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操作步驟如下：
1、剪切組織：先將所取得的組織，用D-Hanks或Hanks液清洗，以去除表面血污，并用手術(shù)鑷去除黏附的結(jié)締組織等非培養(yǎng)所需組織。再次清洗后，用手術(shù)刀將組織切成若干小塊，移入青霉素小瓶或小燒杯中，加入適量緩沖液，用彎頭眼科剪，反復(fù)剪切組織，直到組織成糊狀，約1mm3大小。靜置片刻后，用吸管吸去上層液體，加入適當(dāng)?shù)木彌_液再清洗一次。
2、消化分離：消化分離的目的是將細(xì)小的組織塊消化分離成細(xì)胞團(tuán)或分散的單個(gè)細(xì)胞，以利于進(jìn)一步的培養(yǎng)，常用的消化酶有胰蛋白酶和膠原酶。
3、培養(yǎng)：細(xì)胞懸液用計(jì)數(shù)板進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。用培養(yǎng)液將細(xì)胞數(shù)調(diào)整為（2～5）×105 cells／ml，或?qū)嶒?yàn)所需密度，分裝于培養(yǎng)瓶中，使細(xì)胞懸液的量以覆蓋后略高于培養(yǎng)瓶底部為宜。置CO2培養(yǎng)箱內(nèi)，5％CO2，37℃靜置培養(yǎng)。一般3～5d，原代培養(yǎng)細(xì)胞可以黏附于瓶壁，并伸展開始生長，可補(bǔ)加原培養(yǎng)液量1／2的新培養(yǎng)液，繼續(xù)培養(yǎng)2～3d后換液，一般7～14d可以長滿瓶壁，進(jìn)行傳代。
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產(chǎn)品名稱 |
大鼠脈絡(luò)膜微血管內(nèi)皮細(xì)胞 |
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英文名稱 |
Primary choroidal microvascular endothelial cells in rats |
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產(chǎn)品規(guī)格 |
5×105 |
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貨號(hào) |
P-X1730 |
公司所有產(chǎn)品均不得用于臨床診斷，僅可用于工業(yè)或科研等非醫(yī)療目的。
細(xì)胞介紹：
脈絡(luò)膜新生血管 (choroidal neovascularization，CNV)已成為眼科學(xué)領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)之一，目前多數(shù)體外研究應(yīng)用的是人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞或主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞等容易得到的大血管內(nèi)皮細(xì)胞。由于血管內(nèi)皮細(xì)胞具有器官特異性和組織特異性，用大血管內(nèi)皮細(xì)胞的研究結(jié)果很難客觀、準(zhǔn)確地解釋CNV的發(fā)生機(jī)制。因此，建立脈絡(luò)膜微血管內(nèi)皮細(xì)胞(choroidal microvascular endothelial cells，CEC)體外培養(yǎng)體系，對(duì)深入研究CNV相關(guān)ji病具有十分重要的價(jià)值。
細(xì)胞特性：
1)組織來源于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的正常眼組織。
2)細(xì)胞鑒定：CD34或CD31免yi熒光染色為陽性。
3)經(jīng)鑒定細(xì)胞純度高于90%。
4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細(xì)jun、酵母和真jun。
5)細(xì)胞生長方式：呈鵝卵石樣，不規(guī)則細(xì)胞，貼壁培養(yǎng)。
我們推薦使用 Delf原代 內(nèi)皮 細(xì)胞培養(yǎng)體系 作為體外培養(yǎng)的培養(yǎng)基。
產(chǎn)品的運(yùn)輸和保存：
視天氣狀況和運(yùn)輸距離遠(yuǎn)近，公司與客戶協(xié)商后選擇下述方式中的一種進(jìn)行。
1)1mL凍存細(xì)胞懸液裝于1.8ml的凍存管中，置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進(jìn)行運(yùn)輸；收到細(xì)胞后請盡快解凍復(fù)蘇細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，如無法立刻進(jìn)行復(fù)蘇操作，凍存細(xì)胞可在-80℃的條件下保存1個(gè)月。2)T-25培養(yǎng)瓶充滿完全培養(yǎng)基后進(jìn)行常溫運(yùn)輸；收到細(xì)胞后請鏡下觀察細(xì)胞生長狀態(tài)，如鋪瓶率超過85%請立即進(jìn)行傳代操作，如懸浮的細(xì)胞較多，請將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細(xì)胞能夠再次貼壁。
注意事項(xiàng)：
1)原代培養(yǎng)的分離細(xì)胞在初次接觸體外環(huán)境時(shí)，雖然被分散成單個(gè)細(xì)胞，但它們之間的互相影響還是存在的， 而且這種影響對(duì)細(xì)胞能否存活是非常重要的。在這些細(xì)胞之間能產(chǎn)生一些促生長的活性物質(zhì)， 使細(xì)胞彼此互相促進(jìn)存活和生長。如果接種的細(xì)胞密度過低， 細(xì)胞之間的促生長作用很小， 雖然營養(yǎng)物質(zhì)很充足， 也很難使細(xì)胞適應(yīng)從體內(nèi)的組織環(huán)境到被分散后進(jìn)入獨(dú)立生存環(huán)境的變化過程。 如果接種的細(xì)胞密度過大，會(huì)導(dǎo)致營養(yǎng)物質(zhì)供應(yīng)不足， 代謝廢物積累較快需要經(jīng)常換液和傳代。
2)原代培養(yǎng)時(shí)初始培養(yǎng)在組織分散和分離細(xì)胞時(shí)細(xì)胞可能會(huì)受到嚴(yán)重的損傷。適當(dāng)增大原代培養(yǎng)接種的細(xì)胞密度， 給培養(yǎng)的細(xì)胞提供更多的類似于在體內(nèi)時(shí)細(xì)胞之間的相互作用， 會(huì)極大提高原代培養(yǎng)的細(xì)胞在體外存活率。待細(xì)胞適應(yīng)體外環(huán)境后進(jìn)行傳代培養(yǎng)時(shí)再以較低的密度接種和培養(yǎng)。
3)由于細(xì)胞之間的相互的內(nèi)在聯(lián)系被打破，分離細(xì)胞在體外培養(yǎng)時(shí)經(jīng)歷的生存環(huán)境改變很大，在體外存活和生長的難度相應(yīng)增加。 對(duì)于貼壁依賴性細(xì)胞來說，盡快使接種的細(xì)胞貼壁，是決定培養(yǎng)能否成功的關(guān)鍵?？梢栽诮臃N后先將培養(yǎng)瓶置培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng) 3h 到 5h，由于細(xì)胞懸液中帶有少量培養(yǎng)液， 細(xì)胞即可以維持存活， 又可以很快接觸到培養(yǎng)瓶底壁， 是細(xì)胞迅速黏附于底物，待細(xì)胞貼壁后，再補(bǔ)足培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)。
3、分離細(xì)胞培養(yǎng)法—懸浮型細(xì)胞培養(yǎng) 。
公司正在出售的產(chǎn)品：
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SGC7901/DDP (STR)人胃癌順鉑耐藥株 |
ID8+LUC小鼠卵巢上皮癌細(xì)胞熒光素酶標(biāo)記 |
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原代神經(jīng)干細(xì)胞培養(yǎng)體系 |
MLE-12小鼠肺上皮細(xì)胞 |
C4orf46 Antibody Blocking Peptide |
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原代腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)體系 |
Renca 小鼠腎癌細(xì)胞 |
CENPF Antibody Blocking Peptide |
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原代內(nèi)膜細(xì)胞培養(yǎng)體系 |
CHO-K1中國倉鼠卵巢細(xì)胞k1 亞克隆系 |
TMEM157 Antibody Blocking Peptide |
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DMEM（低糖）基礎(chǔ)培養(yǎng)基 |
IEC-鼠回腸細(xì)胞 |
CSTF2T Antibody Blocking Peptide |
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MEM（無酚紅）基礎(chǔ)培養(yǎng)基 |
PK-15豬腎細(xì)胞 |
Phospho-GRB10 (Tyr67) Antibody Blocking Peptide |
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鹽酸阿霉素 |
OAR-L1綿羊肺成纖維細(xì)胞（原代永生化） |
NEFL Antibody Blocking Peptide |
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L-脯氨酸 |
A375+EGFP人惡性黑色素瘤細(xì)胞+EGFP |
NTAN1 Antibody Blocking Peptide |
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次黃嘌呤 |
huh-7.5.1人肝癌細(xì)胞 |
GRIP2 Antibody Blocking Peptide |
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重組人表皮生長因子 |
HMC3人小膠質(zhì)細(xì)胞 |
ESF1 Antibody Blocking Peptide |
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人腫瘤壞死因子alpha |
Bel-7405人肝癌細(xì)胞 |
JDP2 Antibody Blocking Peptide |
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人白細(xì)胞介素4 |
CaSKi人宮頸癌細(xì)胞 |
Phospho-Wee1 (Ser642) Antibody Blocking Peptide |
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真jun劑，2000 × |
DMS 53人肺癌細(xì)胞 |
MGLAP Antibody Blocking Peptide |
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離心管 |
HACAT+LUC人永生化表皮細(xì)胞熒光素酶標(biāo)記 |
JNK1/3 Antibody Blocking Peptide |
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CT26小鼠結(jié)腸癌細(xì)胞 |
HEK-293A人胚腎細(xì)胞 |
大鼠脈絡(luò)膜微血管內(nèi)皮細(xì)胞STK32A Antibody Blocking Peptide |