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細胞穩(wěn)轉(zhuǎn)株構(gòu)建病毒法步驟
日期：2024-12-27 17:47
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摘要：
細胞穩(wěn)轉(zhuǎn)株構(gòu)建病毒法步驟：
1、確定目標細胞系的相關(guān)信息，細胞的培養(yǎng)條件，細胞的增值速度，支原體污染情況；
2、 預(yù)實驗確定MOI值，可通過查閱文獻確定慢病毒在目標細胞系中的MOI值也可參考查閱得到的數(shù)據(jù)，設(shè)計梯度實驗，摸索合適MOI；
3、 預(yù)實驗確定篩選藥 物用量，常用的藥 物篩選有：puro、G418、潮霉素等；
4、 細胞鋪板，將需要的細胞量接種于合適的培養(yǎng)皿中；
5、 細胞感染，通過接種的細胞量及預(yù)實驗得來的MOI來計算添加的病毒體積；
6、 撤病毒，第2天，一般不超過24h換...
細胞穩(wěn)轉(zhuǎn)株構(gòu)建病毒法步驟：
1、確定目標細胞系的相關(guān)信息，細胞的培養(yǎng)條件，細胞的增值速度，支原體污染情況；
2、 預(yù)實驗確定MOI值，可通過查閱文獻確定慢病毒在目標細胞系中的MOI值也可參考查閱得到的數(shù)據(jù)，設(shè)計梯度實驗，摸索合適MOI；
3、 預(yù)實驗確定篩選藥 物用量，常用的藥 物篩選有：puro、G418、潮霉素等；
4、 細胞鋪板，將需要的細胞量接種于合適的培養(yǎng)皿中；
5、 細胞感染，通過接種的細胞量及預(yù)實驗得來的MOI來計算添加的病毒體積；
6、 撤病毒，第2天，一般不超過24h換液；
7、 轉(zhuǎn)染48h后選擇對應(yīng)的抗性 藥 物進行篩選；
8、 篩選結(jié)束后進行單克隆化，選擇陽性克隆進行培養(yǎng)。