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RT-PCR常見RNA酶抑制劑是什么
日期:2024-12-27 17:47
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摘要:
逆轉錄-聚合酶鏈反應 (Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction,RT-PCR)的原理是:提取組織或細胞中的總 RNA,以其中的 mRNA 作為模板,采用 Oligo(dT)或隨機引物利用逆轉錄酶反轉錄成 cDNA。常見RNA酶抑制劑:
1. 焦磷酸二乙酯(DEPC):是一種強烈但不徹底的RNA酶抑制劑。它通過和RNA酶的活性基團組氨酸的咪唑環(huán)結合使蛋白質變性,從而抑制酶的活性。
2. 異硫氰酸胍:目前被認為是有效的RNA酶抑制劑,它在裂解組織的同時也使RNA酶失活。它既可破壞細胞結構使核酸從核蛋白中解離出來,又對...
逆轉錄-聚合酶鏈反應 (Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction,RT-PCR)的原理是:提取組織或細胞中的總 RNA,以其中的 mRNA 作為模板,采用 Oligo(dT)或隨機引物利用逆轉錄酶反轉錄成 cDNA。常見RNA酶抑制劑:
1. 焦磷酸二乙酯(DEPC):是一種強烈但不徹底的RNA酶抑制劑。它通過和RNA酶的活性基團組氨酸的咪唑環(huán)結合使蛋白質變性,從而抑制酶的活性。
2. 異硫氰酸胍:目前被認為是有效的RNA酶抑制劑,它在裂解組織的同時也使RNA酶失活。它既可破壞細胞結構使核酸從核蛋白中解離出來,又對RNA酶有強烈的變性作用。
3. 氧釩核糖核苷復合物:由氧化釩離子和核苷形成的復合物,它和RNA酶結合形成過渡態(tài)類物質,幾乎能完全抑制RNA酶的活性。
4. RNA酶的蛋白抑制劑(RNasin):從大鼠肝或人胎盤中提取得來的酸性糖蛋白。RNasin是RNA酶的一種非競爭性抑制劑,可以和多種RNA酶結合,使其失活。
5. 其它:SDS、尿素、硅藻土等對RNA酶也有一定抑制作用。