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推薦培養(yǎng)基：
我們推薦使用 Delf原代 上皮 細(xì)胞培養(yǎng)體系 作為體外培養(yǎng)的培養(yǎng)基。
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產(chǎn)品名稱 |
大鼠結(jié)膜上皮細(xì)胞 |
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英文名稱 |
Primary conjunctival epithelial cells of rats |
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產(chǎn)品規(guī)格 |
5×105 |
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貨號 |
P-X1729 |
公司所有產(chǎn)品均不得用于臨床診斷，僅可用于工業(yè)或科研等非醫(yī)療目的。
細(xì)胞介紹：
結(jié)膜上皮是眼表的重要組成部分，是眼表的保護(hù)屏障，在維持淚膜的穩(wěn)定性、潤滑眼表、維持正常視力和眼表上皮損傷修復(fù)中發(fā)揮重要作用。上世紀(jì) 90 年代，隨著人們對眼表的深入研究，提出了結(jié)膜上皮干細(xì)胞的概念，認(rèn)為結(jié)膜上皮細(xì)胞的自我更新來自結(jié)膜上皮干細(xì)胞。
1)組織來源于實(shí)驗(yàn)動物的眼球。
操作步驟如下：
視天氣狀況和運(yùn)輸距離遠(yuǎn)近，公司與客戶協(xié)商后選擇下述方式中的一種進(jìn)行。
注意事項(xiàng)：
1)原代培養(yǎng)的分離細(xì)胞在初次接觸體外環(huán)境時，雖然被分散成單個細(xì)胞，但它們之間的互相影響還是存在的， 而且這種影響對細(xì)胞能否存活是非常重要的。在這些細(xì)胞之間能產(chǎn)生一些促生長的活性物質(zhì)， 使細(xì)胞彼此互相促進(jìn)存活和生長。如果接種的細(xì)胞密度過低， 細(xì)胞之間的促生長作用很小， 雖然營養(yǎng)物質(zhì)很充足， 也很難使細(xì)胞適應(yīng)從體內(nèi)的組織環(huán)境到被分散后進(jìn)入獨(dú)立生存環(huán)境的變化過程。 如果接種的細(xì)胞密度過大，會導(dǎo)致營養(yǎng)物質(zhì)供應(yīng)不足， 代謝廢物積累較快需要經(jīng)常換液和傳代。
2)細(xì)胞鑒定：廣譜角蛋白（PCK）免yi熒光染色為陽性。
3)經(jīng)鑒定細(xì)胞純度高于90%。
4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細(xì)jun、酵母和真jun。
5)細(xì)胞生長方式：扁平的橢圓形、梭形或不規(guī)則形，不規(guī)則細(xì)胞，貼壁培養(yǎng)。
1、剪切組織：先將所取得的組織，用D-Hanks或Hanks液清洗，以去除表面血污，并用手術(shù)鑷去除黏附的結(jié)締組織等非培養(yǎng)所需組織。再次清洗后，用手術(shù)刀將組織切成若干小塊，移入青霉素小瓶或小燒杯中，加入適量緩沖液，用彎頭眼科剪，反復(fù)剪切組織，直到組織成糊狀，約1mm3大小。靜置片刻后，用吸管吸去上層液體，加入適當(dāng)?shù)木彌_液再清洗一次。
2、消化分離：消化分離的目的是將細(xì)小的組織塊消化分離成細(xì)胞團(tuán)或分散的單個細(xì)胞，以利于進(jìn)一步的培養(yǎng)，常用的消化酶有胰蛋白酶和膠原酶。
3、培養(yǎng)：細(xì)胞懸液用計數(shù)板進(jìn)行細(xì)胞計數(shù)。用培養(yǎng)液將細(xì)胞數(shù)調(diào)整為（2～5）×105 cells／ml，或?qū)嶒?yàn)所需密度，分裝于培養(yǎng)瓶中，使細(xì)胞懸液的量以覆蓋后略高于培養(yǎng)瓶底部為宜。置CO2培養(yǎng)箱內(nèi)，5％CO2，37℃靜置培養(yǎng)。一般3～5d，原代培養(yǎng)細(xì)胞可以黏附于瓶壁，并伸展開始生長，可補(bǔ)加原培養(yǎng)液量1／2的新培養(yǎng)液，繼續(xù)培養(yǎng)2～3d后換液，一般7～14d可以長滿瓶壁，進(jìn)行傳代。
2)T-25培養(yǎng)瓶充滿完全培養(yǎng)基后進(jìn)行常溫運(yùn)輸；收到細(xì)胞后請鏡下觀察細(xì)胞生長狀態(tài)，如鋪瓶率超過85%請立即進(jìn)行傳代操作，如懸浮的細(xì)胞較多，請將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細(xì)胞能夠再次貼壁。
2)原代培養(yǎng)時初始培養(yǎng)在組織分散和分離細(xì)胞時細(xì)胞可能會受到嚴(yán)重的損傷。適當(dāng)增大原代培養(yǎng)接種的細(xì)胞密度， 給培養(yǎng)的細(xì)胞提供更多的類似于在體內(nèi)時細(xì)胞之間的相互作用， 會極大提高原代培養(yǎng)的細(xì)胞在體外存活率。待細(xì)胞適應(yīng)體外環(huán)境后進(jìn)行傳代培養(yǎng)時再以較低的密度接種和培養(yǎng)。
3)由于細(xì)胞之間的相互的內(nèi)在聯(lián)系被打破，分離細(xì)胞在體外培養(yǎng)時經(jīng)歷的生存環(huán)境改變很大，在體外存活和生長的難度相應(yīng)增加。 對于貼壁依賴性細(xì)胞來說，盡快使接種的細(xì)胞貼壁，是決定培養(yǎng)能否成功的關(guān)鍵。可以在接種后先將培養(yǎng)瓶置培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng) 3h 到 5h，由于細(xì)胞懸液中帶有少量培養(yǎng)液， 細(xì)胞即可以維持存活， 又可以很快接觸到培養(yǎng)瓶底壁， 是細(xì)胞迅速黏附于底物，待細(xì)胞貼壁后，再補(bǔ)足培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)。
3、分離細(xì)胞培養(yǎng)法—懸浮型細(xì)胞培養(yǎng) 。
公司正在出售的產(chǎn)品：
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Nthy-ori 3-1 (STR)人甲狀腺正常細(xì)胞 |
豬皮膚成纖維細(xì)胞 |
SLC38A5 Antibody Blocking Peptide |
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兔骨骼肌細(xì)胞 |
人肥胖脂肪干細(xì)胞 |
SLC1A4 Antibody Blocking Peptide |
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人增生乳腺成纖維細(xì)胞 |
比格犬軟骨細(xì)胞 |
NCDN Antibody Blocking Peptide |
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小鼠腎上皮細(xì)胞 |
小鼠結(jié)腸神經(jīng)元細(xì)胞 |
phospho-14-3-3 (Ser58) Antibody Blocking Peptide |
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小鼠羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞 |
大鼠淋ba管成纖維細(xì)胞 |
phospho-CDKN1B (Thr187) Antibody Blocking Peptide |
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大鼠肌腱干細(xì)胞 |
羊睪丸內(nèi)膜成纖維細(xì)胞 |
CD8 Antibody Blocking Peptide |
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人神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞 |
羊乳腺上皮細(xì)胞 |
Nitrated Alpha-synuclein Antibody Blocking Peptide |
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雞小腸粘膜上皮細(xì)胞 |
兔卵巢顆粒細(xì)胞 |
PSMA4 Antibody Blocking Peptide |
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大鼠淋ba管內(nèi)皮細(xì)胞 |
人小細(xì)胞肺癌NCI-H526(STR鑒定正確) |
ITGB1 Antibody Blocking Peptide |
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人睪丸白膜成纖維細(xì)胞 |
兔角質(zhì)形成細(xì)胞 |
ZNF195 Antibody Blocking Peptide |
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人精原細(xì)胞 |
兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞 |
MCP-1 Antibody Blocking Peptide |
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人肝癌相關(guān)成纖維細(xì)胞 |
兔脊髓成纖維細(xì)胞 |
MBD3 Antibody Blocking Peptide |
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大鼠結(jié)腸成纖維細(xì)胞 |
兔腎動脈平滑肌細(xì)胞 |
HORMAD1 Antibody Blocking Peptide |
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兔胸腺上皮細(xì)胞 |
小鼠胃平滑肌細(xì)胞 |
SLC7A1 Antibody Blocking Peptide |
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兔淋ba管成纖維細(xì)胞 |
小鼠舌表皮細(xì)胞 |
大鼠結(jié)膜上皮細(xì)胞phospho- HDAC4 (Ser632) Antibody Blocking Peptide |