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實驗要點及說明 :
1.本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng),而不適用于懸浮細胞培養(yǎng),懸浮細胞可使用滴片法;
2.所使用的蓋玻片應該為優(yōu)玻璃**,并經過鉻酸洗液處理;
3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時動作要輕;
4.如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞,可以使用較大的培養(yǎng)皿,但不宜過大,以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率;
5.如果細胞貼壁生長能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
產品名稱 |
RSC96細胞 |
規(guī)格 |
T25 |
貨號 |
BH-0110383 |
產品詳細 大鼠雪旺細胞;RSC96
形態(tài)特性 神經元
生長特性 貼壁生長
特征特性 RSC96細胞株是原代培養(yǎng)的大鼠雪旺細胞經長時間培養(yǎng)后自發(fā)轉化而成的[PubMed: 9766530]。 2002年十二月提交到ATCC的培養(yǎng)物污染了支原體。 其后代通過BM 細胞周期蛋白處理21天消除支原體。 處理后六周,用Hoechst染色、PCR和標準培養(yǎng)測試進行支原體檢測。 結果都呈陰性。
培養(yǎng)條件 DMEM+10%FBS
傳代方法 1:2傳代
我們的細胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等,購買到貨后,由我們實驗室擴增、凍存,凍存的產品全部經過QC檢測,100%進口來源,100%保證5代以內,活力>95%,無**、支原體污染。 細胞到達客戶手中,1個月內出現(xiàn)任何問題,導致細胞在凍存前死亡,我們公司都可以免費再向客戶提供一次。產品僅用于科學研究
實驗材料:
1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶;8ml小牛血清(FCS) 1瓶;100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶;PBS(-)1 瓶
2. 100ml燒杯2個; 人皮膚成纖維細胞,CCC-HSF-1細胞
3、50ml離心筒2個
4、培養(yǎng)皿1個,細胞培養(yǎng)瓶1個
5、1ml ,200μl移液器各1支;槍頭盒2個;無菌玻璃攪拌棒1個
6、細胞計數(shù)板1塊;
7、滅好菌的鑷子1把,剪刀1把;
8、酒精燈1臺;
培養(yǎng)細胞凍存方案:
以下實驗方案介紹了培養(yǎng)細胞凍存的一般流程。詳細的實驗方案,必須參閱針對具體細胞的產品說明書。
1.配制凍存培養(yǎng)基,于2°C至8°C下儲存,直至使用。請注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細胞系。
2.凍存貼壁細胞時,利用傳代時所用方法輕柔地使細胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來。用該細胞所需完全培養(yǎng)基重新懸浮細胞。
3.采用血球計數(shù)器、細胞計數(shù)儀按照臺盼藍拒染法或者使用自動細胞計數(shù)儀測定總細胞數(shù)和活細胞百分比。根據(jù)所需活細胞密度,計算凍存培養(yǎng)基需要量。
4.以大約100-200×g的離心力將細胞懸液離心5至10分鐘。在無菌條件下小心倒掉上清液,不要攪動細胞沉淀。
注:離心速度和時間取決于細胞種類。
5.用預冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細胞沉淀,將其調整至該細胞適合的活細胞密度。
6.將細胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時,應不時輕輕混合細胞,使其保持均勻的細胞懸液狀態(tài)。
7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細胞,使溫度每分鐘大約降低 1°C?;蛘撸瑢⒀b有細胞的凍存管放入凍存盒中,然后將凍存盒置于-80°C條件下過夜。
培養(yǎng)操作步驟 :
1.用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時;
4.將經過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片完全浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時,將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及細胞化學檢測。
巴西蘇木素 HPLC≥98% 10mg 犬游離脂肪酸(FFA)試劑盒 Dog free fatty acids,FFA ELISA kit
菝葜皂苷元 HPLC≥98% 20mg 英文名稱MouseCXCL10ELISAKit小鼠B-細胞趨化因子10(CXCL11)規(guī)格:96T/48T
白當歸腦 HPLC≥98% 20mg 冰凍切片組織線粒體復合物V蛋白表達熒光顯微鏡檢測試劑盒10/20
白當歸素 HPLC≥98% 20mg RatfactorB,BFELISA試劑盒大鼠B因子(BF)ELISA試劑盒規(guī)格
氨氯地平/苯磺酸氨氯地平
(S)-Amlodipine 質量規(guī)格:>97% 人溶菌酶(LZM)ELISA檢測試劑盒HumanLysozyme,LZMELISAKit 96T/48T
氨氯地平/苯磺酸氨氯地平(標準品) (S)-Amlodipine 質量規(guī)格:含量測定 人溶酶體相關膜蛋白2(HLAMP-2)ELISA檢測試劑盒Humanhumanlysosomal-associatedmembraneprotein2,HLAMP-2ELISAKit 96T/48T
曲尼司特 Tranilast 質量規(guī)格:>98.0% 人乳鐵傳遞蛋白/乳鐵蛋白(LF/LTF)ELISA檢測試劑盒HumanLactoferrin,LTF/LFELISAkit 96T/48T
曲尼司特(標準品) Tranilast 質量規(guī)格:≥98%,標準品 人軟骨寡聚基質蛋白(COMP)ELISA檢測試劑盒Humancailageoligomericmaixprotein,COMPELISAKit 96T/48T
頭孢羥氨芐 (標準品) CEFADROXIL 質量規(guī)格:HPLC含量測定用 人軟骨糖蛋白39(HCgp-39)ELISA檢測試劑盒HumanCailageglycoprotein39,HCgp-39ELISAKit 96T/48T
頭孢羥氨芐 CEFADROXIL 質量規(guī)格:>950μg/mg,BR 人肽(cecropin)ELISA檢測試劑盒HumancecropinELISAKit 96T/48T
D-泛酸鈉 D-pantothenate 質量規(guī)格:>98%,BR 人殺傷細胞球蛋白樣受體(KIR)ELISA檢測試劑盒Humankillercellimmnoglobulin-likereceptor,KIRELISAKit 96T/48T
依度沙班;伊多塞班 Edoxaban 質量規(guī)格:>99%,BR 人殺傷細胞凝集素樣受體(KLR)ELISA檢測試劑盒Humankillercelllectin-likereceptor,KLRELISAKit 96T/48T
牛防風素;6-甲氧基當歸素 Sphondin 質量規(guī)格:HPLC>97% 人山梨醇脫氫酶(SDH)ELISA檢測試劑盒Humansorbitoldehydrogenase,SDHELISAKit 96T/48T
6-羥基(標準品)
6-Hydroxycoumarin 質量規(guī)格:>98%(GC),標準品 人上皮膜抗原(EMA)ELISA檢測試劑盒HumanEpithelialmembraneaigen,EMAELISAKit
96T/48T
人白介素16(IL-16)酶聯(lián)吸附測定試劑盒 別稱:IL16, LCF, NIL16, PRIL16, prIL-16 Human
IL-16(Interleukin 16) ELISA Kit 用途 該試劑盒用于體外定量檢測Human 血清,血漿或其他生物體液中天然及部分重組IL-16濃度
收到如何處理:
1、首先,觀察培養(yǎng)瓶是否完好,培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象。若有,請拍照,并及時與技術支持聯(lián)系(所拍照片將作為后續(xù)服務依據(jù))。
2、用75%酒精擦拭細胞培養(yǎng)瓶表面,顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題,部分貼壁細胞會有少量從瓶壁脫落;先不要打開培養(yǎng)瓶蓋,將細胞置于細胞培養(yǎng)箱內靜置培養(yǎng)2-4小時,以便穩(wěn)定細胞狀態(tài)。
3、仔細閱讀細胞說明書,了解細胞相關信息,如貼壁特性(貼壁/懸浮)、細胞形態(tài)、所用基礎培養(yǎng)基、血清比例、所需細胞因子、傳代比例、換液頻率等。
4、靜置完成后,取出細胞培養(yǎng)瓶,鏡檢、拍照,記錄細胞狀態(tài)(所拍照片將作為后續(xù)服務依據(jù));建議細胞傳代培養(yǎng)后,定期拍照、記錄細胞生長狀態(tài)。
5、貼壁細胞:若細胞生長密度超過80%,可正常傳代;若未超過80%,移除細胞培養(yǎng)瓶內培養(yǎng)基,預留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng),直至細胞密度達80%左右再進行傳代操作,瓶蓋可稍微擰松。
6、RSC96細胞懸浮細胞:將細胞培養(yǎng)瓶內液體全部轉移至50ml無菌離心管內,1200rpm離心5min,離心后上清培養(yǎng)基可收集備用,管底細胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打、重懸。鏡檢時,若細胞密度超過80%,可將細胞懸液分至2個細胞培養(yǎng)瓶內培養(yǎng),補加培養(yǎng)基至5ml;若細胞密度未超過80%,將細胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng),直至細胞密度達80%左右時再進行傳代操作。