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產(chǎn)品名稱：金龜子綠僵菌小孢變種 斜面

編號：BH-J011829

拉丁文:Metarhizium anisopliae var. anisopliae

提供形式: 斜面

**等級: 1

模式菌株: no

應用領域: 生物防治

培養(yǎng)基: 綜合PDA：馬鈴薯煮汁1000mL，磷酸二氫鉀 3.0g，七水硫酸鎂 1.5g，葡萄糖 20.0g，維生素B1 10mg，瓊脂 20g，pH自然。馬鈴薯煮液：200g馬鈴薯，去皮，切塊，放入蒸餾水中煮沸30min，取濾液定容至1000mL,備用。121℃，15min。

生長條件: 25-28℃，好氧

保存方法：

傳代保存法：培養(yǎng)基的濃度不宜過高，營養(yǎng)成分不宜過于豐富，尤其是碳水化合物的濃度應在可能的范圍內盡量降低。培養(yǎng)溫度通常以稍低于適生長溫度為好。若為產(chǎn)酸菌種，則應在培養(yǎng)基中添加少量碳酸鈣 [3] 。

液體石蠟覆蓋保存法：該法較前一種方法保存菌種的時間更長，適用于霉菌、酵母菌、放線菌及需氧等的保存。

懸液保存法：

① 蒸餾水保存法：適用于霉菌、酵母菌及絕大部分放線菌，將其菌體懸浮于蒸餾水中即可在室溫下保存數(shù)年。本法應注意避免水分的蒸發(fā)。

② 糖液保存法：適用于酵母菌，如將其菌體懸浮于10%的蔗糖溶液中，然后于冷暗處保存，可長達10年。除此之外，也可使用緩沖液或食鹽水等進行保存。

載體保存法：①土壤保存法；②砂土保存法；③硅膠保存法；④磁珠保存法；⑤麩皮保存法；⑥紙片(濾紙)保存法。

常用的冷凍保存法：

① 低溫冰箱保存法(-20℃、-50℃或-85℃)：低溫冷凍保存時使用螺旋口試管較為方便，也可在棉塞試管外包裹塑料薄膜。保存時菌液加量不宜過多，有些可添加保護劑。此外，也可用φ5mm的玻璃珠來吸附菌液，然后把玻璃珠置于塑料容器內，再放入低溫冰箱內進行保存的。

② 干冰保存法(-70℃左右)：即將菌種管插入干冰內，再置于冰箱內進行冷凍保存。

③ 液氮保存法(-196℃)：是適用范圍廣的微生物保存法。        

微生物菌種的培養(yǎng)：

⒈ 孢子制備

⑴ 放線菌孢子的制備

一般采用瓊脂斜面培養(yǎng)基，培養(yǎng)基中含有一些適合產(chǎn)孢子的營養(yǎng)成分，如麩皮、豌豆浸汁、蛋白胨和一些無機鹽等。碳源和氮源不要太豐富(碳源約為1％，氮源不超過0.5％)，碳源豐富容易造成生理酸性的營養(yǎng)環(huán)境，不利于放線菌孢子的形成，氮源豐富則有利于菌絲繁殖而不利于孢子形成。一般情況下，干燥和限制營養(yǎng)可直接或間接誘導孢子形成。放線菌斜面的培養(yǎng)溫度大多數(shù)為28 ℃，少數(shù)為37 ℃，培養(yǎng)時間為5～14天。

⑵ 霉菌孢子的制備

霉菌的孢子培養(yǎng)，一般以大米、小米、玉米、麩皮、麥粒等天然農產(chǎn)品為培養(yǎng)基。這是由于這些農產(chǎn)品中的營養(yǎng)成分較適合霉菌的孢子繁殖，而且這類培養(yǎng)基的表面積較大，可獲得大量的孢子。霉菌的培養(yǎng)一般為25～28 ℃，培養(yǎng)時間為4～14天。

⒉ 種子制備

⑴ 搖瓶種子制備

搖瓶種子進罐，常采用母瓶、子瓶兩級培養(yǎng)，有時母瓶種子也可以直接進罐。種子培養(yǎng)基要求比較豐富和完全，并易被菌體分解利用，氮源豐富有利于菌絲生長。原則上各種營養(yǎng)成分不宜過濃，子瓶培養(yǎng)基濃度比母瓶略高，更接近種子罐的培養(yǎng)基配方。

⑵ 種子罐種子制備

種子罐種子制備的工藝過程，因菌種不同而異，一般可分為種子、二級種子和三級種子的制備。孢子(或搖瓶菌絲)被接入到體積較小的種子罐中，經(jīng)培養(yǎng)后形成大量的菌絲，這樣的種子稱為種子，把種子轉入發(fā)酵罐內發(fā)酵，稱為二級發(fā)酵。如果將種子接入體積較大的種子罐內，經(jīng)過培養(yǎng)形成更多的菌絲，這樣制備的種子稱為二級種子，將二級種子轉入發(fā)酵罐內發(fā)酵，稱為三級發(fā)酵。同樣道理，使用三級種子的發(fā)酵，稱為四級發(fā)酵。

1,4,8,12-四氮雜環(huán)十五烷(>97.0%(T))  1,4,8,12-Tetraazacyclopentadecane  質量規(guī)格：>97.0%(T) Humahymidinephosphorylase,TPELISAKit人胸腺嘧啶核苷0酸化酶(TP)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

1,5,9-三氮雜環(huán)十二烷(>90.0%(GC))  1,5,9-Triazacyclododecane  質量規(guī)格：>90.0%(GC) 小鼠蛋酸腺苷轉移酶Ⅰα(MAT1α)ELISA試劑盒 ，英文名： MAT1α ELISA Kit

1,4,7-三氮雜環(huán)壬烷(>98.0%(GC))  1,4,7-Triazacyclononane  質量規(guī)格：>98.0%(GC) 人缺血修飾白蛋白(IMA)ELISA檢測試劑盒HumanIschemiaModifiedAlbumin,IMAELISAKit 96T/48T

1,4,7-基-1,4,7-三氮雜環(huán)壬烷(含穩(wěn)定劑碳酸氫鈉)  1,4,7-Trimethyl-1,4,7-triazacyclononane (stabilized with NaHCO3)  質量規(guī)格：>98.0%(GC)(T) 大鼠內皮素轉換酶1(ECE1)試劑盒 Rat Endothelin-conveing enzyme 1,ECE1 ELISA kit

1,4,8,11-四硫代環(huán)十四烷(>98.0%(GC))  1,4,8,11-Tetrathiacyclotetradecane  質量規(guī)格：>98.0%(GC) 英文名稱RatcAMPELISAKit大鼠環(huán)-0酸腺苷(cAMP)ELISAKit規(guī)格：96T/48T

1,4,7-三硫雜環(huán)壬烷(>98.0%(GC))  1,4,7-Trithiacyclononane  質量規(guī)格：>98.0%(GC) 酵母菌SD-URA培養(yǎng)基100毫升

1,4,8,11-四氮雜環(huán)十四烷-1,4,8,11-四乙酸四乙酯(>97.0%(GC))  Tetraethyl 1,4,8,11-Tetraazacyclotetradecane-1,4,8,11-tetraacetate  質量規(guī)格：>97.0%(GC) ELISAKitPPI人肽基脯氨酰順反異構酶規(guī)格：48T/96T

1,4,7,10-四氮雜環(huán)十二烷-1,4,7-三乙酸三叔丁酯(>93.0%(N))  Tri-tert-butyl 1,4,7,10-Tetraazacyclododecane-1,4,7-triacetate  質量規(guī)格：>93.0%(N) 小鼠蛋白質二硫鍵異構酶(PDI)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

1,4,7,10-四氮雜環(huán)十二烷-1,4,7,10-四乙酸三叔丁酯(>97.0%(T))  Tri-tert-butyl 1,4,7,10-Tetraazacyclododecane-1,4,7,10-tetraacetate  質量規(guī)格：>97.0%(T) Rat urokinase type plasminogen activator receptor (PLAUR/uPAR) ELISA Kit 大鼠尿激酶型纖溶酶原激活物受體(PLAUR/uPAR)ELISA試劑盒

4-叔丁基杯[8]芳烴(>98.0%(HPLC))  4-tert-Butylcalix[8]arene  質量規(guī)格：>98.0%(HPLC) Humanai-immunodeficiencyvirusaibody,HIVELISAKit 人抗人類缺陷病毒抗體(HIV)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝

1240-04-6  Estrone sulfate potassium  10mg  Broad Bean Stain Virus(BBSV)蠶豆染色病毒RT-PCR試劑盒  植物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒  50次  低溫  負20度

1240-04-6  Estrone sulfate potassium  5mg  Broad Bean Stain Virus(BBSV)蠶豆染色病毒RT-PCR試劑盒  植物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒  50次  低溫  負20度

1240299-33-5  AZD3514  100mg  Botryosphaeria stevensii蘋果殼色單隔孢潰瘍病菌PCR試劑盒  植物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒  50次  低溫  負20度

1240299-33-5  AZD3514  10mg  Botrytis cinerea灰霉菌PCR試劑盒  植物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒  50次  低溫  負20度

1240299-33-5  AZD3514  10mM(in1mLDMSO)  Botrytis cinerea灰霉菌PCR試劑盒  植物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒  50次  低溫  負20度

1-Ethylnaphthalene,certified 標準品 PCBNo.75 1127-76-0 純品型，10MG

9,10-Diphenylanthracene,certified 標準品 9,10-Diphenylanthracene 1499-10-1 純品型，25mg

3，6-二甲基菲 標準品 PCBNo.87 1576-67-6 純品型，10MG

菌種的培養(yǎng)：

金龜子綠僵菌小孢變種 斜面1、是指食用菌菌絲體及其生長基質組成的繁殖材料。菌種分為母種（種）、原種（二級種）和栽培種（三級種）三級。工業(yè)發(fā)酵的有用菌種，其篩選步驟包括菌種分離、初篩和復篩。

2、挑選具有某種能力的有用菌種，也稱種子制備，是指菌種在一定條件下，經(jīng)過擴大培養(yǎng)成為具有一定數(shù)量和質量的純生產(chǎn)菌種的制備過程。以作接入發(fā)酵罐中進一步擴大菌體量及合成產(chǎn)物之用。

3、種子制備包括孢子制備和菌絲體制備 菌種制備。

4、保存在沙土管或冷凍管中的生產(chǎn)菌種，用無菌手續(xù)挑取少許，接入瓊脂斜面培養(yǎng)基上，在25℃（或較高溫度）下培養(yǎng)5～7天（或較長時間。所得孢子還需進一步用較大表面積的固體培養(yǎng)基以獲得更多孢子（對于霉菌類孢子制備，多數(shù)采用大米、小米之類的天然培養(yǎng)基）。

5、將培養(yǎng)成熟的斜面孢子制成懸浮液，接種到扁瓶固體培養(yǎng)基上，于25～28℃培養(yǎng)14天。將成熟的扁瓶孢子于真空中抽干，使水分降至10%以下，并放入 4℃冰箱中備用。一次制得的孢子瓶可在生產(chǎn)上延續(xù)使用半年左右。

6、如果有些生產(chǎn)菌種不產(chǎn)孢子，如赤霉素產(chǎn)生菌或產(chǎn)孢子不多的，則可采用搖瓶液體培養(yǎng)制得菌絲體，作種子罐的種子。種子罐的目的是使接入有限的孢子或菌絲體迅速發(fā)芽、生長、繁殖成大量菌體。其中的培養(yǎng)基組分應是易于被菌體利用的碳源（如葡萄糖）和氮源（如玉米漿），及無機鹽(如磷酸鹽)等。作為發(fā)酵罐的種子應生命力旺盛、染色深、菌絲粗壯，無雜菌及異常菌體。接種量一般在10%～20%。