臺(tái)盼藍(lán)拒染法或者使用自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀測(cè)定總細(xì)胞數(shù)和活細(xì)胞百分比。根據(jù)所需活細(xì)胞密度,計(jì)算凍存培養(yǎng)基需要量。
4.以大約100-200×g的離心力將細(xì)胞懸液離心5至10分鐘。在無菌條件下小心倒掉上清液,不要攪動(dòng)細(xì)胞沉淀。
注:離心速度和時(shí)間取決于細(xì)胞種類。
5.用預(yù)冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞沉淀,將其調(diào)整至該細(xì)胞適合的活細(xì)胞密度。
6.將細(xì)胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時(shí),應(yīng)不時(shí)輕輕混合細(xì)胞,使其保持均勻的細(xì)胞懸液狀態(tài)。
7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細(xì)胞,使溫度每分鐘大約降低 1°C?;蛘撸瑢⒀b有細(xì)胞的凍存管放入凍存盒中,然后將凍存盒置于-80°C條件下過夜。
培養(yǎng)操作步驟 :
1.用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí);
4.將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片完全浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。
實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說明 :
1.本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng),而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng),懸浮細(xì)胞可使用滴片法;
2.所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)玻璃**,并經(jīng)過鉻酸洗液處理;
3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕;
4.如果需要更多生長(zhǎng)狀態(tài)一致的細(xì)胞,可以使用較大的培養(yǎng)皿,但不宜過大,以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率;
5.如果細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
紅鏈霉素龍膽二糖苷 HPLC≥98% 10mg 小鼠腫瘤壞死因子受體超家族成員8(TNFRSF8)ELISA試劑盒 ,英文名: TNFRSF8 ELISA Kit
紅杉醇 HPLC≥98% 20mg 犬5羥色胺(5-HT)ELISA檢測(cè)試劑盒Canine5-Hydroxyyptamine,5HTELISAKit 96T/48T
紅松內(nèi)酯 HPLC≥98% 20mg 犬水通道蛋白5(AQP5)試劑盒 Dog aquaporin-5,AQP5 ELISA kit
葒草苷 HPLC≥98% 20mg 英文名稱H
硬脂酸甲酯(>99.5%(GC),標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì))
Methyl Stearate 質(zhì)量規(guī)格:>99.5%(GC),標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì) 人γ干擾素(IFN-γ)試劑盒 Human IFN-γ ELISA Kit
亞麻酸甲酯(>98.0%(GC),標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)) Methyl Linolenate 質(zhì)量規(guī)格:>98.0%(GC),標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì) 人γ干擾素受體(IFN-γR)試劑盒 Human Ierferon γ Receptor,IFN-γR ELISA Kit
亞油酸甲酯(>99.0%(GC),標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)) Methyl Linoleate 質(zhì)量規(guī)格:>99.0%(GC),標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì) 人γ干擾素誘導(dǎo)單核細(xì)胞因子(MIG/CXCL9)試劑盒 Human monocyte ierferon gamma inducing factor,MIG ELISA Kit
1-十一烯(>99.5%(GC),標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)) 1-Undecene 質(zhì)量規(guī)格:>99.5%(GC),標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì) 人γ干擾素誘導(dǎo)蛋白16/p16(IFI16/p16)試劑盒 Human IFI16 ELISA Kit
1-十二烯(>99.5%(GC),標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)) 1-Dodecene 質(zhì)量規(guī)格:>99.5%(GC),標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì) 人γ谷氨酸-半胱氨酸合成酶(γ-GCS)試劑盒 Human γ glamylcysteine syhetase,γ-GCS ELISA Kit
1-十三烯(>99.5%(GC),標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)) 1-Tridecene 質(zhì)量規(guī)格:>99.5%(GC),標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì) 人γ谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-ECS)ELISA檢測(cè)試劑盒Humanγ-glamylsysteinesyhetase,γ-ECSELISAKit 96T/48T
1-十四烯(>99.5%(GC),標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)) 1-Tetradecene 質(zhì)量規(guī)格:>99.5%(GC),標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì) 人γ-谷氨酰環(huán)化轉(zhuǎn)移酶(GGCT)試劑盒 Human GGCT ELISA Kit
1-十五烯(>99.0%(GC),標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)) 1-Pentadecene 質(zhì)量規(guī)格:>99.0%(GC),標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì) 人γ谷氨酰轉(zhuǎn)移酶(GGT)試劑盒 Human GGT ELISA Kit
1-十六烯(>99.5%(GC),標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)) 1-Hexadecene 質(zhì)量規(guī)格:>99.5%(GC),標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì) 人γ肽(Pγ)ELISA檢測(cè)試劑盒HumanPeptideγ,PγELISAKit 96T/48T
1-十七烯(>99.5%(GC),標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì))
1-Heptadecene 質(zhì)量規(guī)格:>99.5%(GC),標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì) 人κB抑制蛋白激酶(IKK)試劑盒 Human I kappa B kinase,IKK ELISA kit
人D-乳酸脫氫酶(D-LDH)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒 別稱:DLD, LDHD, Probable D-lactate
dehydrogenase,mitochondrial, Human D-LDH(D-Lactate Dehydrogenase) ELISA Kit 用途 該試劑盒用于體外定量檢測(cè)Human 血清,血漿或其他生物體液中天然及部分重組D-LDH濃度
收到如何處理:
1、首先,觀察培養(yǎng)瓶是否完好,培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象。若有,請(qǐng)拍照,并及時(shí)與技術(shù)支持聯(lián)系(所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù))。
2、用75%酒精擦拭細(xì)胞培養(yǎng)瓶表面,顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問題,部分貼壁細(xì)胞會(huì)有少量從瓶壁脫落;先不要打開培養(yǎng)瓶蓋,將細(xì)胞置于細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2-4小時(shí),以便穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
3、仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書,了解細(xì)胞相關(guān)信息,如貼壁特性(貼壁/懸?。?、細(xì)胞形態(tài)、所用基礎(chǔ)培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子、傳代比例、換液頻率等。
4、靜置完成后,取出細(xì)胞培養(yǎng)瓶,鏡檢、拍照,記錄細(xì)胞狀態(tài)(所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù));建議細(xì)胞傳代培養(yǎng)后,定期拍照、記錄細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)。
5、貼壁細(xì)胞:若細(xì)胞生長(zhǎng)密度超過80%,可正常傳代;若未超過80%,移除細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)培養(yǎng)基,預(yù)留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng),直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右再進(jìn)行傳代操作,瓶蓋可稍微擰松。
6、懸浮細(xì)胞:將細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)液體全部轉(zhuǎn)移至50ml無菌離心管內(nèi),1200rpm離心5min,離心后上清培養(yǎng)基可收集備用,管底細(xì)胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打、重懸。鏡檢時(shí),若細(xì)胞密度超過80%,可將細(xì)胞懸液分至2個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)培養(yǎng),HCT116/L細(xì)胞補(bǔ)加培養(yǎng)基至5ml;若細(xì)胞密度未超過80%,將細(xì)胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng),直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右時(shí)再進(jìn)行傳代操作。